改良法大鼠肝星状细胞的分离培养及鉴定

目的 :改良大鼠肝星状细胞 (hepaticstellatecells,HSC)的分离培养及鉴定方法 ,使之简便易行 ,高效可靠。方法 :采用肝离体胶原酶灌注消化 ,低速离心去除肝细胞 ,密度梯度离心法分离HSC ,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率 ,desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定HSC纯度。结果 :采用改良法 ,每只大鼠的HSC得率为( 2 .5 4± 0 .13)× 10 7个 ,细胞活率为 ( 98.8± 0 .7) % ,高于旧方法的HSC得率 [( 2 .18± 0 .18)× 10 7个 ,P <0 .0 1]和活率 ( 94.3± 0 .6 ) % ,P <0 .0 1]。用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定 ,HSC纯度为 ( 96 .8± 1.0 ) % ,高于单用desmin鉴定的纯度 ( 91.8± 2 .2 ) % (P <0 .0 1)。结论 :改良的大鼠HSC分离培养方法简便易行又经济 ,在保证纯度的同时 ,提高了得率和活率。采用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定细胞纯度 。

大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的 建立并鉴定肝星状细胞 (HSC)细胞系。 方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC ;通过体外长期传代培养后建立 1株细胞系 ,应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究。 结果 HSC细胞系已传了 78代 ,保持着肌成纤维样细胞的形态学特点。细胞倍增时间为 36 5h ;细胞的染色体众数 4 2条 ,为正常大鼠体细胞的染色体表型 ;双层软琼脂培养未见细胞克隆形成 ;免疫细胞化学检测表明 ,细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α SMA、iNOS、ICAM 1、TGF α ;RT PCR检测表明 ,该细胞系表达TGF β、ICAM 1;聚硅酮膜培养法显示 ,HSC细胞系能在ET 1作用下产生收缩反应。结论 HSC细胞系符合建系标准 ,是 1株新建立的大鼠肝星状细胞系 ,命名为rHSC 99,可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型。

趋化因子受体CXCR4/CXCL12信号转导通路与胃癌淋巴结转移关系的研究

目的:检测趋化因子受体CXCR4/CXCL12信号转导通路在胃癌组织、远癌正常粘膜以及转移淋巴结中的表达情况,分析CXCR4/CXCL12在胃癌淋巴结转移中的作用。方法:应用Westernblot检测胃癌组织中CXCR4/CXCL12通路成员表达。结果:胃癌组织中CXCR4/CXCL12表达水平明显高于正常胃粘膜(P<0.05);32例淋巴结转移癌组织中22例CXCR4/CXCL12蛋白表达高于原发癌;CXCR4/CXCL12表达水平与淋巴结转移有关(P(0.05)。结论:趋化因子受体CXCR4/CXCL12在原发胃癌及其淋巴结转移癌组织中均呈高表达,CXCR4信号转导通路可能在胃癌淋巴结转移过程中起重要作用。

Stat3信号传导通路对结肠癌细胞G_1～S期的调控

目的 :探讨Stat3信号传导通路对结肠癌细胞G1～S期调控的可能机制。方法 :应用阳离子脂质体介导Stat3反义寡核苷酸转染人结肠癌SW 4 80与HCT116细胞 ,阻断其Stat3通路 ;MTT法检测细胞增殖状态 ;流式细胞术检测细胞周期 ;Westernblot检测Stat3、磷酸化Stat3、G1期Cyclins、CDKs、p2 1、p2 7的表达。 结果 :转染Stat3反义寡核苷酸后结肠癌细胞增殖受抑制 ,Stat3、磷酸化Stat3、G1期Cyclins、CDKs表达水平下降 ,p2 1与p2 7表达水平上升。结论 :Stat3信号传导通路可能通过调节CDK/Cyclin复合物与CKI成员之间的平衡而调节结肠癌细胞G1～S期转换。

Stat3信号转导通路调控bcl-2成员表达及抑制结肠癌细胞凋亡的机制

目的转录信号转导子与激活子3(Signal transducers and activators of transcription 3,Stat3)通路受细胞因子与生长因子的刺激而活化,参与调节细胞的增殖、分化与凋亡,探讨Stat3反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法用阳离子脂质体介导Stat3反义寡核苷酸转染人结肠癌HCT116细胞,MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期与凋亡;Western blot检测Stat3、磷酸化Stat3及凋亡家族成员bcl-2、bcl-xL、Mcl-1、Caspase-3的表达。结果转染Stat3反义寡核苷酸后HCT116细胞增殖受抑制,凋亡细胞增多,Stat3、p-Stat3与bcl-2家族成员表达水平下降。结论Stat3信号转导通路活性增高可能与结肠癌发生发展有关,阻断Stat3通路可以诱导结肠癌细胞凋亡。

计算机行肝脏CT断层三维重建及测量在肝癌中的应用研究

目的 探讨利用个人电脑及自行开发的软件对肝脏CT断层图像进行三维重建和测量及其在肝癌患者的临床意义。方法 术前对 46例行原位肝移植的肝硬变门静脉高压症患者和 5例肝癌患者的肝脏CT断层图像进行三维重建和测量 ,术后与肝硬变门静脉高压症患者切除的受体实测肝体积进行对比分析。结果 对 46例肝硬变门静脉高压症患者用本方法测得平均肝脏体积为 ( 983 .3 3± 2 0 6.11)cm3 ,同组实测平均肝脏体积为 ( 90 4.93± 2 0 9.5 6)cm3 ,二者之间呈高度正相关 (r =0 .969) ,本方法测值的平均误差为 8.66%。本方法三维重建肝形状与切除同例肝标本实际形状基本相似。可任意角度旋转来观察三维重建肝。可以在重建肝脏同时重建肿物。当肿物被周围组织遮挡显示不清时 ,可用半透明显示法对肝脏进行半透明处理。同时 ,可测定肿物的体积及预计肝切除后的预留肝量。结论 运用该方法在个人电脑上实现肝脏连续CT断层图像三维重建和体积测量准确性较高。对术前明确肝肿瘤范围 ,正确选择手术术式 ,预测手术进程以及对肝病患者的随访和疗效判定 ,活体肝移植供受体匹配选择都有一定帮助。

Stat3信号转导通路调控Caspase-3表达促进结肠癌细胞凋亡的机制

目的本研究探讨Stat3/Caspase-3信号转导通路调控结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法用阳离子脂质体介导Stat3反义寡核苷酸转染人结肠癌HT29细胞,MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期与凋亡;Westernblot检测Stat3、p-Stat3、Caspase-3与Bcl-2凋亡家族成员Bcl-2和Bcl-xL的表达。结果转染Stat3反义寡核苷酸后HT29细胞增殖受抑制,凋亡细胞增多,Stat3,p-Stat3与Caspase-3表达下降,Bcl-2与Bcl-xL变化不明显。结论阻断Stat3通路可以抑制靶基因Caspase-3表达并诱导结肠癌细胞凋亡。

微创体系中人文思想的探索

医学人文学是发展现代医学的一项重要内容。从微创医学体系中的人文思想、探索微创人文思想的意义、实现微创医学过程中的微创人文思想三个方面对建立在现代医学模式基础上的微创医学体系发展中的有关人文思想进行了系统的探索,以揭示微创医学体系中人文思想的意义和价值,同时强调其在医疗实践中的实际应用。

趋化因子受体CXCR4／CXCL12信号转导通路在结直肠癌肝转移中的作用

目的:探讨CXCR4／CXCL12在结直肠癌肝转移中的作用．方法:应用Western blot检测160例结直肠癌患者标本中肿瘤组织、邻近正常黏膜以及肝转移组织中CXCR4／CXCL12通路成员的表达情况,免疫组织化学法检测CXCR4／CXCL12在细胞水平的分布．结果:与正常组织相比,结直肠癌组织中 CXCR4／CXCL12表达水平明显增高(P<0．05); 与原发肿瘤相比,10例肝转移组织中CXCR4／ CXCL12表达增高(CXCR4:3．9±0．5 vs 2．2± 0．3,P<0．05:CXCL12:3．6±0．5 vs 2．4±0．3, P<0．05):TNMⅢ、Ⅳ分期CXCR4／CXCL12表达水平比Ⅰ、Ⅱ分期显著增加有关(CXCR4: 3．4±0．6 vs 1．8±0．3．P<0．05;CXCL12:3．6± 0．5 vs 1．8±0．4．P<0．05)．结论:趋化因子受体CXCR4／CXCL12在原发结直肠癌与肝转移组织中呈高表达,CXCR4／ CXCL12信号转导通路可能在结直肠癌肝转移过程中起一定作用．

肝硬变门静脉高压症患者肝体积测量研究及其临床意义

目的 探讨用个人电脑及自行开发的软件对肝脏CT断层图像进行三维重建和测量及其在肝硬变门静脉高压症患者中的临床意义。方法 术前对 46例行原位肝移植的肝硬变门静脉高压症患者和 3 0例正常对照者的肝脏CT断层图像进行三维重建和测量 ,术后与肝硬变门静脉高压症患者切除的受体实测肝体积进行对比分析。结果 46例肝硬变门静脉高压症患者用本方法测得平均肝脏体积为 (983 .3 3± 2 0 6.11)cm3 ,同组实测平均肝脏体积为 (90 4.93±2 0 9.5 6)cm3 ,二者之间呈高度正相关 (r =0 .969,P<0 .0 1) ,本方法测定值的平均误差为 8.66%。正常对照组用本方法测得平均肝脏体积为 (12 87.0 0± 96.18)cm3 ,与其身高、体重和体表面积之间均存在着正相关关系 (r值分别为 0 .845、0 .83 3和 0 .93 2 ,P<0 .0 1)。肝硬变门静脉高压症患者肝脏体积与Child Pugh分级有关 ,C级患者肝脏体积明显小于B级者 ;也与血浆白蛋白水平呈显著正相关 (r =0 .496,P<0 .0 1) ,与总胆红素水平 (r =-0 .493 ,P<0 .0 1)及凝血酶原时间 (r =-0 .5 17,P<0 .0 1)呈显著负相关 ,与ALT值 (r =0 .2 0 6,P>0 .0 5 )、门静脉压力 (r =-0 .0 93 ,P =0 .5 3 9)及门体自然分流指数 (r =0 .0 44 ,P =0 .769)无明显相关关系。结论 运用该方法对肝脏CT?

Stat5b/Survivin信号转导通路调控结肠癌细胞凋亡的机制

目的:探讨Stat5b/Survivin信号转导通路调控结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:用阳离子脂质体介导Stat5反义寡核苷酸转染人结肠癌HT29细胞,MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期与凋亡;EMSA检测Stat5活性;Western blotting检测Stat5、p-Stat5、cyclin D1、Survivin与Bcl-2凋亡家族成员Bcl-2和Bcl-xL的表达。结果:转染Stat5反义寡核苷酸后HT29细胞增殖受抑制,凋亡细胞增多,Stat5、p-Stat5与Survivin表达下降,Bcl-2与Bcl-xL变化不明显。结论:阻断Stat5通路可以抑制靶基因Survivin表达并诱导结肠癌细胞凋亡。

创伤后早期神经内分泌改变与应激性高血糖

目的：观察应激时血糖代谢与神经内分泌改变的关系，探讨胰岛素抵抗的机制和意义。方法：前瞻性，教学医院SICU，外科大手术后病人30例。于术毕即刻（AS）、脱离呼吸机后（AW）和术日凌晨（NM）分别测定外周血糖和胰岛素（INS）、C肽（C-P）、皮质醇（CORT）、促肾上腺皮质素（ACTH）、生长激素（GH）、胰高糖素（GL）（以上放免法），肾上腺素（E）和去甲肾上腺素（NE）（高效液相色谱法）水平。结果采用秩和检验及多元直线相关进行统计学分析。结果：术后患者的血糖及CORT、ACTH、E和NE均显著升高，分别为2．3g／L、280．7μg／L、47．6ng／L、324.4ng／L和1511．0ng／L；脱机后逐渐下降，至凌晨显著降低，分别为1．89g／L、134．4μg／L、7．38ng／L、92．6ng／L和975．5ng／L。C－P明显升高并和INS一起逐渐递增，在AS和NM分别为3．59μg／L，对5．27ng／L和20．8mU／L对32．7mU／L。GH和GL3个时相均在正常范围。结论：外科术后早期存在应激性高血糖和胰岛素抵抗，血糖水平主要受NE调节，24h后逐渐复常；胰岛素抵抗的原因在效应细胞受体下调，是机体应激时重要的自我保护手段。

Stat5反义寡核苷酸联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Stat5反义寡核苷酸(Stat5AS-ON)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗胃癌的作用机制.方法:Stat5AS-ON、5-FU单用或联用处理胃癌细胞BGC823,Westernblot检测Stat5、p-Stat5、cyclinD1与Bcl-xL表达,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡.结果:Stat5AS-ON与5-FU作用于BGC823细胞72h后,G1期细胞比率由65.7%上升至78.2%,S期细胞比率分别由18.6%,下降至10.5%,凋亡细胞百分比由7.4%增加至21.6%.Stat5AS-ON与5-FU可以抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,联合应用Stat5AS-ON与5-FU可以起协同作用,明显抑制胃癌细胞Stat5信号转导通路活化.结论:选择性阻断细胞内信号转导通路可能为治疗胃癌提供新途径.

微囊内残余海藻酸钠对微囊化大鼠肝细胞功能的影响

生物人工肝治疗急性肝功能衰竭简单方便,其中确保肝细胞的功能是关键.采用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化技术包被肝细胞既能阻隔免疫反应,囊内细胞呈球状生长符合肝细胞的生长状态,是人工肝有应用前景的细胞之一.但微囊内残余海藻酸钠在成囊后不能很快排出,对肝细胞功能的影响研究较少,故进行探讨.

Stat5反义寡核苷酸联合Jak激酶抑制剂AG490调控结肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制

目的探讨Stat5反义寡核苷酸(Stat5AS-ON)联合Jak激酶抑制剂(AG490)治疗结肠癌的作用机制。方法应用Stat5AS-ON与AG490处理结肠癌细胞HT29,Westernblot检测Stat5、p-Stat5、cyclinD1与Bcl-xL表达,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡。结果Stat5AS-ON与AG490作用于HT29细胞72h后,G1期细胞比率由72.7%上升至87.2%,S期细胞比率分别由19.6%,下降至7.5%,凋亡细胞百分比由8.7%增加至24.2%。Stat5AS-ON与AG490可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,联合应用Stat5AS-ON与AG490可以起协同作用,明显抑制结肠癌细胞Stat5信号转导通路活化。结论选择性阻断细胞内信号转导通路可能为治疗结肠癌提供新途径。

肺鳞状细胞癌结肠转移合并副肿瘤综合征1例

肺癌是常见的恶性肿瘤，然而肺癌结肠转移在临床上非常少见，提示患者已经出现广泛转移且预后不良。1980年以来英文文献共报道了约13例有临床症状的肺癌结肠转移。本院2004年9月收治1例伴有多种副肿瘤综合征的肺鳞状细胞癌结肠转移患者，现报道如下。

STATs信号传导通路成员选择性活化与结直肠癌发生机制的研究

目的检测STATs信号传导通路重要成员在结直肠癌组织中的表达与活化,分析STATs成员与结直肠癌临床病理特征的关系。方法应用Westernblot检测结直肠癌组织中Stat1、Stat3、Stat5及其下游产物cyclin D1、Bcl-xL的表达,免疫组织化学法检测STATs成员在细胞水平的分布。结果结直肠癌组织中STATs信号传导通路成员Stat3、Stat5及其下游产物cyclin D1、Bcl-xL蛋白表达水平明显高于正常肠黏膜(P<0.05);p-Stat3、p!Stat5表达水平与TNM分期较晚(Ⅲ/Ⅳ)及淋巴结转移有关(P<0.05),cyclin D1与淋巴结转移有关(P<0.05),p-Stat3与cyclinD1在结直肠癌组织中表达情况呈线性相关,相关系数为0.480(P<0.05)。结论STATs信号传导通路持续活化可能在结直肠癌的发生中起重要作用,其详细作用机制还需要进一步研究。