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基于三维培养模型的辐射诱导表观遗传改变研究进展
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作者 刘雁 杜亚蓉 孙坤 《生命科学研究》 CAS 2023年第3期223-228,共6页
相比于传统的单层细胞培养,三维细胞培养(three-dimensional cell culture,TDCC)可以更准确地模拟体内细胞的生长环境,近年来被越来越多地应用于生物基础研究。表观遗传修饰与细胞癌变等许多细胞过程联系紧密。辐射是肿瘤放射治疗的主... 相比于传统的单层细胞培养,三维细胞培养(three-dimensional cell culture,TDCC)可以更准确地模拟体内细胞的生长环境,近年来被越来越多地应用于生物基础研究。表观遗传修饰与细胞癌变等许多细胞过程联系紧密。辐射是肿瘤放射治疗的主要手段之一,肿瘤放射治疗过程常常伴随着细胞表观遗传的动态变化,它会诱导机体产生包括DNA甲基化、染色质重塑、组蛋白修饰和非编码RNA调控在内的表观遗传的改变。基于TDCC模型探究辐射诱导表观遗传调控发生的机制,对于肿瘤患者的治疗和防护具有重要意义。 展开更多
关键词 三维细胞培养(TDCC) 表观遗传调控 电离辐射 微RNA DNA甲基化 染色质重塑
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一氧化氮合成酶高表达促进辐射旁效应的产生 被引量:2
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作者 杜亚蓉 潘冬 +3 位作者 陈亚雄 薛刚 任振新 胡步荣 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2013年第2期13-18,共6页
本研究中建立了内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)稳定转染表达细胞系,探讨其在辐射诱导旁效应中的促进作用。利用荧光探针DAF-FM与Griess试剂盒,间接检测稳定表达细胞系辐照后细胞内、外一氧化氮(NO)浓度变化;表达细胞系辐照后培养液转移至... 本研究中建立了内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)稳定转染表达细胞系,探讨其在辐射诱导旁效应中的促进作用。利用荧光探针DAF-FM与Griess试剂盒,间接检测稳定表达细胞系辐照后细胞内、外一氧化氮(NO)浓度变化;表达细胞系辐照后培养液转移至受体细胞(MRC5)共孵育,检测受体细胞DNA双链断裂,辐照细胞与受体细胞共培养2d,检测微核形成率。研究发现,辐射后15min,供体细胞NO诱导水平达到峰值;eNOS高表达细胞系辐照后15 min时间点的转培养液诱导受体细胞产生较高的DNA双链断裂;eNOS高表达细胞系辐照后与受体细胞共培养,诱导受体细胞出现更多的微核。结果表明:NOS高表达促进辐射旁效应的产生,其催化产生的NO是主要的诱导因子之一。 展开更多
关键词 一氧化氮合成酶 一氧化氮 辐射 旁效应
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沙棘总黄酮抑制肺癌A549增殖和迁移作用及机理 被引量:12
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作者 贾丛 杜亚蓉 孙坤 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期937-945,952,共10页
为探究三种沙棘总黄酮(TFH)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响,并探讨其分子作用机制,选择不同浓度的西藏沙棘(Hippophae tibetana Schlecht)、中国沙棘(H.rhamnoides L.subsp.sinensis Rousi)、肋果沙棘(H.neurocarpa)总黄酮作用... 为探究三种沙棘总黄酮(TFH)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响,并探讨其分子作用机制,选择不同浓度的西藏沙棘(Hippophae tibetana Schlecht)、中国沙棘(H.rhamnoides L.subsp.sinensis Rousi)、肋果沙棘(H.neurocarpa)总黄酮作用于A549细胞。通过MTT检测细胞相对活力,平板克隆形成实验及软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡比例。选择效果最佳的西藏沙棘总黄酮应用细胞划痕实验及Transwell实验分析该化合物对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot检测MMP9、E-cadherin等侵袭迁移相关蛋白表达。敲低E-cadherin基因检测沙棘总黄酮对细胞迁移能力的影响。结果显示,三种沙棘总黄酮均对A549细胞系具有增殖抑制作用,抑制作用依次为:西藏沙棘>中国沙棘>肋果沙棘。西藏沙棘总黄酮可显著性抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭迁移能力(P<0.05)。实验组中MMP9、MMP2、TGF-β、N-cadherin表达水平显著降低,E-cadherin表达水平上调。我们发现在A549细胞中敲低E-cadherin,西藏沙棘总黄酮可逆转迁移增加。以上研究表明西藏沙棘总黄酮对肺癌A549增殖抑制作用具有明显的优势,且西藏沙棘总黄酮可明显抑制肺癌A549细胞的侵袭迁移能力,并可能与下调细胞中的TGF-β抑制MMP9表达并阻止肺癌EMT有关。 展开更多
关键词 沙棘总黄酮 A549细胞 增殖 迁移 EMT
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H7N2禽流感病毒HA的分离纯化及其糖链谱研究 被引量:1
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作者 李学甜 孙宇 +6 位作者 杜亚蓉 王喜龙 张沛欣 钟耀刚 马恬然 王秀荣 李铮 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第6期551-562,共12页
血凝素(HA)是位于流感病毒囊膜表面的一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,是流感病毒结合宿主细胞表面受体,介导病毒入胞的关键分子,也是中和抗体以及疫苗研制的重要靶标.HA表面糖基化与病毒毒力、感染宿主范围等密切相关,且其表面糖链变化会影响其结... 血凝素(HA)是位于流感病毒囊膜表面的一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,是流感病毒结合宿主细胞表面受体,介导病毒入胞的关键分子,也是中和抗体以及疫苗研制的重要靶标.HA表面糖基化与病毒毒力、感染宿主范围等密切相关,且其表面糖链变化会影响其结构与功能.然而目前关于流感病毒HA糖基化的研究主要集中在其糖基化位点上,而对于HA上详细的糖链结构知之甚少.本文应用禽流感病毒特异识别的唾液酸糖链(SAα2-3Gal)受体,制备特异的糖链磁性微粒复合物,进而从H7N2禽流感病毒中分离纯化HA,并采用SDS-PAGE及质谱技术进行鉴定.确定提取物系HA后,进一步利用凝集素芯片联合质谱技术研究禽流感病毒H7N2的HA表面糖型,结果显示H7N2禽流感病毒HA表面主要含有岩藻糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺、甘露糖、N-乙酰葡糖胺等糖链结构,共获得16个糖链结构较为准确的寡糖,这些糖链可能与HA生物学功能相关.本研究有助于揭示禽流感病毒感染宿主的糖链作用机制,有助于设计制备针对HA相关的糖链疫苗. 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 糖链谱 凝集素芯片 质谱
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Effect of TSPAN4 Gene on Migration and Invasion of Ability
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作者 Du Yarong Chen Yaxiong Wang Jufang 《IMP & HIRFL Annual Report》 2022年第1期173-174,共2页
Tetraspanin family molecules are cell surface proteins with 4 transmembrane domains that form complexes called tetraspanin webs by associating with various adhesion molecules,receptors and other tetraspanin molecules.... Tetraspanin family molecules are cell surface proteins with 4 transmembrane domains that form complexes called tetraspanin webs by associating with various adhesion molecules,receptors and other tetraspanin molecules.It is known that the tetraspanins affect various cell functions such as cell adhesion,signal transduction,cell proliferation,cell movement,and cell differentiation.TSPAN4 is a tetraspanin belonging to the transmembrane 4 superfamily that forms complexes with the integrins alpha3beta1 and alpha6beta1^([1]). 展开更多
关键词 COMPLEXES DIFFERENTIATION TSP
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基于CRISPR/Cas9基因编辑系统构建敲除TSPAN4基因的非小细胞肺癌细胞系 被引量:1
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作者 刘雁 杜亚蓉 孙坤 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第2期203-212,共10页
利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除TSPAN4基因,构建TSPAN4基因稳定敲除的非小细胞肺癌A549细胞株,并检测其对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,为后期探讨迁移体在非小细胞肺癌转移过程中的作用提供实验基础。以质粒pSpCas9(BB)-2A-Puro(px4... 利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除TSPAN4基因,构建TSPAN4基因稳定敲除的非小细胞肺癌A549细胞株,并检测其对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,为后期探讨迁移体在非小细胞肺癌转移过程中的作用提供实验基础。以质粒pSpCas9(BB)-2A-Puro(px459)为载体,与设计好的引物连接后得到敲除载体px459-sgRNA-TSPAN4。以jetPRIME■为转染试剂,将构建好的质粒转染至A549细胞系,嘌呤霉素筛选单克隆细胞株并使用Western blot实验鉴定A549细胞系中TSPAN4基因的敲除效果,细胞划痕实验和Transwell实验检测敲除TSPAN4基因对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。该研究成功构建了TSPAN4基因编辑质粒px459-sgRNA-TSPAN4。Western blot结果显示敲除TSPAN4基因能够显著降低A549细胞株中TSPAN4蛋白表达量;敲除TSPAN4基因对A549细胞迁移、侵袭能力的影响在统计学上无显著性差异,降低了N-cadherin的表达,对E-cadherin表达的影响不大。以上研究表明,使用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了敲除TSPAN4基因的A549细胞系,且单独敲除TSPAN4基因不会影响A549细胞迁移能力。 展开更多
关键词 TSPAN4 CRISPR/Cas9 非小细胞肺癌 迁移体
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甲基化抑制剂5-氮杂2′-脱氧胞苷对三维培养A549细胞辐射敏感性的影响 被引量:1
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作者 潘冬 陈亚雄 +4 位作者 薛刚 李小满 任振新 杜亚蓉 胡步荣 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期416-422,共7页
为探讨DNA去甲基化试剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对三维(3D)培养模式下的肺腺癌细胞A549辐射敏感性的作用,开展了系列实验。使用不同浓度5-Aza-CdR处理单层(2D)A549细胞72 h后,MTT法检测其对A549细胞的... 为探讨DNA去甲基化试剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对三维(3D)培养模式下的肺腺癌细胞A549辐射敏感性的作用,开展了系列实验。使用不同浓度5-Aza-CdR处理单层(2D)A549细胞72 h后,MTT法检测其对A549细胞的增殖抑制作用。选取低浓度(2,5μmol/L)5-Aza-CdR预处理2D和3D培养的A549细胞72 h,X射线分别辐照1,2,4,6 Gy,检测微核形成率和克隆存活。实验结果显示,不同浓度的5-Aza-CdR均能抑制2D的A549细胞增殖,且呈剂量依赖性。5μmol/L药物预处理2D与3D细胞并联合辐照后诱导的细胞微核形成率均显著高于相应的对照组,并且细胞存活率显著降低。不过,较低浓度5-Aza-CdR(2μmol/L)预处理的3D培养A549细胞4,6 Gy辐照后微核数目较未用药处理组显著增加,克隆存活率较未用药组显著降低(P<0.05),而在2D培养A549细胞中未观测到上述现象。研究结果表明,5-Aza-CdR能抑制A549细胞增殖,3D培养A549细胞药物预处理更能增加其辐射敏感性。结果暗示,为减少对正常细胞的毒性作用,在临床放疗中,可低剂量使用5-Aza-CdR,实现肿瘤的有效靶向治疗。 展开更多
关键词 5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR) 甲基化 三维培养细胞 辐射敏感性
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