用RACE结合cDNA文库筛选的方法获取新的锌指蛋白基因

大多数有重要功能的蛋白质都含相应的由保守氨基酸顺序组成的功能结构域。本文首先根据蛋白质功能结构域保守氨基酸序列设计简并引物 ,用PCR方法扩增出基因EST序列 ,再利用改进的快速扩增cDNA末端(RACE)方法从cDNA文库中扩增出基因非同源部位 ,然后以非同源序列为探针 ,筛选cDNA文库。利用此方法成功地从人骨髓cDNA文库中克隆到几个编码锌指蛋白并代表原有EST的新的全长cDNA。这一策略也应适用于筛选编码具有其他序列保守性功能结构域蛋白的基因。

应用简并引物RT-PCR扩增锌指结构域筛选新基因

目的 应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签（EST），以最终获得新的锌指蛋白基因。方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞，提取总RNA。根据TF-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物，并以之进行RT-PCR扩增，然后将其克隆到pGEM-T easy载体中测序，应用DNAsis软件分析序列并通过GenBank blast进行序列比较。结果克隆并测序了30个扩增片段，22个是锌指蛋白基因的EST,其中17个是新的锌指蛋白基因EST。结论应用简并引物RT-PCR克隆一些具有保守氨基酸顺序结构域的蛋白基因EST是可行的，并具有简便、高效等优点。此外，还可有目的地克隆一些具有重要功能结构域的蛋白质基因。

一个可能与T细胞发育相关的新的C2H2型锌指蛋白基因的克隆(英文)

一些在组织和细胞分化中起重要作用的蛋白质包含锌指结构域 .为了克隆分离和研究与造血细胞分化和发育成熟相关的蛋白基因 ,利用编码C2H2型锌指蛋白结构域中部分保守氨基酸序列设计简并引物 ,以骨髓cDNA为模板 ,进行PCR扩增 ,得到若干新的锌指蛋白基因EST .用其中一条为探针筛选人骨髓cDNA文库 ,获得了一个新的锌指蛋白基因全长cDNA ,GenBank收录号为AF2 4 6 12 6 ,长 3888bp ,包括一个完整阅读框 ,编码 6 86个氨基酸 ,包括 17个典型的和 2个非典型的C2H2模体 ,命名为HZF2 .RNA印迹、人多组织mRNA斑点杂交分析结果显示 ,其在T淋巴细胞发育和定居的器官组织胸腺、淋巴结中有较高表达 ,在脾脏、胎肝有中度表达 ,在B淋巴细胞发育的骨髓中表达很低 ,在外周血几个淋巴细胞系中仅有极微量的表达 ,提示HZF2可能对于T淋巴细胞发育和增殖有重要功能 .该基因也在脑组织的若干部位、胎盘及肾上腺有较高表达 ,在多种其他组织细胞有微量表达 ,说明其可能对维持这些组织细胞的生理功能也起一定作用 .将编码HZF2读框的DNA顺序克隆到pEGFP N1载体中 ,转染 3T3细胞 ,证明表达的HZF2 GFP融合蛋白定位于细胞核 ,这与根据HZF2蛋白结构推测其可能作为DNA结合蛋白行使调节基因转录的功能是一致的 .

桑药套种试验初报

通过在 1～ 2年生桑树行间套种板兰根、黄芩等中药材 ,探索解决桑树建园初期养蚕收入较低的问题 ,分析了桑——药套种不同模式的桑园总体经济效益 ,初步认为在固原地区桑树建园初期套种板兰根效益较好。

宁南山区几个果桑品种的引进试验研究

引进6个果桑品种进行冻害指数、产果量及产叶量等,进行观测比较试验,初步认为在宁南山区发展叶果兼用型果桑,可以“白玉王”为主栽品种。

宁夏南部山区桑树品种比较试验

2003年春从陕西省蚕桑丝绸研究所桑树研究室引进6个参试品种进行比较试验,对品种桑的物候期、抗寒性、产叶量进行了观测、调查。结果表明,在宁南山区栽培既抗寒、产叶量又高且有推广价值的品种为陕桑305、402、选792三个桑品种。

宁夏黄土高原半干旱区退耕还桑技术

在宁夏黄土高原半干旱区引进抗旱、耐寒的桑树品种选792、湖桑32、鲁引1号,通过节水栽培技术的集成配套、试验示范,总结出适应半干旱区栽植的桑树品种和配套栽培技术。其中鲁引1号在宁南山区表现出极强的抗寒、抗旱特性,3年生树的产叶量达13 778.40 kg/hm2,表现出较好的丰产性和推广前景。

秋季施肥对宁南山区枸杞生长的影响

以"宁杞1号"为试材,研究了秋季追施枸杞专用肥和硫酸钾及灌水,对枸杞采果期及产果量的影响。结果表明:在宁南山区枸杞园现有条件下,秋季(8月上旬)追施枸杞专用肥和硫酸钾,可以显著延长枸杞采果期、增加产果量。

HZF1在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备

目的在大肠杆菌中表达HZF1融合蛋白,制备抗HZF1抗体。方法构建包含编码HZF1非锌指区DNA的重组表达质粒pET30a-HZF1,转化大肠杆菌并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达相应的融合蛋白,采用镍柱纯化。以纯化蛋白作为免疫抗原,对新西兰大白兔实施多次免疫(间隔时间分别为3、2和2周)。用ELISA和Westernblot检测抗体效价和特异性。结果获得兔抗HZF1抗体,经过ELISA检测,效价在1:100000以上。Westernblot显示兔抗HZF1抗体能够特异性检测氯高铁血红素诱导的K562细胞中的HZF1蛋白。结论得到高特异性的兔抗HZF1抗体,为HZF1的功能研究以及组织和细胞中HZF1的检测奠定了一定基础。

正在走近临床的纳米医学

当你听说，有一个微小的智能炸弹可以进入你的身体，找到癌细胞并在激光的帮助下杀死它们，你是不是觉得有些不可思议？但是这一切将会在十年内成为现实！

令人关注的转基因作物

转基因植物的大面积种植对自然环境是否造成潜在的危害、转基因食品是否安全，一直是近几年科学界和政府争论不休以及很多普通百姓日益关注的话题。

基因组时代对疾病的定义

人类基因组序列的测定将会极大地改变人们对疾病的认识、预防和治疗。随着那些与疾病相关的基因变异的不断发现,我们越来越需要对疾病进行新的定义。

现代外科进展——手术机器人及远程外科技术

在最先进的手术室中，67岁的贝姆躺在手术台上并已被麻醉，连在机械手上的三根不锈钢杆刺入他的胸部。这些机械手由铝和塑料制成，被罩在半透明的聚乙烯薄膜中。这里正在进行的是心脏搭桥术的关键部分，不同寻常的是没有外科医生围在患者的周围，而在手术室的角落里一名外科医生坐在计算机前，背对着手术台，脚踩在脚蹋开关上，手指快速地操纵着控制器。以上并非是科幻小说中描写的情景而是就发生在我们身边的活生生的事实。 走上手术台的机器人 目前全世界已有50多套先进的自动机械辅助外科设备，由机器人进行手术的时代即将到来。事实上，自美国食品与药物管理局首次批准商业出售这类自动机械设备以来，机器人外科得以迅猛发展。

宁南山区桑桑套种试验研究

通过在一至二年生桑树行间套种杂交桑、实生桑、嫁接桑,探索解决桑树建园初期养蚕收入较低的问题,分析了桑桑套种不同模式桑园总体经济效益,初步认为在固原地区桑树建园初期套种实生桑、嫁接桑效益较好。