人脐血干细胞蛛网膜下腔移植向神经干细胞分化的初步研究

目的探讨人脐血干细胞(HUCB-SCs)蛛网膜下腔移植治疗中枢神经系统损伤患者在体内向神经干细胞(NSCs)分化的状态。方法采用流式细胞术检测HUCB-SCs蛛网膜下腔移植前后神经干细胞特异性标志物巢蛋白(Nestin)表达变化。结果HUCB-SCs蛛网膜下腔移植1周后,脑脊液中原始幼稚/干细胞Nestin抗原荧光表达明显增强,Nestin阳性细胞占原始幼稚/干细胞比例为(7.58±6.43)%,明显高于HUCB-SCs中Nestin阳性细胞比例(P<0.05)。结论HUCB-SCs蛛网膜下腔移植后,在适当条件下在体内可以向神经干细胞分化,为脐血干细胞移植用于神经系统疾病的临床治疗提供较直接的客观依据。

青蒿琥酯通过活性氧损伤机制诱导胰腺癌细胞发生胀亡性死亡

背景与目的:青蒿琥酯(artesunate,ART)是从黄花蒿中提取的有效抗疟疾成分,能够抑制多种肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡,但作用机制尚不完全明确。本研究旨在探讨ART诱导胰腺癌细胞死亡的方式及机制,为探寻治疗胰腺癌的新策略提供思路。方法:细胞培养至对数生长期,各孔加入不同浓度ART(5、10、20、30、50、100、200、300μmol/L),另以不加药组作为阴性对照组,凋亡对照组加入22μmol/L羟基喜树碱。采用MTT法观察ART对胰腺癌Panc-1细胞的增殖抑制作用,光镜和透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞增殖周期变化及凋亡率,DCFH-DA染色流式检测细胞内活性氧(ROS)生成变化:并观察过氧化氢酶(catalase)、可透过胞膜巯基抗氧化剂(TCEP)对ART作用的影响。结果:随着ART浓度的增加、作用时间的延长,Panc-1细胞存活率明显降低,50μmol/L以上浓度ART可致Panc-1细胞呈现明显之胀性死亡,未见细胞凋亡表现。电镜显示,胞质中有大量空泡形成,线粒体肿胀,嵴破坏,呈絮状改变:胞核肿胀,核内染色质分散,与胀亡性死亡的特征相类似。流式分析显示,经50、200μmol/L ART作用5 h,细胞内ROS水平分别是阴性对照组的1.60倍和4.49倍:而用抗氧化剂TCEP预处理能部分抑制细胞内ROS产生及细胞胀亡的发生。结论:青蒿琥酯对胰腺癌Panc-1细胞具有明显的抑制作用,诱导产生不同于细胞凋亡的胀亡性死亡,其机制可能与ROS产生及过氧化损伤作用有关。

血清淀粉样A蛋白和C-反应蛋白的变化对急性冠状动脉综合征的预测

目的 观察冠心病 (CHD)不同类型患者血清淀粉样A蛋白 (SAA)和C -反应蛋白 (CRP)的变化 ,探讨急性冠状动脉综合征 (ACS)临床识别和预测的炎症指标。方法 测定 2 4例ACS患者 (包括急性心肌梗死 10例、不稳定型心绞痛 14例 )、2 8例稳定型心绞痛 (SAP)及 3 0例正常对照者的血清SAA及CRP水平。结果 ACS患者血清SAA及CRP水平显著高于正常对照组及SAP组 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,而SAP组与正常对照组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。以入院时SAA≥ 1mg/L或CRP≥ 8mg/L(正常对照组的均值加 2个标准差 )作为异常增高界限 ,对ACS临床识别的敏感性和阳性预测值均较高 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。冠心病患者血清SAA水平与CRP显著相关 (r =0 9198,P <0 0 1)。结论 SAA及CRP的增高与ACS的发生有关 ,可作为动脉粥样硬化斑块不稳定的标志 ,对于及时发现ACS高危人群具有一定的意义。

Smac合成肽靶向下调凋亡抑制蛋白XIAP提高胰腺癌细胞化疗敏感性

目的:探讨包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能否增强胰腺癌细胞的化疗药物敏感性及其作用机制。方法:化学合成SmacN7细胞可穿透融合多肽,共沉淀实验观察SmacN7细胞穿透肽与胰腺癌Panc-1细胞内的XIAP的相互作用,应用流式细胞术检测SmacN7细胞穿透肽与顺铂、5-FU联用对Panc-1细胞凋亡的影响,MTT法检测SmacN7细胞穿透肽应用前后Panc-1细胞的化疗药物敏感性。结果:SmacN7融合多肽能与内源性XIAP结合,明显下调Panc-1细胞XIAP表达水平,显著增强顺铂或5-FU诱导的Panc-1细胞凋亡,使其对顺铂、5-FU的药物半数抑制浓度(IC50)分别降低1.98倍、2.62倍。结论:应用包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能靶向下调胰腺癌Panc-1细胞XIAP表达,显著提高其化疗敏感性,为胰腺癌的生物治疗协同化疗提供了新思路。

原因不明复发性流产患者蜕膜NK细胞亚群特征研究

目的通过分析原因不明复发性自然流产(URSA)患者流产蜕膜组织中NK细胞亚群表型特征,探讨蜕膜NK细胞在URSA发病中的作用。方法选取URSA患者26例为URSA组,20例同期正常妊娠行人工流产者作为正常早孕组,采用流式细胞术分析蜕膜组织NK细胞亚群表型、比例及其抑制性受体CD94/NKG2A表达情况。结果蜕膜中CD3-CD56+NK细胞约占淋巴细胞的70%,是妊娠子宫蜕膜中淋巴细胞的主要类型,URSA组蜕膜NK细胞比例与正常早孕组无明显差异;正常早孕组蜕膜NK细胞主要为CD56brightCD16-亚群,约占80%;而URSA组CD56brightCD16-亚群比例为(72.2±15.2)%,明显低于正常早孕组,而CD56dimCD16+亚群比例(15.3±6.7)%,明显高于正常早孕组,均有统计学差异(P<0.05)。URSA组蜕膜CD56brightCD16-细胞亚群CD94/NKG2A表达显著低于正常早孕对照组(P<0.01)。结论 URSA的发生可能与其蜕膜NK细胞CD56brightCD16-和CD56dimCD16+亚群比例失衡有关,而且蜕膜CD56brightCD16-细胞亚群抑制性受体CD94/NKG2A表达明显降低,可能引起NK细胞异常激活,参与URSA妊娠母胎免疫耐受的破坏。

miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用

目的:探讨miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制。方法:采用qRT-PCR方法检测广东医学院附属深圳南山医院2014年6月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4种结直肠癌细胞(HCT116、SW620、SW480、HT29)中miR-92a的表达;免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度(microvessel density,MVD),Pearson相关性分析探讨miR-92a表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic、inhibitor上调或抑制结直肠癌细胞HCT116、SW620中miR-92a的表达水平,采用小管形成实验检测miR-92a不同表达对HUVEC小管形成的影响,免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果:结直肠癌组织miR-92a的表达水平显著高于对应癌旁组织(P<0.01);4种人结肠癌细胞系miR-92a的表达水平均显著高于正常肠上皮组织(P<0.05);结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织(P<0.01),miR-92a表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关(r=0.580,P=0.01);上调miR-92a表达的HCT116细胞培养上清液可以显著促进HUVEC小管形成(P<0.05);上调miR-92a表达可以显著抑制HCT116细胞中PTEN蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-92a在结直肠癌细胞和组织中高表达,与肿瘤血管新生增加密切相关;miR-92a可能通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。

CD62p CD63 vWF在急性冠状动脉综合征中的作用

目的研究血小板活化和内皮功能在急性冠状动脉综合征(ACS)中的作用。方法采用全血流式细胞术测定急性冠状动脉综合征患者50例和正常对照组30名血小板胞质内α-颗粒上的膜糖蛋白(CD62p)、溶酶体膜糖蛋白(CD63),用酶联免疫吸附试验测定血浆血管性血友病因子(vonWillebrandfactor,vWF)。结果急性冠状动脉综合征组血小板表面活性标志蛋白CD62p(11.2±0.8)%、CD63(4.2±0.4)%和vWF(206±20)%表达均显著高于对照组(3.3±0.6)%、(1.5±0.4)%和(96±15)%(P<0.01)。结论急性冠状动脉综合征患者存在血小板活性增强和内皮功能异常,这些变化与急性冠状动脉综合征的病理过程有关。

定量与半定量检测血清降钙素原在细菌感染诊断中的应用价值评价

目的评价定量与半定量方法检测血清降钙素原(PCT)对细菌感染性疾病诊断的应用价值。方法选取186例入院疑为细菌感染的患者,分别采用化学发光定量法和胶体金免疫结合半定量法检测患者血清PCT含量,并采用Kappa一致性检验评价两种方法检测结果的一致性,ROC曲线分析其对细菌感染诊断的敏感度及特异度。结果非感染组、局部细菌感染组血清PCT均未升高,脓毒血症组PCT显著升高,细菌感染性全身炎症反应综合征(SIRS)组血清PCT轻中度升高,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。定量与半定量检测PCT结果总体一致性较好(Kappa检验,K=0.77),以PCT≥0.5ng/mL为阳性诊断界点,ROC分析表明定量方法的敏感度98.9%、特异度92.6%均高于半定量方法的92.6%、88.4%。结论检测血清PCT水平对全身细菌感染诊断具有良好的敏感度和特异度,定量法检测结果客观、精确,对于处于阳性临界值或需要监测疗效的患者,定量检测PCT是首选方法。

DHRS4L2非编码RNA调控CPNE6基因表达（英文）

DHRS4/NRDR基因编码一种属于SDR家族的酶,在维甲酸合成、类固醇代谢和苯甲基代谢中发挥生物合成催化作用.DHRS4基因定位于14q11.2,有两个相似的拷贝基因,分别为DHRS4L2和DHRS4L1.我们前期发现了DHRS4L2基因一个上游转录起始位点,命名为DHRS4L2-Ea.在本研究中,我们用RT-PCR和双脱氧测序法发现一个新的从DHRS4L2-Ea转录的选择性剪接亚型DHRS4L2-900a(KC237374).同时RT-PCR结果显示在SK-N-SH细胞DHRS4L2-Ea选择性剪接亚型中DHRS4L2-iso(AY616183)表达最多,为主要亚型.在SK-N-SH细胞过表达DHRS4L2-800a(AY920361)使DHRS4L2-Ea基因下游CPNE6 mRNA表达下调.在HeLa细胞过表达DHRS4L2-800a(AY920361)或DHRS4L2-900a(KC237374)进一步表明DHRS4L2-Ea抑制CPNE6表达的作用.定量PCR结果显示si-RNA抑制DHRS4L2-Ea表达使CPNE6 mRNA表达上调.亚硫酸盐测序结果显示在SK-N-SH转染DHRS4L2-800a(AY920361)的样本中CPNE6基因DNA CpG甲基化增加.综上所述,本研究揭示DHRS4L2表达的非编码RNA抑制其下游基因CPNE6的表达.

应用ROC曲线评价不同方法检测同型半胱氨酸对高血压合并脑梗死的诊断价值

目的探讨不同方法检测同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对高血压合并脑梗死的诊断价值。方法分别采用荧光定量法和循环酶法检测单纯高血压组、高血压合并脑梗死组及健康对照组Hcy的水平,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析评价2种方法检测Hcy对高血压合并脑梗死的诊断效能。结果两种方法均显示单纯高血压组、高血压合并脑梗死组血清Hcy水平、高Hcy发生率均显著高于对照组(P<0.05),但单纯高血压组与高血压合并脑梗死组之间血清Hcy水平及高Hcy发生率均无明显差异(P>0.05)。ROC曲线分析循环酶法检测Hcy的诊断灵敏度(67.5%)和特异性(85.3%)均较高,而荧光定量法灵敏度较低(40%),特异性好(97.1%);Hcy与三酰甘油联合诊断的灵敏度为72.5%,特异性为94.1%,均高于Hcy单指标诊断效能。结论 Hcy的升高与高血压相关,但与高血压合并脑梗死并非有直接的因果关系。循环酶法检测Hcy对高血压合并脑梗死的诊断效能优于荧光定量法,Hcy与三酰甘油联合检测有助于提高对高血压合并脑梗死诊断灵敏度和特异性。

过氧化物酶体氧化应激与肿瘤关系的研究进展

过氧化物酶体是真核细胞中广泛存在的一种细胞器,参与并介导细胞多种生物学过程。近年来研究已证实过氧化物酶体是细胞中自由基产生与清除的重要位点。过氧化物酶体中自由基生成与清除平衡机制对维持细胞正常功能是极为重要的,当过氧化物酶体发生氧化应激时产生大量自由基,这种自由基变化与人类肿瘤的发生、发展密切相关,并可能从多个层面影响肿瘤进程。该文就过氧化物酶体的氧化应激机制及其在肿瘤发生、发展中的作用进行综述。

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响

目的:观察雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用机理。方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,运用CCK-8法检测不同剂量的雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响,酶联免疫吸附实验检测细胞株培养上清中的IL-6的含量。结果:经过IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364,在不同浓度的雷公藤多甙的作用48h后,其增殖明显受到抑制,并呈剂量依赖性。同时各剂量组均可抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌炎性因子IL-6的分泌。结论:雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364的过度增殖和IL-6的分泌,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一。

青蒿素及其衍生物抗肿瘤的研究进展

青蒿素为传统的抗疟疾药物,自20世纪90年代以来,很多学者已经证明青蒿素及其衍生物具有明显的抗肿瘤作用。目前,它们比较明确的抗肿瘤机制有抑制肿瘤细胞增殖和抗血管形成;诱导细胞凋亡;氧化应激反应;致癌基因和抑癌基因间的平衡等等。同时,青蒿素类药物可选择性杀伤肿瘤细胞,且与传统化疗药不存在交叉耐药,并能逆转肿瘤细胞的多重耐药现象。因此,将青蒿素开发成为新型的抗肿瘤药物运用于临床具有广泛的前景。

维生素C在肿瘤治疗中的作用研究进展

维生素C可以预防肿瘤,将其作为抗肿瘤药物运用于临床具有广阔的前景。维生素C抗肿瘤机制有:作为电子供体在细胞外液中产生过氧化氢杀伤肿瘤细胞;干扰肿瘤细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡等。但有研究报道维生素C可以对抗化疗药,将维生素C作为接受化疗的癌症患者的营养支持治疗有不利的影响。

COX-2抑制剂对胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖及凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶抑制剂Celebrex(西乐葆)对胰腺癌CFPAC-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用CCK-8比色法观察不同浓度、不同时间点的Celebrex对CFPAC-1细胞增殖的影响;流式细胞术检测不同浓度Celebrex作用下CFPAC-1细胞凋亡和细胞膜P-gp表达的变化。结果8、16、32、64μmol/L的Celebrex作用于CFPAC-1细胞后,可明显抑制胰腺癌细胞株CFPAC-1的增殖,并呈时间和剂量依赖性,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);同时细胞凋亡率显著上升,而细胞膜MDR1(P-gp)表达阳性率显著降低(P<0.05),上述作用均成剂量依赖性。结论Celebrex降低胰腺癌细胞株CFPAC-1细胞膜表面P-gp的表达,从而诱导细胞凋亡,这可能是其抑制胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖的作用机制之一。

血清microRNA作为肿瘤生物标志物的研究进展

microRNA（miRNA）作为一类独特的小分子非编码RNA,能够在转录后水平调控蛋白合成,参与多种生物学信号通路的调节[1].肿瘤患者血液循环中存在源自肿瘤的miRNA,且组织或血清中miRNA的异常表达与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关.由于miRNA在不同肿瘤中具有特定的表达模式,且miRNA在血液中有较高的稳定性和特异性,血清miRNA有望成为新兴的肿瘤诊断和预后的生物标志物.本文对血清miRNA作为循环生物标志物在肿瘤诊断中的应用研究进展作一综述.

RNA介导Survivin基因沉默对胰腺癌细胞Panc-1细胞株凋亡及增殖的影响

目的观察靶向封闭survivin基因对胰腺癌细胞株Panc-1增殖和凋亡的影响,探讨survivin基因在胰腺癌的发生、发展中作用。方法设计2对survivin-shRNA,体外转录制备shRNA。利用脂质体转染技术将survivin-shRNA转染胰腺癌细胞株(Panc-l),RT-PCR检测survivin-mRNA水平;MTT法检测细胞生长情况并绘制细胞生长曲线;细胞形态学观察及流式细胞仪分析细胞凋亡。结果转染2对survivin-shRNA可分别使Panc-l细胞survivin-mRNA水平下降54.86%,52.19%;MTT法检测结果显示:转染两对sur-vivin-shRNA24、48、72小时对细胞增殖无明显影响(P>0.05);细胞形态学观察及流式细胞仪分析结果显示:转染两对survivin-shRNA24、48、72小时对细胞凋亡无明显影响(P>0.05)。结论应用RNAi技术,将survivin-shRNA转染胰腺癌细胞(Panc-1),能成功介导survivin基因沉默,达到部分靶向封闭survivin的目的。部分靶向封闭survivin对胰腺癌细胞株Panc-1凋亡及增殖无明显影响。提示:survivin在胰腺癌细胞增殖与凋亡调控中所起的作用可能并非关键性的。因而以survivin为靶基因的基因治疗对胰腺癌可能无效。

Dysadherin蛋白的研究进展及其与胰腺癌的关系

Dysadherin是位于细胞膜的一种糖蛋白,能够促进癌症细胞的转移,属于FXYD(FXYD do-main containing ion transport regulator)家族成员。它主要表达于包括胰腺癌在内的各种不同类型的肿瘤细胞,仅在少数几种正常人体细胞表达。近年研究发现,dysadherin可能在胰腺癌细胞的入侵及转移发面发挥重要作用。本综述旨在阐述dysadherin蛋白的作用机制及其与胰腺癌的关系,并为胰腺癌的诊断及治疗提供新方向。

细胞胀亡的发生机制及其与肿瘤的关系

胀亡是一种特殊形式的非凋亡性细胞死亡方式，它的特征性表现为细胞肿胀、起泡、细胞器肿胀、细胞膜通透性增加和核溶解。胀亡理论的提出为临床医学的发展提供了良好的机遇和理论指导。细胞胀亡在肿瘤发生、发展过程中具有重要作用，明确细胞胀亡在肿瘤发生、发展过程中的作用将有助于抗肿瘤研究的深入。本文就细胞胀亡的发生机制及其与肿瘤的关系予以综述。

深圳市5918例呼吸道感染患者9种呼吸道病原体IgM抗体检测分析

目的分析深圳市患者9种呼吸道病原体的感染特点和流行趋势。方法收集该院就诊的具有急性呼吸道感染症状的患者5 918例,采用间接免疫荧光法检测9种呼吸道病原体的IgM抗体,包括嗜肺军团菌1型(LP1)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次体(COX)、肺炎衣原体(CPn)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(INFA)、乙型流感病毒(INFB)、副流感病毒(PIVs),并对结果进行统计学分析。结果 5 918份血清标本中共检出IgM抗体阳性1 376份,总阳性率为23.25%,其中MP阳性率最高(15.19%),其次为INFB(8.11%),其余几种病原体阳性率较低,混合感染阳性率为4.29%。女性患者中MP、INFB和PIVs IgM抗体的阳性率显著高于男性患者(P<0.001)。MP、INFB和PIVs在不同季节中的阳性率不同,其差异具有统计学意义(P<0.001)。0~14岁组MP、ADV和INFB IgM抗体阳性率显著高于>14~60岁组和>60岁(P<0.05)。婴幼儿(0~14岁)患者MP、CPn、ADV、RSV、INFB和PIVs的阳性率与年龄密切相关(P<0.05)。结论引起深圳市人群非典型肺炎的主要呼吸道病原体,以MP和INFB为主,9种病原体具有各自的感染特点和流行趋势。