2022年北京冬奥会张家口赛区潜在鼠疫自然疫源地调查研究

目的分析2022年北京冬奥会张家口赛区(崇礼区)和河北省鼠疫自然疫源地(康保县)2018—2021年鼠疫调查资料,对比两地宿主媒介构成和自然地理景观差异,为崇礼区潜在鼠疫自然疫源地的研究提供科学依据。方法2018—2021年在崇礼区和康保县采用5 m夹线法和样方法捕获鼠类,对捕获鼠类及其媒介蚤类进行分类、鉴定;开展鼠疫病原学检测;使用Excel 2010对调查数据进行整理汇总,应用SPSS 19.0软件对调查数据进行统计学分析。结果在崇礼区,采用5 m夹线法有效布夹42000夹次,捕鼠515只,捕获率为1.23%;样方法调查20个样点,未捕到鼠;获鼠体蚤218只,蚤指数为0.42;在鼠体内均未检出鼠疫菌。在康保县,采用5 m夹线法有效布夹14844夹次,捕鼠304只,捕获率为2.05%;样方法共调查1060 hm^(2),捕鼠231只,平均鼠密度为0.22只/hm^(2);获鼠体蚤821只,蚤指数为1.53;在鼠体内共检出鼠疫菌6株,其中分离自长爪沙鼠3株、黑线仓鼠2株、黑线毛足鼠1株。崇礼区黑线仓鼠平均鼠密度明显低于康保县(Z=-2.309,P<0.05)。结论崇礼区与康保县的鼠种和媒介蚤类构成有明显不同,自然地理景观也存在明显差异,崇礼区发生原发性动物间鼠疫流行的可能性不大。

河北省鼠疫自然疫源地人群血清鼠疫F1抗体流行病学调查

目的调查河北省鼠疫自然疫源地人群F1抗体的三间分布情况和维持机制。方法在河北省历史人间鼠疫发生地和动物间鼠疫活动疫源地的2个镇3个行政村采集居民血样196份作为调查对象,采集非疫区的居民血样100份作为对照组。同时进行常规的鼠疫间接血凝试验和鼠疫F1抗体胶体金试验。结果通过对历史疫区和动物间鼠疫流行活动疫源地的196份居民血清检测,阳性4份,阳性率为2.04%。间接血凝试验阳性4份,金标试验阳性3份;非疫区居民血清2种试验全部为阴性。经统计学检验,疫区居民鼠疫F1抗体阳性率和非疫区F1抗体阳性率差异有统计学意义(χ2=0.822,P<0.05)。2种试验方法的阳性率无统计学意义。结论目前,在河北省鼠疫自然疫源地内尚存在一定比例的鼠疫F1抗体阳性人群,具体原因需做进一步的调查分析。

用4对引物聚合酶链反应检验鼠疫菌的研究

目的以传统的“四步检验”法为“金标准”,用4对引物聚合酶链反应(PCR)检测鼠疫动物材料,从而探索一种鼠疫快速诊断的方法。方法毒力测定和4对引物PCR按常规方法进行。结果在150份动物材料中,传统的“四步检验”作为金标准共检出阳性62份,而PCR法共检出阳性52份,经χ2检验,差异无统计学意义(χ2=1.42,P>0.05)。PCR实验在4h内全部完成。结论4对引物PCR法具有快速、敏感等优点,可以用于鼠疫的快速诊断和流行病学调查。

鼠疫F1抗体胶体金检测河北省部分人群血清F1抗体水平的流行病学调查

目的了解鼠疫F1抗体胶体金方法的敏感性,分析河北省人群鼠疫F1抗体的分布及产生该分布的原因。方法采集河北省鼠疫自然疫源地历史疫区和动物间鼠疫发生地区(张家口市)健康人群血清样本196份,保定市皮毛加工工人健康人群血清样本162份,非疫区采集100份血清作对照,用鼠疫F1胶体金法进行检测,同时做间接血凝试验,对比其最小检出量。结果通过检测,鼠疫疫源地196份血清检出阳性血清3份,阳性率1.53%;保定市162份血清样本阳性率为0;100份对照血清全部为阴性。结论鼠疫F1抗体胶体金法的最小检出量小于鼠疫间接血凝试验。在鼠疫自然疫源地存在阳性血清,血清阳性者的年龄组成都在40岁以上,保定市皮毛加工工人健康人群检验结果全部为阴性,而非疫区人群血清F1抗体亦为阴性。经过随访,3份阳性血清中,注射鼠疫疫苗产生抗体的有2份,其他不详,需要进一步探讨。

河北省康保县50年鼠疫防治工作概述

康保县是鼠疫历史老疫区,在1949-1950年曾发生猛烈的人间鼠疫流行,经过疫区处理,使疫情迅速得到控制。建国后动物间鼠疫曾有4次流行,但再无人间鼠疫的发生。是否有人间鼠疫的阴性感染,一直是困扰我们的问题。为摸清该疫区健康人群鼠疫F1抗体的分布情况,2007年对康保县历史老疫区健康人群血清进行了检测,并对该县50年鼠疫防治工作做一简单概述。

河北省鼠疫自然疫源地黑线仓鼠寄生蚤的调查

目的了解河北省鼠疫自然疫源地黑线仓鼠寄生蚤情况。方法于2006年4-7月在河北省鼠疫自然疫源地挖掘黑线仓鼠的巢穴,捕获该鼠体外寄生蚤并鉴定。结果共发现蚤类2科4属7种,黑线仓鼠体外寄生蚤的蚤指数为1.41,窝巢的染蚤率为100%,蚤指数为4.25。结论黑线仓鼠体外寄生蚤的种类较多,有利于了解鼠疫自然疫源地传播媒介种类。

河北省鄂尔多斯高原型鼠疫菌毒力试验

目的测定河北省鼠疫自然疫源地2002～2003年动物间鼠疫流行期间分离到的鼠疫菌的毒力强弱。方法实验动物选用小白鼠。选取5株具有代表性的菌株,即:200201,200202,200204,200213和200302,注射方法采用皮下注射。结果经过试验,200201的毒力较强,LD50为107个菌,200213毒力较弱,LD50为31620个菌。结论河北省鼠疫自然疫源地病原菌毒力属于中等毒力。

用4对引物聚合酶链式反应检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的用4对引物聚合酶链式反应(以下简称4-Prim er-PCR)来检验鼠疫耶尔森氏菌,对于探索鼠疫的快速诊断方法将起到推动作用。方法选择不同疫源地的40株鼠疫耶尔森氏菌;目的基因选择于与鼠疫耶尔森氏菌毒力因子有关的FI抗原质粒基因cafI鼠疫杆菌素Ⅰ基因、与色素沉着有关的质粒基因hm s以及染色体基因inv。结果该法所有的鼠疫耶尔森氏菌全部出现4对引物的预期扩增带;该试验在4 h内完成;结论四对引物鼠疫PCR法具有快速、特异、敏感等优点,可以用于鼠疫的快速诊断和流行病学调查。

2005—2007年张家口塞北区达乌尔黄鼠妊娠率调查

目的研究达乌尔黄鼠的妊娠情况，对于有效灭鼠和动物间鼠疫监测提供科学依据。方法2005—2007年4—6月在河北省张家口市塞北管理区捕获雌达乌尔黄鼠解剖至盆腔，观察达乌尔黄鼠的胚胎或妊娠斑。结果3年共调查达乌尔黄鼠雌鼠227只，其中怀胎59只，有妊娠斑119只，平均受孕率82．90％，平均怀胎4只，最少4只，最多10只。结论4月底到5月初有利于灭鼠。

河北省鼠疫菌株生化特性的研究

目的通过测定2002～2003年河北省鼠疫自然疫源地分离的27株鼠疫菌,得到其生化特性的本底资料。方法采用液体汤管法和固体试管法(斜面或高层)实验测定27株鼠疫菌对糖醇的酵解能力和生化反应。结果(1)27株鼠疫菌对甘油、L阿胶糖等多种糖酵解,产酸不产气;不发酵麦芽糖、鼠李糖,72h内对密二糖不酵解,5d以后有8株菌的部分糖管呈迟缓发酵。(2)生化反应:27株鼠疫菌在还原KNO3、硝化反应、VP试验、尿素试验、靛基质试验呈阴性,不液化明胶,在无蛋白胨酸性琼脂培基上不生长,不能利用枸橼酸盐;甲基红反应阳性,均能轻微产生H2S。结论被试的27株鼠疫菌按中国鼠疫菌生态型分型标准属于B群鄂尔多斯高原型。主要生化特征稳定,与疫源地过去分离的鼠疫菌株生化特性基本一致。

河北省鼠疫自然疫源地长爪沙鼠体蚤多样性研究

目的通过对河北省鼠疫自然疫源地长爪沙鼠种群结构和生物多样性的研究,为河北省动物间鼠疫防控提供参考。方法整理2000—2017年河北省鼠疫自然疫源地长爪沙鼠体蚤监测数据进行统计分析。结果 2000—2017年共检长爪沙鼠3 739只,带蚤长爪沙鼠1 016只,检获各种蚤1 813匹,隶属3科8属15种,秃病蚤蒙冀亚种和方形黄鼠蚤蒙古亚种为优势种,分别占41.59%和36.68%。长爪沙鼠体蚤指数和染蚤率季节消长趋势整体十分相似,全年呈单峰型。长爪沙鼠体蚤多样性、均匀性较为稳定,波动幅度较小,生态优势度在2011年之前较为稳定,2011年以后波动较大。优势度2005年、2010—2011年、2014—2017年出现小高峰。结论长爪沙鼠体蚤指数和染蚤率季节消长趋势明显,长爪沙鼠体蚤均匀性较低、优势度较高时,更容易发生动物间鼠疫。

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4(++) 2份和1:16(+)1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。

不同鼠疫检测技术在河北省鼠疫监测中的应用研究

目的通过用鼠疫血凝试验、胶体金标记免疫层析(金标)和ELISA 3种方法检测啮齿动物血清,用金标、ELISA、PCR与鼠疫反向血凝试验和细菌分离检测啮齿动物脏器,评价其在鼠疫监测中的应用效果。方法用鼠疫血凝试验、金标和ELISA 3种方法检测啮齿动物血清;用金标、ELISA、PCR、鼠疫反向血凝试验和细菌分离检测啮齿动物脏器。结果鼠疫血凝试验、金标和ELISA 3种方法对啮齿动物血清的阳性检出率分别为0.32%、0.32%和1.26%。金标、ELISA、PCR、鼠疫反向血凝试验和细菌分离对啮齿动物脏器的阳性检出率分别为3.15%、0.70%、4.90%、0.70%和0.70%。结论金标、ELISA、PCR值得推广应用,非常适合基层和快速诊断应用。

河北省鼠疫耶尔森菌毒力测定

目的 研究河北省鼠疫自然疫源地分离的鼠疫耶尔森菌（简称鼠疫菌）对小鼠和豚鼠的毒力。方法 选取2005年分离的鼠疫菌株（200501、200502、200507、200511、200512）、1972年分离的鼠疫菌株（7220）、1994年分离的鼠疫菌株（9401），腹股沟皮下注射法接种小鼠和豚鼠，动物死亡后常规解剖取肝、脾等脏器做细菌培养，计算每株鼠疫菌对小鼠和豚鼠的半数致死量（LD50）及LD50的95％可信区间，比较各菌毒力的强弱。结果 7220株和2005年分离的5株鼠疫菌毒力强，小鼠LD50介于21．72-113．59个菌；9401株毒力相对较弱，LD50为1809．88个菌。7株菌对豚鼠均有较强的毒力，LD50介于3．35×10^2-6．64×10^4个菌。结论 7株鼠疫菌属于鄂尔多斯高原型强毒鼠疫菌，对小鼠和豚鼠均有较强的毒力。

河北省鼠疫菌CRISPR基因分型及流行病学分析

目的对河北省鼠疫菌株进行规律聚集间隔短回文重复序列CRISPR)基因分型。方法利用聚合酶链式反应(PCR),采用3对CRISPR引物,对河北省分离的128株鼠疫菌进行扩增,测定扩增产物核酸序列并进行分析,确定河北省菌株CRISPR基因型。结果128株鼠疫菌在3个CRISPR位点上有8种间隔序列,包括al、a2、a3、b1、b2、c1、c2、c3,分为2个基因型。118株鼠疫菌株为Cb2型,另外10株鼠疫菌均为新基因型(命名为Cc△1型)。结论通过CRISPR分析显示河北省鼠疫菌株遗传进化比较稳定,建立了CRISPR基因库,为鼠疫菌种群遗传进化和鼠疫防控的研究提供参考。

2017年河北长爪沙鼠疫源地鼠疫菌的生态及差异区段分型研究

目的研究2017年河北康保长爪沙鼠疫源地鼠疫耶尔森菌的生态及差异片段(DFR)分型,探讨其流行特征。方法分离培养鼠疫菌,进行糖醇酵解实验以确定生态型;煮沸法提取鼠疫菌DNA,进行23对DFR和PMT1质粒序列PCR扩增,并进行PCR产物电泳分析。结果 3株菌(201701、201702和201703)均发酵甘油,阿胶糖产酸不产气;不发酵麦芽糖,鼠李糖;201701,201702两株菌迟缓发酵蜜二糖,201703不发酵蜜二糖;脱氮均为阴性。201701、201702、201703菌株均缺失DFR位点1、6、7、12、13、15、16、17、18、23。结论 2017年河北省鼠疫菌株生态型为B群鄂尔多斯高原型,差异片段分型为G20型。

鼠疫冻干血球保存时间对效价的影响

目的测定鼠疫冻干血球的保存年限对其效价的影响。方法鼠疫间接血凝试验试管法和反向间接血凝试验试管法。结果对1996～2001年不同年份生产的冻干F1抗原、抗体血球的凝集效价进行比较,结果发现冻干血球的效价随着保存时间的延长而下降。F1抗原血球可以保存3年,其效价滴度仍可达1∶4万以上。F1抗体血球低温保存3年,效价滴度在1∶5120～1∶10000。结论鼠疫F1抗原和抗体冷冻血球细胞能分别保存2年和4年。

常用技术检测河北鼠疫腐败材料的效果分析

目的评价不同检测技术检测河北鼠疫监测工作中腐败材料的应用效果。方法运用细菌培养、胶体金免疫试纸条(GICA)、反向血凝试验(RIHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)以及聚合酶链式反应(PCR)共5种检测技术对255份鼠脏器材料(肝脾混合物)新鲜时和腐败后分别进行检测,记录实验数据,进行统计分析。结果细菌培养对新鲜标本检测敏感性为100%,特异性为100%;材料腐败后,鼠疫菌培养检出受限,敏感性仅为16. 7%,经卡方检验,有统计学意义。标本腐败对胶体金免疫层析、反相血凝试验、酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应检测结果影响较小,经卡方检验,P值均远远大于0. 05,无统计学意义。结论细菌培养受材料腐败的影响很大,但它是唯一能得到纯菌的方法;抗原检测方法中,胶体金免疫层析技术操作最简单,敏感性和特异性受材料腐败的影响较小,可列为监测中筛选阳性标本的首选方法;聚合酶链式反应是基于分子水平的检测,受材料腐败的影响很小。在实际监测工作中,要联合运用细菌培养,抗原检测和基因检测,以提高鼠疫菌的检出率。