眼局部应用非甾体类抗炎药的研究进展

非甾体类抗炎药(NSAID)抑制前列腺素的合成,可以减轻炎症和疼痛,在眼科临床有较广泛的适应证。但由于其副作用,使其全身应用受到了一定限制,而眼局部用药在眼科疾病中得到了广泛的应用,尤其是近几年在眼部新生血管的治疗方面取得了较大进展。目前眼科临床上局部应用的NSAID主要有0.1%双氯芬酸钠滴眼液、0.5%及0.4%酮咯酸氨丁三醇滴眼液、0.03%氟比洛芬钠及1.0%苏洛芬钠。此外,还有0.1%吲哚美辛和0.09%溴芬酸等。由于NSAID在某些方面比糖皮质激素更具优势,因此本文就NSAID在眼科的局部应用进行综述,希望能引起临床医生的重视。

8种杀菌剂防治葡萄霜霉病田间药效试验

比较了8种杀菌剂对葡萄霜霉病的防治效果。结果表明:烯酰吗啉.甲霜灵30%水分散粒剂600倍液、烯酰吗啉40%悬浮剂600倍液、甲霜.锰锌72%水分散粒剂400倍液、嘧菌酯25%悬浮剂1 500倍液以及氯化十二烷基苄基铵10%水剂1 000倍液对葡萄霜霉病的防治效果良好,显著优于传统药剂三乙膦酸铝80%水分散粒剂500倍液、代森锰锌80%可湿性粉剂800倍液、丙森锌70%可湿性粉剂400倍液。其中,烯酰吗啉.甲霜灵30%水分散粒剂600倍液效果尤佳。

自噬抑制剂3-MA抑制高糖条件下猴脉络膜视网膜血管内皮细胞血管形成

目的研究高浓度葡萄糖对体外培养的猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)自噬水平的影响,探讨自噬抑制剂3-MA对RF/6A细胞新生血管形成的影响。方法取体外培养的生长良好的RF/6A细胞用于实验,将细胞随机分为4组,分别是对照组、低糖组(5 mmol/L的D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L的D-葡萄糖)、高糖+3-MA组(5 m M的3-MA预处理细胞后加入含25 mmol/L的D-葡萄糖培养液培养)。24 h后通过MTT法检测细胞活力,细胞划痕法检测细胞迁移,基质胶(Matrigel)法检测血管管腔形成,观察高糖对RF/6A细胞活力、迁移、管腔形成的影响及其3-MA的作用。结果 1同对照组比较,低糖组RF/6A细胞活力下降,高糖组RF/6A细胞活力进一步下降(P<0.05),高糖+3-MA组细胞活力较低糖与高糖组明显提高(P<0.05);2对照组、低糖组、高糖组、高糖+3-MA组细胞迁移面积(像素)分别是:40250±2015,44528±2273,55793±2158,39726±1983,组间差异具有统计学意义(P<0.05);3对照组、低糖组、高糖组、高糖+3-MA组RF/6A细胞管腔形成数分别为16.9±3.3,19.8±3.6,24.7±1.9,10.9±3.3,组间差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,D-葡萄糖促进RF/6A细胞管腔形成(P<0.05),而3-MA能够显著抑制RF/6A细胞管腔的形成。结论高糖能够抑制RF/6A细胞活力,促进RF/6A细胞迁移和管腔形成,通过3-MA预处理可以一定程度恢复细胞活力,显著抑制高糖诱导的细胞迁移和管腔形成。提示自噬可能参与调控高糖诱导的视网膜新生血管形成。

特发性眶内血肿致间歇性眼球突出1例

患者男性，40岁。2009年2月18日无明显诱因出现左眼肿胀突出，并逐渐加重，伴有流泪、恶心、呕吐和视物不清，眼球运动受限。既往体健，无高血压、糖尿病和血液病病史，无眼部及头部外伤史。在当地医院给予抗生素治疗后效果不佳，于2009年2月23日来第四军医大学西京医院眼科就诊。查体：神经系统检查未见阳性体征；眶周、耳前、耳后坐位及头低位均未闻及血管杂音。

黄芪注射液辅助免疫化疗对子宫内膜癌患者免疫功能及血清肿瘤分子的影响

目的探讨黄芪注射液辅助免疫化疗对子宫内膜癌患者免疫功能及血清肿瘤分子的影响。方法选取2014年5月~2016年10月浙江省宁波大学医学院附属医院收治的112例子宫内膜癌患者，随机分为观察组（n=56）与对照组（n=56）。对照组进行常规化疗，观察组在对照组基础上加用黄芪注射液。比较2组患者临床疗效，检测比较2组患者化疗前后免疫功能、血清肿瘤分子水平，统计2组患者不良反应发生率。结果化疗后观察组的总缓解率73.22%，显著高于对照组的51.79%（P＜0.01）。与化疗前相比，化疗后2组患者外周血中CD4+、CD8+比例均降低，且观察组降低幅度小于对照组，对照组外周血中CD4+/CD8+明显降低，且低于观察组（P＜0.01）。化疗后2组患者血清IgG、IgA水平均无明显变化，但观察组高于对照组（P＜0.05）；与化疗前相比，化疗后观察组血清IgM、补体C3水平均升高，对照组血清IgM、补体C3水平均下降，且观察组高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。化疗过程中，观察组胃肠道反应、粒细胞减少、血小板减少、肝肾功能损害发生率均低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。结论黄芪注射液辅助免疫化疗可提升子宫内膜癌患者化疗的临床疗效，有效降低血清肿瘤分子水平，避免化疗对机体免疫功能的损伤，减轻不良反应，安全性良好。

大学英语听力教学探究

听力教学在大学英语教学占有重要的地位,但却一直是一个薄弱环节,本文从大学英语听力教学现状出发,分析了影响大学英语听力教学的因素,并提出了相应的应对策略,以期对大家有所裨益。

脐动脉血气分析在新生儿窒息诊断中的应用与分析

目的探讨脐动脉血气分析在新生儿窒息诊断中的临床适用性。方法回顾性分析110例活产新生儿临床资料,按照1min Apgar评分结果分为重度窒息组、轻度窒息组、对照组。比较3组脐动脉血气分析结果,观察Apgar评分与脐动脉血p H值的相关性。结果窒息组和对照组新生儿的胎龄、性别、出生体质量、分娩方式等一般资料差异均无统计学意义(均P>0.05)。重度窒息组(Apgar评分≤3分)与轻度窒息组(4≤Apgar评分≤7分)的p H值、氧分压(PO2)均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。二氧化碳分压(PCO2)以重度窒息组最高,对照组最低,碱剩余(BE)值均为负值,以重度窒息组最低,对照组最高;组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。将脐动脉血气分析结果按p H值分为3组:严重酸中毒组(pH<7.0)、中度酸中毒组(7.0≤p H≤7.2)、轻度酸中毒/对照组(pH>7.2)。以Apgar评分标准判断的新生儿窒息的发生率随脐动脉血pH值的降低而增加,而82%的对照组新生儿动脉血p H>7.2,新生儿Apgar评分与血气分析p H值呈正相关(r=0.631,P<0.05)。结论对新生儿实施脐动脉血气分析,可获得良好的评估效果,可以提高新生儿窒息评估的准确性。

糖尿病视网膜病变分级诊疗措施初探

糖尿病视网膜病变是糖尿病患者群体在临床病程的持续发展演化过程中,因多种因素的影响而发生的严重并发症,是临床中引致病理性致盲事件发生的重要因素,切实做好针对糖尿病视网膜病变发生的管理干预工作,对于控制和降低患者严重并发症的发生具有重要意义。2017年国家卫生计生委办公厅为了做好糖尿病视网膜病变防治工作,结合糖尿病分级诊疗要求,研究制定了《糖尿病视网膜病变分级诊疗服务技术方案》,通过分级诊疗制度的实施,有助于早期发现糖尿病视网膜病变,并给予早期干预,从而降低患者的疾病负担。但是在该服务技术方案实施过程中,具体的实施措施仍有待进一步细化、完善。该文针对糖尿病视网膜病变分级诊疗的措施,进行初步探讨。

宫腔球囊在瘢痕子宫出血中的临床应用

目的观察瘢痕子宫妊娠患者人工流产术中大出血采取宫腔内放置导尿管球囊压迫止血的疗效。方法回顾性分析20例瘢痕子宫妊娠患者在人工流产术中及清宫术中大出血的临床资料。结果 20例瘢痕子宫妊娠患者在发生大出血时,立即行宫腔内放置球囊压迫止血,效果显著。结论瘢痕子宫妊娠患者在人工流产术或清宫术中一旦发生子宫大出血,病情凶险;而宫腔内放置球囊压迫止血,操作方便、疗效确切,可作为瘢痕子宫妊娠大出血的应急措施。

缺氧条件下自噬在视网膜血管内皮细胞血管生成中的作用

目的研究缺氧条件下自噬对体外培养的小鼠视网膜血管内皮细胞（RVECs）增生、迁移和管腔形成的影响。方法取清洁级C57BL/6J小鼠50只，采用组织块培养法分离和培养小鼠RVECs，采用CD34免疫荧光染色法对培养细胞进行鉴定。将生长良好的RVECs分为正常对照组、缺氧对照组及缺氧＋3-甲基腺嘌呤（3-MA）组。正常对照组细胞常规培养，缺氧对照组细胞在氧体积分数1%的环境下培养24 h，缺氧＋3-MA组细胞先用5 mmol/L 3-MA预处理4 h，然后在上述缺氧环境下培养24 h。采用Western blot法检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）比值及细胞中Beclin-1的表达；透射电子显微镜下观察细胞内形成的自噬小体的超微结构；分别采用Click-iT EdU试剂盒、细胞划痕法和Matrigel胶法检测细胞增生率、细胞迁移情况及细胞管腔形成情况。 结果原代培养后5～7 d培养的细胞呈铺路石样排列生长，CD34表达阳性。透射电子显微镜下缺氧对照组细胞自噬小体明显多于正常对照组和缺氧＋3-MA组。正常对照组、缺氧对照组和缺氧＋3-MA组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.243±0.030、0.658±0.032和0.405±0.095，Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.260±0.040、0.650±0.071和0.461±0.089；细胞增生率分别为（45.93±6.39）%、（22.74±2.35）%和（24.12±3.59）%；细胞划痕愈合率分别为（36.02±5.84）%、（57.26±11.98）%和（18.16±9.73）%；细胞管腔形成数分别为（29.20±6.10）、（41.40±4.04）和（22.00±2.92）个；总体比较差异均有统计学意义（F＝35.86、23.53、34.28、21.12、23.27，均P〈0.01）。与正常对照组相比，缺氧对照组细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达均明显增加，细胞增生率明显下降，划痕愈合率和管腔形成数明显增加，缺氧＋3-MA组细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达量、划痕愈合率和细胞管腔形成数较缺氧对照组明显降低。结论缺氧激活小鼠RVECs自噬，进而促进细胞迁移和管腔形成，自噬抑制剂3-MA可抑制自噬小体活性，并抑制RVECs的迁移和管腔形成能力。

自噬在高糖条件下视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子促进RF/6A细胞血管生成中的作用

目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组。对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24 h,高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h,3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L^-1 3-MA处理24 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h。Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-related protein 1 light chain 3,LC3)II型和I型的比值(LC3-II/LC3-I)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3(autophagy-related gene 3,Atg3)的蛋白表达。ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达。比较三组ARPE-19细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量。然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中,将RF/6A细胞也按以上方法分组,分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数。结果对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/LC3-I比值分别为0.405±0.095、0.932±0.024和0.635±0.048;Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.205±0.035、0.590±0.120和0.425±0.082;Atg3蛋白相对表达量分别为0.277±0.035、0.539±0.071和0.389±0.019。ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达量三组分别为(44.03±9.08)ng·L^-1、(205.70±17.90)ng·L^-1和(112.52±21.06)ng·L^-1;RF/6A细胞迁移数三组分别为(125.60±6.35)个、(153.60±19.20)个和(67.40±7.95)个;细胞管腔形成数三组分别为(12.22±0.84)个、(18.44±1.68)个和(5.44±0.51)个;整体比较差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与对照组相比,高糖组ARPE-19细胞的LC3-II/LC3-I比值、Beclin-1及Atg3蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01),VEGF表达水平均明显升高(P<0.01),RF/6A细胞迁移数和管腔形成数均明显增加(均为P<0.01),3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/I比值、Beclin-1和Atg3蛋白相对表达量、VEGF表达量、RF/6A细胞迁移数和细胞管腔形成数均较高糖组明显降低(均为P<0.01)。结论高糖激活ARPE-19细胞自噬,进而上调VEGF的表达并促进RF/6A细胞迁移和管腔形成,自噬抑制剂3-MA可抑制ARPE-19细胞自噬,并下调VEGF的表达从而抑制RF/6A细胞的血管形成能力。

肿瘤坏死因子-α对RF/6A细胞自噬促进细胞增殖、迁移和管腔形成的影响

目的本研究观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)对体外培养的恒河猴脉络膜/视网膜内皮细胞(RF/6A)表达自噬蛋白Beclin-1及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响,探讨TNF-α参与新生血管生成的可能机制。方法将生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组、TNF-α组和TNF-α+3-MA组。培养24 h、48 h后采用Western blot检测细胞Beclin-1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,细胞划痕法检测细胞迁移,Matrigel法检测管腔形成。结果培养24 h和48 h,各组Beclin-1/β-actin比值分别是TNF-α组(24 h)0.673±0.017、TNF-α+3-MA组(24 h)0.491±0.017、TNF-α组(48 h)0.792±0.006、TNF-α+3-MA组(48 h)0.504±0.007、空白对照组0.268±0.017。TNF-α组RF/6A细胞Beclin-1的表达量均明显高于空白对照组(P<0.05),TNF-α+3-MA组Beclin-1的表达量较TNF-α组明显减少(P<0.05)。各组细胞的相对增殖率分别是TNF-α组(24 h)1.410±0.010、TNF-α+3-MA组(24 h)1.290±0.004、TNF-α组(48 h)1.320±0.011、TNF-α+3-MA组(48 h)0.180±0.015、对照组(24 h)1.000±0.020、对照组(48 h)1.000±0.011;TNF-α组细胞的相对增殖率均较空白对照组升高(P<0.05),3-MA预处理后,TNF-α促进RF/6A细胞增殖的能力在两个时间点均受到抑制(均为P<0.05)。各组细胞的相对迁移距离分别是TNF-α组(24 h)(345±28)μm、TNF-α+3-MA组(24 h)(259±77)μm、TNF-α组(48 h)(762±55)μm、TNF-α+3-MA组(48 h)(659±48)μm、空白对照组(24 h)(195±63)μm、空白对照组(48 h)(412±94)μm;TNF-α处理组RF/6A细胞24 h的迁移明显强于对照组(P<0.05),加入3-MA预处理后,这种增强作用有所下降,但仍然明显高于对照组(P<0.05);培养48 h,更多细胞迁移入划痕区域,较24 h明显增加;不同组之间的差异与24 h时的结果类似,差异有统计学意义(P<0.05);培养24 h各组细胞管腔形成个数:TNF-α组(11.80±0.81)个、TNF-α+3-MA组(7.50±0.72)个、空白对照组(4.30±1.12)个,TNF-α组及TNF-α+3-MA组管腔形成个数均高于对照组(均为P<0.05),TNF-α+3-MA组较TNF-α组明显减少(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进RF/6A细胞的增殖、迁移和管腔样结构的形成,且TNF-α促进内皮细胞自噬在血管新生中发挥重要的调控作用。

阿维菌素乳油和微囊悬浮剂的光解及其在土壤和小麦中的消解动态

通过光解动态研究、土壤消解试验和小麦种皮消解试验,研究了1.8%阿维菌素乳油和2%阿维菌素微囊悬浮剂在3种不同环境下的光解及消解动力学。结果表明:阿维菌素乳油与微囊悬浮剂在3种环境中的消解均符合一级反应动力学规律;微囊悬浮剂抗光解能力强,光化学分解缓慢,而乳油则在紫外光下分解较快;5、20 mg/kg的阿维菌素微囊悬浮剂和乳油在土壤中的消解半衰期分别为88.86、157.52 d和22.14、82.51 d。阿维菌素微囊悬浮剂在小麦种皮上的残留量明显高于乳油,有较长的持效期。

农药助剂对蚯蚓(Eisenia foetida)的急性毒性

为评价农药助剂对土壤生物的毒性效应,分别采用滤纸接触法和人工土壤法测定了不同类别农药助剂对赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）的急性毒性。结果表明：19种非离子表面活性剂中,烷基酚聚氧乙烯醚与脂肪醇聚氧乙烯醚毒性较高,滤纸法48 h-LC50为7.630～39.65μg·cm-2,人工土壤法14 d-LC50为876.5～2 786.6 mg·kg-1,其它类型非离子表面活性剂毒性较低。5种阴离子表面活性剂中,十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钙毒性高于木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、亚甲基双萘磺酸钠,滤纸法48 h-LC50为6.575～41.89μg·cm-2,人工土壤法14 d-LC50为1 195.0～1 911.7 mg·kg-1。13种溶剂中,二甲苯、乙苯、甲苯、正丁醇、环己酮表现出较高的毒性,滤纸法48 h-LC50为6.587～57.62μg·cm-2,密封人工土壤法48 h-LC50为181.9～781.5 mg·kg-1。采用两种方法测得的5种填料高岭土、白炭黑、硅藻土、凹凸棒土和轻质碳酸钙的毒性均较低。采用两种方法测得的毒性系统偏差接近,重现性均较好,并且滤纸接触法测得的毒力高于人工土壤法。

糖代谢异常者血浆同型半胱氨酸水平与周围神经病变的关系

目的探讨糖代谢异常、初诊断2型糖尿病患者血浆同型半胱氨酸水平与糖尿病周围神经病变的关系。方法于我院门诊及住院患者中就诊的糖代谢异常(IGT)者38例(IGT组)及2型糖尿病(T2DM)患者42例(T2DM组),于我院健康体检中心随机抽取健康对照20名(C组)。分别对三组人群检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平,并使用肌电图仪分别检测三组人群的感觉神经及运动神经传导速度。再将三组人群依据Hcy浓度分别于组内分为亚组1(Hcy<15μmol/L)和亚组2(Hcy≥15μmol/L)。结果 IGT组和T2DM组分别与C组比较,血浆Hcy水平均显著升高(P<0.05),感觉、运动神经传导速度显著下降(P<0.05)。三组人群内各亚组间进行比较,正常对照组亚组间,感觉、运动神经传导速度无显著性差异(P>0.05);IGT亚组间,感觉、运动神经传导速度无显著性差异(P>0.05);T2DM亚组间,亚组2感觉、运动神经传导速度均显著下降(P<0.05)。结论糖代谢异常时,高浓度同型半胱氨酸血症对神经系统损伤不显著,高浓度血糖伴随高浓度同型半胱氨酸血症加重了神经系统的损伤。

脂联素对高糖条件下RF/6A细胞的保护作用

目的观察脂联素(adiponectin,APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(monkey choroid-retinalendothelial cell line,RF/6A)增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组(PBS)、甘露醇对照组(25 mmol/L甘露醇)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+APN组(25 mmol/L D-葡萄糖+10μg/mlAPN),各组加入不同的药物处理48 h。分别采用CCK-8法检测细胞增殖,Western blot检测细胞凋亡关键蛋白Bax、Bcl-2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果高糖组(71. 42%±2. 29%)和高糖+APN组(90. 87%±1. 68%)细胞增殖率低于空白对照组(100%±0%)和甘露醇对照组(99. 09%±0. 46%)(P <0. 001);与高糖组相比,高糖+APN组细胞增殖率明显升高(P <0. 001)。高糖组和高糖+APN组的RF/6A细胞Bax的相对表达量高于空白对照组和甘露醇对照组(P <0. 001)。高糖组和高糖+APN组细胞Bcl-2的相对表达量低于空白对照组和甘露醇对照组(P <0. 001)。与高糖组相比,高糖+APN组细胞Bax的表达明显降低,Bcl-2的表达明显升高(均P <0. 001)。高糖组及高糖+APN组细胞凋亡率均比空白对照组和甘露醇对照组增多(P <0. 001)。与高糖组相比,高糖+APN组细胞凋亡率明显减少(P <0. 001)。结论 APN处理可抑制高糖培养条件下的RF/6A细胞凋亡,促进细胞增殖,提示APN对视网膜血管内皮细胞具有一定的保护效应。

高糖环境对视网膜血管内皮细胞自噬的影响及机制

目的研究高糖培养环境对恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)自噬的影响及机制。方法将体外培养的RF/6A细胞随机分为对照组、高糖组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组,对照组细胞在无糖培养基中培养,高糖组细胞在培养基中加入25mMD-glucose进行培养,3-MA+高糖组用5mg/ml3-MA预处理1.5h,然后置于含25mMD-glucose的培养基中继续培养。培养48h后,采用Westernblot法检测各组细胞的自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、Atg5及关键信号通路蛋白PI3K、AKT、mTOR的表达,采用可表达mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒感染细胞,激光共聚焦显微镜下观察细胞内自噬的变化。结果①对照组、高糖组、3-MA+高糖组细胞中的LC3B-II/LC3B-I值、Atg5值分别为(0.19±0.02、0.58±0.06和0.43±0.04)和(0.35±0.05、0.96±0.06和0.83±0.06),组间总体比较差异均有统计学意义(LC3B-II/LC3B-I:F=55.58,P=0.000;Atg5:F=100.35,P=0.000)。高糖组细胞中LC3B-II/LC3B-I值和Atg5值均明显高于对照组和3-MA+高糖组,差异均有统计学意义(均P<0.05),3-MA+高糖组的LC3B-II/LC3B-I值和Atg5值均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。②对照组、高糖组、3-MA+高糖组细胞中的PI3K值、AKT值和mTOR值分别为(0.93±0.06、0.94±0.07和0.89±0.07)、(0.95±0.05、0.94±0.04和0.90±0.02)和(0.81±0.04、0.82±0.04和0.80±0.02),组间总体比较差异均无统计学意义(均P>0.05);三组磷酸化蛋白p-PI3K值、p-AKT值和p-mTOR值分别为(0.74±0.02、0.40±0.02和0.70±0.02)、(0.87±0.02、0.47±0.02和0.77±0.06)和(0.76±0.03、0.38±0.02和0.70±0.02),组间总体比较差异均有统计学意义(p-PI3K:F=249.92,P=0.000;p-AKT:F=100.94,P=0.000;p-mTOR:F=218.21,P=0.000)。高糖组细胞中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR值均明显低于对照组和3-MA+高糖组,差异均有统计学意义(均P<0.05),3-MA+高糖组的p-PI3K、p-AKT和p-mTOR值均低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。③对照组细胞浆中出现较弱的GFP(绿点)和mCherry(红点)荧光信号,高糖组黄点(红绿荧光融合)和红点明显多于对照组,自噬增强;3-MA+高糖组黄点和红点较高糖组减少,自噬减弱。结论高糖环境通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活RF/6A细胞自噬。

TNF-α通过刺激RF/6A细胞表达SDF-1促进血管生成

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养的猴脉络膜/视网膜内皮细胞(RF/6A)表达基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响,探讨TNF-α参与视网膜血管形成的初步机制。方法取体外培养的生长良好的RF/6A细胞用于实验,将细胞随机分为对照组、不同浓度TNF-α组(1、10、100 ng/ml)、TNF-α+AMD3100组(SDF-1拮抗剂AMD3100预处理1 h,培养液中最终浓度为1μg/ml,然后加入TNF-α)。培养24 h、48 h后采用ELISA法检测细胞上清液中SDF-1含量,MTT法检测细胞增殖,细胞划痕法检测细胞迁移,基质胶(Matrigel)法检测管腔形成。结果 1TNF-α(1 ng/ml)作用24和48 h,RF/6A的SDF-1表达量与对照组无明显差异;TNF-α(10、100 ng/ml)作用后两个时间点SDF-1表达量均明显高于对照组(P<0.01);TNF-α(10 ng/ml)+AMD3100组SDF-1表达量较TNF-α(10 ng/ml)组明显减少(P<0.05)。2TNF-α不同浓度作用24 h的细胞相对增殖率均高于对照组(P<0.05),且随着TNF-α浓度的升高而增加;除1 ng/ml浓度组外,TNF-α各组作用48 h的相对增殖率均较对照组升高(P<0.05);TNF-α(10 ng/ml)+AMD3100组的细胞相对增殖率在24 h和48 h时均明显小于TNF-α(10 ng/ml)组(P<0.05)。3TNF-α(10 ng/ml)组RF/6A细胞24 h的迁移距离明显大于对照组(P<0.05),TNF-α(10ng/ml)+AMD3100组迁移距离较TNF-α(10 ng/ml)组减小(P<0.05);培养48 h后,各组之间的差异与24 h的结果类似(P<0.05)。4TNF-α(10 ng/ml)组管腔形成数明显多于对照组(P<0.01),TNF-α(10ng/ml)+AMD3100组明显少于TNF-α(10 ng/ml)组(P<0.01)。结论 TNF-α能够促进RF/6A细胞表达SDF-1,诱导细胞增殖、迁移和管腔形成,拮抗SDF-1的作用可明显抑制TNF-α诱导的血管生成。提示TNF-α促进RF/6A细胞的血管生成过程可能是通过刺激细胞产生SDF-1实现的。