地塞米松通过抑制GITR/GITRL信号减轻脂多糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的本研究通过观察地塞米松对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠模型肺部炎症反应及GITR/GITRL信号通路的影响,同时初步探讨地塞米松对LPS诱导人血管内皮细胞GITRL表达以及细胞凋亡的作用。方法制作ARDS动物模型后,取小鼠肺组织行常规HE染色,同时行免疫组化染色检测GITR/GITRL信号蛋白,另外行肺泡灌洗并收集灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)分类计数炎症细胞,ELISA检测BALF中的炎症因子。利用免疫荧光检测人血管内皮细胞GITRL的表达,另外用流式细胞学分析检测凋亡细胞比例。结果地塞米松明显减少模型小鼠BALF中的炎症细胞以及炎症因子,利用免疫组织化学方法检测实验小鼠肺组织中的GITR/GTIRL信号蛋白发现:对照组小鼠肺组织中有少许的炎性细胞表达GITR;ARDS模型模型组小鼠肺组织中可见明显GITR蛋白表达,主要表达于浸润的炎性细胞;地塞米松干预ARDS模型小鼠后肺组织中GITR表达明显减少;对照组小鼠肺组织中GITRL主要表达于血管内皮细胞,其他组织细胞有少量表达;ARDS模型组小鼠肺组织中可见明显GITRL蛋白表达;地塞米松干预ARDS模型小鼠后肺组织中GITRL表达明显减少。利用流式细胞学分析凋亡比例结果显示:IFN-α组血管内皮细胞凋亡细胞比例明显高于正常对照组,地塞米松干预IFN-α诱导的血管内皮细胞凋亡比例较单独IFN-α干预组明显减少。结论地塞米松减轻ARDS肺部炎症可能通过抑制GITR/GITRL信号减轻IFN-α诱导的血管内皮细胞凋亡来实现。

SDF-1a模拟物CTCE-0214对重症肺炎的治疗作用及机制

目的探讨基质细胞衍生因子(SDF)-1a模拟物CTCE-0214(CTCE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠重型肺炎(SP)的治疗作用及机制。方法将成年CD-1小鼠分为正常对照组、LPS组、LPS+CTCE组、LPS+SDF-1α组各12只。LPS组小鼠气管内滴注LPS(5 mg/kg),正常组小鼠气管内滴注生理盐水(5 mg/kg),LPS+CTCE组和LPS+SDF-1α组在小鼠滴注LPS(5 mg/kg)2 h后通过尾静脉注射CTCE或SDF-1α(10 mg/kg)。在LPS造模24 h后处死小鼠并收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BAL)。测定各组小鼠肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞数量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BAL中白细胞介素(IL)-6、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α、MIP-2和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测肺组织中miR-126的表达水平,Western印迹检测肺组织中蛋白激酶B(AKT)、p-AKT和Rac1的表达水平。结果与正常对照组比较,LPS组肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞数量明显增加(均P<0.05),BAL中炎症因子IL-6、MIP-1α、MIP-2和TNF-α的表达水平明显升高(均P<0.05)。与LPS组比较,LPS+CTCE组和LPS+SDF-1α组肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞数量明显减少(均P<0.05),BAL中炎症因子IL-6、MIP-1α、MIP-2和TNF-α的表达水平明显降低(均P<0.05)。LPS组中miR-126表达水平较对照组明显降低(P<0.05),p-AKT和Rac1的表达水平较对照组明显增加(均P<0.05)。LPS+CTCE组和LPS+SDF-1α组较LPS组能够明显促进miR-126的表达水平及明显抑制p-AKT和Rac1的表达水平(均P<0.05)。在LPS+CTCE组小鼠尾静脉注射miR-126 inhibitors后能够明显增加肺毛细血管通透性、肺含水量和BAL细胞数量(均P<0.05),明显促进BAL中炎症因子IL-6、MIP-1α、MIP-2和TNF-α表达水平及增加p-AKT和Rac1表达水平(均P<0.05)。结论SDF-1a模拟物CTCE能够通过上调miR-126表达抑制AKT/Rac1信号通路,进而对SP发挥保护作用。