氡吸入染毒对大鼠肺组织的DNA氧化损伤效应

研究吸入放射性气体氡及其子体对大鼠肺组织的DNA损伤效应。采用雄性Wistar大鼠16只,随机分为4组,每组4只。动物整体暴露于多功能生态氡室,吸入氡及其子体的累积剂量分别达到64、121和236工作水平月(Working level month,WLM)。激光共聚焦检测肺泡灌洗液(BALF)细胞内活性氧(Reactive oxygenspecies,ROS)水平,ELISA法检测肺组织8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)含量、RT-PCR检测肺组织8羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1型(8-oxoguanine DNA-glycosylase type 1,OGG1)mRNA和8-羟基脱氧三磷酸鸟嘌呤核苷酶(Nucleoside diphosphate linked moiety X-type motif 1,MTH1)mRNA相对表达水平。氡吸入染毒后肺组织8-OHdG含量显著升高,BALF细胞ROS增加,OGG1和MTH1表达呈下降趋势。氡及其子体吸入可导致肺组织细胞的DNA氧化损伤,主要表现为8-OHdG含量的增加和修复酶活性的降低。

香烟烟雾诱发BEAS-2B细胞体外恶性转化的研究

目的通过香烟烟雾体外染毒诱发细胞恶性转化,建立吸烟致肺癌的细胞模型。方法确定合适染烟浓度及时间后,将永生化人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞分为对照组(C)和20%烟雾浓度组(S)。以每孔1×105细胞接种于Transwell培养皿,贴壁后置于气体染毒装置中,香烟烟雾持续泵入直接对细胞染毒。检测染毒后5、10、15、20代细胞恶性转化情况,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡变化。结果 BEAS-2B细胞在20%烟雾浓度下染毒5代后,出现生长动力学和形态学改变,生长失去接触抑制,获得对血清诱导分化的抗性和锚着独立性生长能力。G1期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比明显升高,G2期细胞百分比先升高后降低,各代细胞凋亡率均明显降低。结论香烟烟雾染毒能够诱发BEAS-2B细胞体外转化,且随染毒代数的增加呈现剂量效应关系,可作为体外研究吸烟致肺癌的细胞模型。

氡与香烟烟雾染毒诱发BEAS-2B细胞的体外转化

目的 通过氡与香烟烟雾体外染毒诱发细胞恶性转化,建立氡与吸烟致肺癌发生的细胞模型.方法 将永生化人支气管上皮细胞系BEAS-2B分为对照组（C组）、氡染毒组（Rn组）、烟雾染毒组（Sm组）、联合染毒组（Rn＋Sm组）,细胞以每孔1 × 105个接种于Transwell培养皿,氡或香烟烟雾持续泵入直接对细胞染毒.检测细胞恶性转化情况.结果 BEAS-2B细胞经氡及香烟烟雾和联合染毒后发生形态学改变,细胞生长失去接触抑制,染氡组、烟雾染毒组、联合染毒组第5染毒代细胞传代20代后获得对血清诱导末端分化的抗性,克隆形成率相对值由0.31±0.18上升至1.92±0.27、2.03±0.14、2.95±0.60,同时该代细胞锚着独立性生长能力也由（0.01±0.02）%上升至（4.89±0.30）%、（8.36±0.50）%、（11.74±0.69）%.染氡组、烟雾染毒组、联合染毒组第5染毒代细胞传代20代后凋亡率由（11.76±0.17）%降低至（4.62±0.42）%、（8.63±0.15）%、（3.68±0.33）%.结论 氡与香烟烟雾单独及联合染毒均能诱发BEAS-2B细胞体外转化,且联合染毒导致损伤效应更加显著,可作为研究氡及吸烟致肺癌的细胞模型.

铁离子对破骨细胞分化及骨吸收的影响

目的探讨铁离子对RAW264．7单核细胞以及骨髓源性巨噬细胞（BMM）向破骨细胞分化以及骨吸收的影响。方法用枸橼酸铁铵（FAC）在50ng／ml细胞核因子KB受体活化因子配基（RANKL）存在下干预RAW264．7单核细胞，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞形成情况，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TRAP、组织蛋白酶K抗体（Cathepsin—K）、活化T细胞核因子c1（NFATcl）、核因子KB受体活化因子（RANK）mRNA表达情况。建立对照组和高铁组小鼠模型，小动物活体成像仪分析小鼠股骨中段和第4腰椎骨密度，取小鼠股骨骨髓细胞进行破骨细胞培养，酶联免疫吸附试验检测血清中铁蛋白、TRAP-5b、RANKL、血清骨保护素（OPG）含量。结果铁离子在一定范围内能促进TRAP阳性细胞形成。铁离子干预组TRAP、Cathepsin．K、NFATclmRNA表达明显高于对照组（0．43±0．08）比（1．05d±O010），P〈0．05；而RANKmRNA表达无明显变化（P=0．967）。高铁小鼠股骨中段和第4腰椎骨密度显著低于对照组，血清中铁蛋白、TRAP-Sb、环磷酰氮芥（CTX）、RANKL含量要明显高于对照组（19．6±9．0）U／L比（41．5±8．0）U／L，P〈0．05；高铁组铁蛋白含量与TRAP-5b、CTX呈正相关（r=0．65、r=0．76，P〈0．05），OPG含量两组之间差异元统计学意义，（1．9±0．5）μg／L比（1．96d-0．37）μg／L，P〉0．05。结论在一定范围内铁离子能促进RAW264．7和BMM向破骨细胞分化且能在体内促进骨吸收。

重组人甲状旁腺素对慢性苯中毒小鼠造血损伤的改善作用

[目的]研究重组人甲状旁腺素(rhPTH)对慢性苯中毒小鼠造血损伤的改善作用。[方法]皮下注射苯诱导小鼠造血系统损伤模型。将造模成功的30只慢性苯中毒小鼠随机分为3组:生理盐水治疗组、40μg/kg rhPTH治疗组、80μg/kg rhPTH治疗组。每周5次腹腔注射生理盐水或不同剂量rhPTH,治疗3周,间隔1周后取样,测定3组小鼠骨髓中的造血干细胞(外源性脾结节法)、造血祖细胞(集落培养)以及外周血细胞计数和脾脏系数。[结果]经rhPTH治疗的小鼠一般状况明显好于生理盐水治疗组;40μg/kg rhPTH治疗组与80μg/kg rhPTH治疗组的造血干细胞数明显高于生理盐水治疗组(P<0.05),但两个剂量rhPTH治疗组间造血干细胞数差异无统计学意义;3组小鼠的造血祖细胞及外周血细胞计数均差异无统计学意义;两个rhPTH治疗组的脾脏系数均低于生理盐水治疗组(P<0.05)。[结论]rhPTH可明显增加慢性苯中毒小鼠骨髓中造血干细胞数量。

低强度微波对γ射线辐射的防护作用及其可能机制

目的研究低强度微波对受γ射线照射小鼠的辐射防护作用及其可能机制。方法96只雄性昆明种小鼠随机分为对照组、微波照射组（微波组，120μW／cm^2,900MHz，比吸收率为0．4W．／kg）、电离组（5Gyγ射线照射）及微波与γ射线复合照射组（复合组，120μW／cm。微波＋5Cy γ射线照射），每组24只。微波组与复合组小鼠先接受功率密度为120μW／cm^2的微波照射，1h／d，持续14d，第15天给予电离组和复合组5Gy^60Co γ射线一次性全身照射。于照射后3、6、9及12d处死动物，固定胸骨及脾脏，作病理观察，流式细胞仪检测受照射小鼠的脾细胞凋亡率，同时测定血清中抗氧化酶和脂质过氧化物水平。结果骨髓病理切片显示，单独γ射线与复合照射均可导致骨髓组织经历典型的凋亡坏死、空虚、再生修复和恢复4个阶段的病理改变，但复合组的病变轻于电离组，恢复也更快；脾损伤病变过程与骨髓造血组织基本相似，复合组病变轻于电离组。流式细胞仪结果显示，照后6、9d复合组脾细胞凋亡率（分别为23．02％±15．18％、25．37％±11．62％）明显低于电离组，差异有统计学意义（p〈0．05）；氧化损伤检测表明，复合组照后3、9、12d血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力较电离组明显升高，6、9、12d丙二醛（MDA）含量明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论特定强度的微波辐射具有一定的辐射防护作用，其作用机制可能与抑制辐射诱导的造血细胞凋亡和抗氧化损伤作用有关。

微波预先辐照致γ射线对小鼠骨髓基质细胞毒性作用的改变

[目的]探讨微波预先辐照对γ射线致骨髓基质细胞凋亡、线粒体膜电位、胞内游离Ca2+浓度和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性改变的影响。[方法]将原代培养的骨髓基质细胞随机分为正常对照组、单纯微波组、单纯γ射线组和联合组。12μW/cm2微波对单纯微波组和联合组连续辐照7d,每天1h,第8天对单纯γ射线组和联合组进行5Gy的γ射线照射。用钙离子依赖性磷脂结合蛋白-异硫氰酸荧光素及碘化丙啶(AnnexinV-FITC及PI)双标记法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测线粒体膜电位和胞内游离Ca2+浓度,试剂盒检测Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。[结果]与正常对照组相比,各处理组细胞的凋亡率和线粒体膜电位未见明显改变。γ射线照射后24h,单纯微波组、联合组和单纯γ射线组细胞内游离Ca2+浓度明显升高(P<0.05),Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显降低(P<0.05)。与单纯γ射线组相比,联合组细胞内游离Ca2+浓度明显降低(P<0.05),Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显升高(P<0.05)。[结论]本实验条件下,900MHz,12μW/cm2的微波辐射和5Gyγ射线均不能引起细胞凋亡率、线粒体膜电位的明显变化,但能导致胞内游离Ca2+浓度明显上升和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显降低。预先微波辐照能够明显减弱γ射线引起的胞内游离Ca2+浓度和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性改变。

微波辐射对γ射线致小鼠骨髓损伤的拮抗效应

目的研究900MHz微波辐射对γ射线致小鼠骨髓造血损伤的拮抗作用及其机制。方法^60Coγ射线一次性全身照射雄性健康昆明种小鼠，建立放射性造血损伤模型，观察不同剂量微波对小鼠1射线照射后30d存活率及存活时间、体重、外周血象和脏器系数的影响，不同时相点小鼠骨髓粒-巨噬细胞系集落形成单位（CFU—GM）形成及骨髓有核细胞（BMNCs）增殖活性的变化，同时采用ELISA法检测血清中集落刺激因子（GM—CSF）、白细胞介素-3（IL-3）分泌水平。结果^60Co γ射线照射前给予120μW／cm^2的900MHz微波辐射能明显提高受照射小鼠的存活率，促进外周血白细胞恢复，提高受照射小鼠的脾脏和胸腺系数，增强γ射线照射后，小鼠骨髓BMNCs增殖活性下降程度减小，并可促进CFU—GM集落形成，刺激GM—CSF、IL，3的表达。结论特定强度的微波辐射具有一定的辐射防护作用，其作用机制可能与刺激GM—CSF表达、促进BMNCs增殖分化、降低射线导致的造血干细胞／祖细胞（HSCs／HPCs）增殖抑制，加快造血系统的重建有关。