“宣威”多结节非小细胞肺癌驱动基因突变分析

目的:探讨多结节非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的驱动基因突变情况与临床病理特征的关系,为多结节NSCLC患者治疗提供分子诊断依据。方法:本研究共纳入2018年1月至2023年10月间云南省肿瘤医院分子诊断中心检测的121例多结节NSCLC患者的253个肺结节肿瘤组织标本,以第二代测序(NGS)技术或扩增阻滞突变系统PCR(ARMS-PCR)技术检测多结节NSCLC组织中驱动基因突变情况,分析其与患者临床病理特征的关系,比较不同结节间肺癌驱动基因的突变异质性。结果:与非“宣威”NSCLC相比,“宣威”多结节NSCLC患者驱动基因突变具有显著的地域特点,表现在“宣威”患者具有较低(20%)的EGFR敏感突变(L858R、19-del)及较高(27.26%)的EGFR少见突变(主要为G719/S768I、G719);“宣威”多结节NSCLC患者的KRAS突变率(27.27%)亦显著高于非“宣威”患者突变率(12.59%)(P<0.05)。此外,“宣威”多结节NSCLC患者驱动基因突变不一致率高达69.23%,远高于非“宣威”患者驱动基因突变不一致率(55.07%)(P<0.05)。结论:“宣威”多结节NSCLC患者具有较高的EGFR少见突变及KRAS突变率,同一患者不同病灶之间存在更高的驱动基因突变异质性,本研究将为“宣威”多结节NSCLC的诊疗策略提供更多的选择。

纳米孔测序在肿瘤并发感染中的应用

目的评估纳米孔测序在肿瘤患者并发感染性疾病中的临床应用价值,为肿瘤患者感染性疾病的快速、灵敏诊断提供新的检测方法。方法收集2022年7月至8月云南省肿瘤医院36例疑似感染的肿瘤患者样本46份,利用纳米孔测序鉴定样本中的病原微生物。结果纳米孔测序细菌检出率72.22%,真菌检出率31.48%,病毒检出率42.59%。细菌和真菌检出率均较微生物培养法(23.91%和10.87%)明显升高(χ^(2)=23.19,P<0.0001;χ^(2)=13.14,P=0.0003)。纳米孔测序结果与微生物培养结果比较,检出的细菌和真菌种属明显增多。结论纳米孔测序鉴定病原微生物具有检出率高,检测病原菌种属广,诊断快速的优势,在肿瘤并发感染性疾病的诊断中具有潜在的临床应用价值。

云南地区卵巢癌患者的基因同源重组缺陷状态和BRCA1/2基因突变频率及其临床意义

目的:采用基于中国人群单核苷酸多态性位点开发的同源重组缺陷(HRD)检测工具评估云南地区卵巢癌患者的HRD状态和BRCA1/2基因突变频率并探讨其临床意义。方法:共纳入2021年1月至2023年5月间在云南省肿瘤医院收治的卵巢癌患者248例,HRD状态采用基因组瘢痕评分法(GSS)(主要依据拷贝数的长度、类型、位置及基因组断片)或HRD评分法(杂合性缺失、端粒等位基因失衡及大片段移位等基因组不稳定事件的总和)进行评估,当组织样本的GSS≥50分或HRD评分≥42分者或检测到有害的BRCA1/2基因突变时HRD被定义为阳性。分析患者HRD状态与临床病理特征的关系。结果:248名卵巢癌患者中70.97%的患者HRD呈阳性,其中BRCA1/2基因突变率为30.65%。Ⅲ~Ⅵ期、高级别浆液腺癌的卵巢癌患者具有更高的HRD阳性率(均P<0.01),HRD评分更高的患者其合并其他基因突变的频率也越高(P<0.05)。HRD状态与卵巢癌的病理类型、临床分期和其他基因突变均有关联(均P<0.01)。结论:云南地区卵巢癌患者HRD阳性率较高,HRD阳性的卵巢癌患者可以从聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗中获得更大的收益。

外周T细胞淋巴瘤化疗耐药分子诊断及治疗的研究进展

外周T细胞淋巴瘤是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤,具有高度侵袭性、病程进展快、预后较差等特点。化疗是目前治疗该疾病的重要手段。外周T细胞淋巴瘤细胞对化疗耐药是影响相关治疗疗效的主要因素。本文针对目前外周T细胞淋巴瘤化疗耐药的分子诊断及复发耐药后的治疗方案进行综述。

非小细胞肺癌患者外周血ctDNA样本中EGFR-T790M基因突变分析

目的采用液体活检技术检测171例NSCLC患者外周血ct DNA样本中EGFR-T790M的突变情况,并结合其临床病理特征进行分析。方法采用超级扩增阻碍突变系统(super ARMS)法检测171例样本中EGFR-T790M的突变情况。结果在171例样本中T790M基因的突变率为7.60%(13/171),且多数为Ⅲb~Ⅳ期的肺癌患者。未经TKIs治疗样本的T790M突变率为2.05%(3/146)明显低于经TKIs治疗后样本的突变率40.00%(10/25,P<0.001)。服用第一代TKI药物时间在6~10个月或>10个月样本的T790M突变率分别为75.00%(3/4)和60.00%(6/10)明显高于服药时间<6个月的T790M突变率9.10%(1/11,P=0.033,P=0.023)。结论 EGFR-T790M基因突变多见于有TKI用药史且服药时间>6个月的晚期NSCLC患者,动态检测EGFR-T790M的突变状态可有效指导临床的用药。

响应面分析法优化超声提取兰坪被毛孢多糖和D-甘露醇

以兰坪虫草无性型(兰坪被毛孢)固体发酵产物为材料,以水为提取溶剂,在常温条件下利用响应面分析法优化虫草多糖和D-甘露醇的超声提取综合工艺。在超声常温水提的单因素实验的基础上,运用响应面法进一步考察液固比、超声时间、超声功率对虫草多糖和D-甘露醇综合提取率的影响,以优化提取工艺。实验得到较优综合提取工艺条件为:液固比43∶1m L/g,超声时间为50min,超声功率为56W。在该工艺条件下虫草多糖提取率为23.06%,D-甘露醇提取率为2.30%。

非小细胞肺癌患者肿瘤组织多驱动基因联合检测及其临床意义

目的探讨EGFR、KRAS基因突变及ALK、ROS1基因融合在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中的检出率,并分析与NSCLC临床病理特征的关系。方法收集NSCLC手术标本86例,采用荧光PCR法检测EGFR、KRAS突变及ALK、ROS1基因融合,并分析EGFR、KRAS、ALK及ROS1基因改变与患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、有无淋巴结转移等临床病理特征的相关性。结果 NSCLC肿瘤组织中驱动基因总突变率为62.8%(54/86),其中EGFR基因突变占总突变的76.0%(41/54);KRAS基因突变占总突变的9.3%(5/54);ALK基因融合占总突变的13.0%(7/54),其中1例患者存在EGFR 19缺失突变与ALK融合共存;ROS1基因融合占总突变的3.8%(2/54)。NSCLC的临床病理特征显示,EGFR基因突变在女性、腺癌患者中突变率高(P<0.05);与患者年龄、是否吸烟、有无淋巴结转移无明显相关(P>0.05);KRAS、ALK、ROS1基因改变与NSCLC的临床病理特征无明显相关(P>0.05)。结论 NSCLC中EGFR、ALK基因均存在较高的突变率,临床医师应给予高度重视;KRAS、ROS1基因改变以及驱动基因双突变共存型基因突变率虽低,但其意义重大不容忽视。

云南地区非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨云南地区非小细胞肺癌外周血中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变及与临床病理特征的关系,为该地区的肺癌个体化靶向治疗奠定基础。方法应用突变扩增阻滞系统(amplification refractory mutation system,ARMS)检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)外周血中EGFR基因第18、19、20及2l外显子突变情况,统计分析各类突变与患者临床病理特征的相关性。结果在364例患者中,EGFR基因突变者93例(25.5%)。其中EGFR 18 G719X突变占3.2%(3/93),EGFR 19缺失突变占48.4%(45/93),EGFR 20 S768I、T790M、20ins突变分别占3.2%(3/93)、2.2%(2/93)、3.2%(3/93),EGFR 21 L858R、L861Q突变分别占26.9%(25/93)、1.1%(1/93);双突变比例占11.8%,其中3例样本3.2%(3/93)存在G719X、S768I双突变,4例样本4.3%(4/93)存在19Del、T790M双突变,1例样本1.1%(1/93)存在19Del、L858R双突变,1例样本1.1%(1/93)存在L858R、S768I双突变,2例样本2.2%(2/93)存在S768I、T790M双突变。EGFR基因突变与患者性别、临床分期、组织学类型相关(P<0.005),而与患者年龄、是否吸烟无明显相关(P>0.05)。结论云南地区ⅢB~Ⅳ期NSCLC患者外周血中,女性腺癌突变率较高,且该地区NSCLC患者外周血EGFR基因突变存在外显子19缺失突变为主及双突变率较高的特征。使用ARMS技术检测NSCLC患者外周血EGFR基因突变可为临床使用EGFR-TKIs提供准确的指导。

宣威地区肺腺癌病人肺组织特异miRNAs表达谱和靶基因及其信号通路预测

目的筛选出宣威地区肺腺癌病人肺组织miRNAs差异表达谱,预测其相关靶基因和信号通路。方法选取来自宣威地区肺腺癌24例和非宣威地区肺腺癌10例患者手术切除的肺癌组织和正常肺组织标本,miRNAs芯片检测34对肺癌切除标本,筛选宣威肺腺癌miRNAs差异表达谱,AGO分析和KEGG Pathway分析预测其miRNAs的生物与肺癌相关的靶基因和信号通路。结果 miRNAs芯片检测:与非宣威肺腺癌比较,宣威肺腺癌差异表达显著的特异miRNAs 34个:表达上调的miRNAs有23个,表达下调的miRNAs有11个。AGO富集分析及KEGG数据库映射分析发现:预测主要集中在PI3K/Alt信号通路附近,其预测靶基因有:GF、RTK、SOS、IRS1、BCAP、CYTOKINSR、ECM、ITGB、FAK和GβY,可能对肺癌生物学功能产生影响的靶基因主要集中在PI3K/Alt,WNT和MAPK通路。结论筛选出这些特异性miRNAs可能在宣威肺腺癌癌变和进展中起重要作用,预测的靶基因可能与调节PI3K/Alt,WNT和MAPK信号通路的作用有关。

ERP环境下企业动态目标成本管理研究

传统的标准成本管理模式随着经济的不断发展,其弊端正在越来越多的显露出来,已不能满足现在经济发展的要求。在传统的标准成本管理模式下,企业的成本受到人力、物力、财力等诸多因素的影响,因而无法实现各环节的最优控制。在现代成本管理中使用ERP系统,能够根据市场的需求来对生产中各成本进行即时监控,从而实现各业务环节的成本控制。在企业的管理中采取ERP系统,有利于成本控制,有利于信息及时性,有利于产品品质的提高,有利于企业整体发展。

兰坪虫草对小鼠肺纤维化的改善作用研究

目的:研究兰坪虫草对小鼠肺纤维化的改善作用。方法:采用C57BL/6J雄性小鼠,分为正常对照组、模型组、醋酸地塞米松阳性对照组及兰坪虫草菌粉低、高剂量组和兰坪虫草菌粉水提物低、高剂量组,共7组。各组小鼠造模成功后,于给药第28天处死,计算小鼠的肺指数、胸腺指数和脾指数,检测血清免疫球蛋白G(IgG)含量,同时取肺组织进行HE染色、Masson染色并观察其病理变化情况,检测肺组织羟脯氨酸(HYP)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:兰坪虫草菌粉及其水提物可显著降低肺纤维化小鼠肺指数,显著升高胸腺指数、脾指数、血清IgG含量和肺组织SOD活性,减轻小鼠肺泡炎和肺纤维化程度并显著降低肺组织中HYP、MDA含量。结论:兰坪虫草菌粉及其水提物对小鼠肺纤维化具有改善作用。

SOX4介导的EMT在肺癌中的作用及其机制

目的探讨性别决定基因-相关蛋白结构域4(SOX4)调控Wnt、转化生长因子-β(TGF-β)等信号通路及胞内外因子对肺癌细胞的影响及可能的分子机制。方法构建pEX-2-SOX4过表达质粒、GFP空载质粒、shRNA干扰质粒及shNC对照质粒;采用脂质体法对细胞进行转染,通过细胞生物学及分子实验验证过表达及沉默SOX4基因后上皮细胞-间充质转化(EMT)相关基因在转录与翻译水平的变化情况,以推测SOX4介导的EMT对细胞增殖、迁移与侵袭的可能机制。结果细胞功能实验证实了SOX4能促进肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭能力,伴有EMT正向调节因子N-钙黏蛋白(N-Cad)、纤维连接蛋白(FN)、波形蛋白(Vim)、Snail、ADAM28、β-catenin的表达增加,EMT抑制因E-Cad表达的下调,但过表达SOX4的16HBE、SK-MES-1细胞主要表现为EMT抑制因子Smad7、TJP1(ZO-1)、TJP2(ZO-2)、WIF1显著上调,而在沉默组中,前文所述因子表达水平与pEX-2-SOX4组相反。这些因子大都直接或间接通过Wnt及TGF-β通路参与肺癌EMT的调控。结论SOX4可通过Wnt及TGF-β为代表的信号通路介导肿瘤细胞EMT的发生,促进肺癌的增殖、迁移与侵袭。

Super-ARMS法检测云南地区非小细胞肺癌患者外周血中EGFR突变及其临床意义

目的:探讨使用超级扩增阻滞突变系统(Super-ARMS)法检测云南地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与临床病理特征之间的关系。方法:收集2017年1月到2018年12月云南省肿瘤医院分子诊断分中心共检测的222例NSCLC患者外周血,以Super-ARMS法检测外周血浆中EGFR基因突变并分析其与临床病理特征的关系,同时分析影响EGFR突变的独立危险因素。结果:222例NSCLC患者的外周血浆中,EGFR基因突变阳性81例、突变率为36.5%,其中19号外显子缺失和L858R基因点突变最常见(占总突变的75.3%)。女性突变较男性高(45.9%vs 27.0%);<60岁患者突变率高于≥60岁患者(43.2%vs 28.8%)(均P<0.05或P<0.01);无吸烟史、无根治性手术史、腺癌、晚期和无化疗史患者EGFR基因突变率较高(43.9%vs 21.6%,39.2%vs 21.2%,43.9%vs 4.8%,39.7%vs 23.3%、44.0%vs 23.5%)(P<0.05或P<0.01)。多因素分析显示,年轻、无吸烟史、腺癌、无手术史是EGFR基因突变的独立危险因素(均P<0.01)。结论:在云南地区NSCLC患者外周血浆中,年龄<60岁、腺癌、不吸烟患者EGFR基因突变率更高,Super-ARMS法对肺癌患者外周血EGFR突变检测更灵敏。

人工培养的兰坪虫草子实体中核苷类成分研究

兰坪虫草(Ophiocordyceps lanpingensis)产于我国滇西北地区,是一种寄生在钩蝠蛾幼虫上的虫生真菌。本文以四种不同培养基培养的兰坪虫草子实体为原料,采用高效液相色谱法(HPLC)同时检测10种核苷类成分(尿嘧啶、尿苷、2'-脱氧尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸腺、腺苷、2'-脱氧腺苷、虫草素),并将其与野生冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、野生兰坪虫草进行对比分析,初步评估人工培养兰坪虫草子实体的质量。结果表明,以大米和蚕蛹粉为主要原料的培养基所培养的兰坪虫草子实体生长时间平均为40 d,周期短于其他三种培养方式;且其腺苷、总核苷含量分别为2744μg/g和8015μg/g,明显高于野生冬虫夏草、野生兰坪虫草,有较好的质量水平。因此,人工培养的兰坪虫草子实体具有重要的研究价值和应用潜力。

云南省肺癌患者表皮生长因子受体基因突变的临床特征分析

目的:探讨云南省肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)突变特征,为云南省肺癌的临床个体化靶向治疗提供依据。方法:收集云南省肿瘤医院2014年1月至2019年8月2967例行EGFR基因检测肺癌患者的人口学资料和临床资料,分析EGFR突变情况。结果:2967例肺癌患者的EGFR突变率为46.2%(1370/2967)。单因素分析显示,女性突变率高于男性(P<0.001);随年龄增长,突变率呈下降趋势(P=0.030);少数民族突变率高于汉族(P=0.012);无吸烟史患者突变率高于吸烟史患者(P<0.001);无饮酒史患者突变率高于饮酒史患者(P<0.001);无肺癌家族史患者突变率高于肺癌家族史患者(P=0.008);腺癌突变率高于鳞癌、腺鳞癌、小细胞癌及其他病理类型(P<0.001);早期患者突变率高于晚期患者(P<0.001);组织标本检测突变率高于细胞学检测和外周血检测(P<0.001);宣威地区突变率低于非宣威地区患者(P<0.001)。logistic多因素分析显示,仅性别(P<0.001)、年龄(P=0.036)、吸烟史(P<0.001)、病理类型(P<0.001)、标本类型(P<0.001)和是否宣威地区(P<0.001)是EGFR基因突变的独立影响因素,女性、不吸烟、腺癌、非宣威地区、病理组织标本、年轻肺癌患者更易发生EGFR基因突变。1370例EGFR突变患者的主要突变类型为19-Del和L858R,占38.2%。宣威地区G719X、G719X+L861Q、G719X+S768I和S768I的突变率高于非宣威地区(P<0.05);而19-Del、L858R、20-ins的突变率低于非宣威地区(P<0.05)。少数民族19-Del的突变率高于汉族(P<0.001);汉族G719X+L861Q的复合突变率高于少数民族(P=0.005)。结论:云南省肺癌患者EGFR突变率与亚洲和中国整体人群突变率相近,女性、不吸烟、腺癌、年轻患者EGFR突变率较高,宣威地区患者突变率较低。最常见的EGFR突变类型为19-Del和L858R,宣威地区以L858R突变为主,非宣威地区以19-Del为主。云南省肺癌患者稀有突变(G719X、G719X+L861Q、G719X+S768I、S768I)的突变率较高,宣威地区稀有突变率高于非宣威地区,汉族G719X+L861Q的复合突变率高于少数民族。

云贵高原地区非小细胞肺癌患者靶向治疗驱动基因的表达情况和突变特征

目的:探讨云贵高原地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者驱动基因的表达情况及其突变分布特征,为高发区肺癌的个体化分子靶向治疗提供依据。方法:收集云南省肿瘤医院2016年1月至2019年8月收治的行肺癌8基因[表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、鼠类肉瘤病毒癌基因(RAS)、RET原癌基因(RET)、鼠肉瘤病毒v-Raft同源致癌基因(BRAF)、肉瘤致癌因子(ROS1)、人表皮生长因子受体2(HER-2)、细胞间质上皮转化因子(MET)]联合检测的2249例NSCLC患者的临床病理资料,分析云贵高原地区NSCLC驱动基因的表达情况及其突变分布特征。结果:云贵高原地区NSCLC驱动基因表达的阳性率为67.05%(1508/2249),其中西双版纳、玉溪、宣威、红河和曲靖地区的阳性率较高,分别为76.92%、72.38%、71.88%、71.79%和71.24%;回族、哈尼族、壮族、布依族、满族、土家族和阿昌族患者的阳性率较高,分别为84.38%、85.00%、75.00%、100%、100%、100%和100%。NSCLC患者驱动基因的阳性率与性别(P<0.001)、吸烟史(P<0.001)、年龄(P<0.001)、病理类型(P<0.001)及是否宣威地区(P=0.027)有关,与民族(P=0.748)和肺癌家族史(P=0.676)无关。EGFR、RAS、BRAF、HER-2和MET基因突变率分别为44.46%、10.98%、1.24%、0.89%和0.76%,ALK、RET、ROS1基因重排率分别为4.67%、1.29%和0.89%。女性患者EGFR突变率为56.67%,高于男性患者(33.19%,P<0.001);男性患者RAS突变率为12.66%,高于女性患者(9.17%,P=0.010)。汉族患者RAS突变率为11.49%,高于少数民族患者(7.17%,P=0.032)。宣威地区患者RAS突变率为24.74%,高于非宣威地区患者(8.15%,P<0.001);而EGFR突变率为40.63%,低于非宣威地区患者(45.25%,P=0.045);ALK重排率为1.56%,低于非宣威地区患者(5.31%,P<0.001);宣威地区未检出HER-2突变患者。无吸烟史患者EGFR突变率为51.10%,高于有吸烟史患者(29.70%,P<0.001);无吸烟史患者ALK重排率为5.35%,也高于有吸烟史患者(3.16%,P<0.001);无吸烟史患者RAS突变率为9.34%,低于有吸烟史患者(14.63%,P=0.008)。结论:云贵高原地区NSCLC驱动基因表达的阳性率略低于全国平均水平,其中EGFR、RAS突变率与国内平均水平相近,ROS1、ALK和RET基因重排率以及BRAF、HER-2和MET基因突变率略低于全国平均水平。EGFR、RAS、ALK基因在云贵高原地区NSCLC患者中阳性率较高,且具有不同的人口学特征和临床特征,在选择靶向治疗人群中具有重要意义。