人体肝脏靶向性新型AAV血清型载体的研发

通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC)。将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库。利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12。通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强。

光诱导RNAi系统的构建及优化

利用光诱导基因表达系统,构建光诱导RNAi系统,并对系统转染比例、转录因子的表达量和shRNAmir表达载体的核心启动子进行优化。通过构建不同启动子的光敏转录因子GAVPO表达载体和不同核心启动子的shRNAmir表达载体,分析它们对报告基因的干扰效果的影响。结果表明,GAVPO的表达量对报告基因沉默效果和shRNAmir的背景表达水平至关重要。低表达量的GAVPO能够实现对报告基因的微调控,报告基因的表达量下降到约60%;而高表达量的GAVPO能够高效抑制报告基因表达,报告基因的表达量下降到34%。

转变观念 全面实施素质教育

近年来，我校坚持全面贯彻党的教育方针，紧紧围绕素质教育这个主旋律，彻底转变教育观念，努力打通应试教育向素质教育转轨的通道，全面实施素质教育。重点抓了以下几项工作：

靶向心肌组织的新型腺相关病毒载体的构建及筛选

为了构建以心肌为靶点的基因治疗载体,通过DNA shuffling技术对选择的8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)衣壳基因进行了重组,构建了随机突变体AAV衣壳文库。将随机突变体AAV衣壳文库在小鼠体内直接筛选,最终筛选得到高心肌靶向和低肝脏靶向的新型AAV衣壳:AAVH50与AAVH59。通过尾静脉注射,将AAV携带的荧光素酶(Luc)基因递送到小鼠体内,结果表明:在检测的11个组织中,AAVH50与AAVH59在心肌组织的基因表达高于其他组织。与AAV6、AAV9相比,AAVH50与AAVH59心肌中的Luc表达水平相近,肝脏中的表达明显低于AAV9。AAVH50和AAVH59感染原代新生大鼠心肌细胞后,AAVH59在心肌直接感染的效率明显高于AAV9。