新的肝细胞生长因子HPPCn的表达、纯化及体外活性检测

目的:建立rhHPPCn在大肠杆菌中的表达体系,纯化表达产物并检测其体外生物活性。方法:以pUC18-HPPCn为模板,构建原核表达载体pET-24a(+)-HPPCn,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达目标蛋白,离子交换色谱法纯化目标蛋白,Westernblot分析其免疫原性,MTT法和3H-TdR掺入法检测其体外活性。结果:成功构建出原核表达载体pET-24a(+)-HPPCn,并诱导使目标蛋白的表达量较高,表达产物中HPPCn23%以可溶形式存在,两步离子交换后可得纯度为94.2%,Westernblot鉴定为目的蛋白,MTT法和3H-TdR掺入法检测其具有明显的促肝癌细胞系增殖活性。结论:成功构建出原核表达载体并实现了目标蛋白高表达,两步离子交换法纯化出所需纯度的蛋白,并验证了其较强的体外促肝癌细胞系增殖活性。

利用碱性磷酸酶初步判定二维电泳中蛋白质磷酸化修饰

磷酸化是蛋白质最重要的翻译后修饰形式之一.以二维电泳为基础的蛋白质组学是发现蛋白磷酸化状态改变的有效途径.本文介绍了在用于二维电泳的蛋白样品制备过程中,利用小牛肠碱性磷酸酶成功去除蛋白质上磷酸基团的过程.该技术将去磷酸化作用和蛋白质组学手段联系在一起,为蛋白质磷酸化修饰的初步判定提供了简便、经济、切实可行的方法.

富含亮氨酸酸性核蛋白家族研究进展

富含亮氨酸酸性核蛋白(leucine-rich acidic nuclear protein,LANP)家族是一类进化上比较保守的蛋白,主要由氨基端富含亮氨酸的区域和羧基端的酸性区域组成。1990年以来,LANP蛋白家族成员被陆续发现,它们在许多生物学过程中发挥作用,如细胞凋亡、转录调控、信号转导等,并且发现pp32可能作为抑瘤因子在癌组织中发挥作用。本文综述了近年来对于LANP家族蛋白的研究进展,主要对其结构特点及生物学功能做了较为详细的阐述。

pp32表达引起人肝癌细胞HepG2形态改变

目的:研究pp32在肝癌细胞中的作用。方法:采用RT-PCR的方法钓取pp32全长基因。脂质体介导的方法将pp32基因导入HepG2细胞。观察细胞形态,血清依赖性和接触抑制等细胞表型,测量细胞生长曲线,检测ALP、LDH、γ-GT、ALB和AFP等生化指标。结果:成功钓取了pp32全长基因,筛选获得pp32稳定表达的HepG2细胞株。pp32表达使HepG2细胞伸出细长突起,但不影响HepG2细胞增殖。ALP和LDH酶活力升高,其他指标没有变化。结论:pp32表达引起人肝癌细胞HepG2形态改变,但不改变其恶性表型。

初始条件与新创科技企业生存

新创科技企业的生存与成长是创业研究的重要内容。尽管学界对科技企业初始条件与其生存的关系有着重要认识,但对这一作用的过程却知之甚少。为此,本文从企业资源观和组织生态学的视角出发,以中关村2006年创办的科技企业为例,运用Complementary log-log模型,重点研究了企业创立时的资源与条件(研发投入、内部金融资本、企业规模和产业集中度)对其生存风险的影响及其时效性。研究结果表明,创立年较高的内部金融资本和产业集中度将增加企业的生存风险,而较高的研发投入和企业规模将有利于降低科技企业的生存风险;同时,初始资源与条件对科技企业生存的影响呈现出不同的时效性。这些经验证据将有助于揭示中国科技型新创企业的生存过程。