教育机智——语文教师必备的教学能力

大量的教学实践告诉我们，教学成绩的好坏，起决定性作用的不是什么学历之类，而是教师的教学能力。有的语文教师知识水平不低，但是上课并不受学生欢迎，教学效果也不理想。究其原因，缺乏教学能力是一个重要因素。所以，谈如何做一名合格的语文教师，必须讲教学能力、教...

梨火疫病菌两个Sec依赖的外泌纤维素酶鉴定及在侵染梨幼果过程中的基因表达分析

利用生物信息学技术结合基于大肠杆菌的碱性磷酸酯酶(PhoA)检测体系,在梨火疫病菌(Erwinia amylovora)全基因组序列中筛选鉴定了2个依赖Sec途径分泌的纤维素酶:内切葡聚糖酶EAMY3602和β-葡萄糖苷酶EAMY1236。将梨火疫病菌DSM17948接种酥梨幼果,分别于接种后0、8和24 h定量检测基因表达,结果显示EAMY3602编码基因(Ea3602)在接种后8和24 h的mRNA表达量逐渐降低,但与0 h相比无显著差异;EAMY1236编码基因(Ea1236)在接种后8和24 h的mRNA表达量逐步提高,较0 h分别提高了2.43和3.26倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。由研究结果推测Sec依赖分泌的内切葡聚糖酶EAMY3602可能与梨火疫病菌侵染无关,而β-葡萄糖苷酶EAMY1236可能是梨火疫病菌的毒力因子,在侵染寄主植物过程中发挥作用。

梨火疫病菌Sec依赖分泌蛋白EAMY_3046的鉴定及其原核表达

梨火疫病菌(Erwinia amylovora)是我国进境植物检疫性有害生物,针对其开展病原生物学研究,以及建立准确、快速、灵敏的检测方法至关重要。本研究从梨火疫菌株DSM 17948克隆了EAMY3046蛋白的编码基因Ea3046。该基因全长660 bp,编码220个氨基酸(amino acid,AA)。利用生物信息学与大肠杆菌碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,PhoA)检测体系,明确EAMY3046蛋白具有Sec依赖分泌特性,其N-端17个氨基酸为信号肽(signal peptide,SP),C-端为成熟蛋白,包含203个氨基酸,命名为mEa3046。将DSM 17948菌悬液接种梨幼果,分别在0、8、24 h取样,提取总RNA,进行实时荧光定量PCR分析,结果显示Ea3046在梨火疫病菌侵染寄主植物过程中表达量显著上升,在8 h和24 h分别上调2.27倍和1.68倍。此外,构建原核表达载体pET-mEa3046,导入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导16 h后,mEa3046在15℃条件下的表达量高于其在37℃的表达量,且蛋白以包涵体形式存在;利用Ni-IDA亲和层析纯化目标蛋白,经SDS-PAGE分析表明m Ea3046蛋白纯化成功。上述研究为EAMY3046抗体制备奠定了基础。