活性氧对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响

目的 探讨氧自由基导致神经元钙超载的发生机制。方法 在神经母细胞株 SH- SY5 Y细胞体外培养的基础上 ,采用全细胞膜片钳技术 ,观察 H2 O2 对 SH- SY5 Y细胞 L 型钙电流 (ICa,L)的影响。结果 (1) H2 O2 能够明显增加峰值 ICa,L,且该作用具有浓度依赖性。 (2 ) H2 O2 使 ICa,L的 I- V相关曲线下移 ,但对其形状和最大激活电位无明显影响。结论 H2 O2 对 L 型钙通道有明显的增强作用 ,此可能是其导致神经元钙超载的机制之一。

川芎嗪对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响

目的 研究川芎嗪对神经母细胞株 SH-SY5 Y细胞 L型钙通道的影响。方法 在 SH-SY5 Y细胞体外培养的基础上 ,采用全细胞膜片钳技术观察川芎嗪对 SH-SY5 Y细胞 L型钙电流 (ICa,L)的作用。结果 (1 )川芎嗪能够明显抑制峰值 ICa,L,且该作用具有浓度依赖性。(2 )川芎嗪使 ICa,L的 I-V曲线上移 ,但对其形状无明显影响 ,并且最大激活电位亦基本保持不变。结论 川芎嗪对 SH-SY5 Y细胞 L型钙通道具有明显的抑制作用。

氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞一氧化氮合成的影响

目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白 (OX- L DL)对血管内皮细胞合成一氧化氮 (NO)的影响 ,以阐明 OX- LDL在动脉粥样硬化 (AS)发生中的作用。方法 在内皮细胞培养基中分别加入 0、50、1 0 0、1 50 μg/ ml的低密度脂蛋白 (LDL)和 OX- LDL,37℃下温育2 4 h,然后采用镉柱还原比色法检测条件培养基中 NO的含量 ,采用化学发光法检测内皮细胞一氧化氮合酶 (NOS)的活性。结果 与L DL组和对照组比较 ,OX- L DL组明显减少内皮细胞 NO产生量和抑制 NOS活性。结论 OX- L DL能够抑制内皮细胞合成 NO。

APP17肽对快速老化小鼠SAMP10学习、记忆功能和海马神经细胞线粒体氧化应激水平的影响

目的:观察APP17肽(β-Amyloid precursop protein,APP,319-335肽段)对快速老化小鼠SAMP10(senescence accelerated mouse/prone10)学习、记忆功能及海马神经细胞线粒体氧化应激的影响。方法:4月龄的SAMP10小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组,正常对照组采用抗快速老化小鼠SAMR1(senescence acceleratedmouse/resistance1)。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽,每只每次0·34μg,每周3次;模型组和正常对照给予等量的生理盐水;28周后成模。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化,应用羟胺法和硫代巴比妥酸(TBA)比色法分析海马神经细胞线粒体氧化应激反应水平。结果:(1)水迷宫结果显示,模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍,其游完全程的时间和错误反应次数均较正常对照组增多(P<0·05);APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组,其上述的水迷宫检测结果与正常对照组比较无显著差异。(2)模型组小鼠海马神经细胞线粒体SOD活性明显低于正常对照组(P<0·01),MDA含量显著高于正常对照组(P<0·01);APP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近,SOD活性高于模型组(P<0·05),而MDA含量低于模型组(P<0·01)。结论:快速老化小鼠SAMP10存在学习和记忆功能障碍;而且其海马神经细胞线粒体氧化应激反应明显加剧。APP17肽具有清除自由基和抑制氧化应激反应的作用,从而提高脑组织的抗氧化能力,保护学习、记忆功能。

脑血管病患者血清脂蛋白(a)水平的观察

为了研究脂蛋白（ａ）［ＬＰ（ａ）］与脑血管病的关系，对９３例脑血管病患者血清ＬＰ（ａ）水平进行了检测，并与１９名年龄、性别匹配的正常人进行了对比分析。结果显示，脑血栓形成、脑出血及脑动脉硬化症患者血清ＬＰ（ａ）水平明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。此外，还对不同病变部位的脑血栓形成急性期患者血清ＬＰ（ａ）水平做了比较分析，发现皮层梗塞患者的血清ＬＰ（ａ）水平明显高于基底神经节区梗塞患者（Ｐ＜０．０５）。提示血清ＬＰ（ａ）水平增高是脑血管病的重要危险因素。

动脉粥样硬化性血栓性脑梗塞患者血浆氧化修饰低密度脂蛋白含量的研究

目的探讨氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）与动脉粥样硬化性血栓性脑梗塞（ＡＴＣＩ）发生、发展的关系。方法应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗夹心法检测了８３例ＡＴＣＩ患者血浆ＯＸ－ＬＤＬ含量变化。结果（１）ＡＴＣＩ组血浆ＯＸ－ＬＤＬ水平显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）；血浆ＯＸ－ＬＤＬ水平变化与病程有关，但与梗塞部位无关。（２）ＡＴＣＩ患者血浆ＯＸ－ＬＤＬ水平与血糖、血胆固醇呈正相关。结论ＯＸ－ＬＤＬ可能参与了ＡＴＣＩ的发生和发展过程。

APP17肽对APP转基因小鼠学习记忆能力和海马神经细胞凋亡的影响

目的观察APP(-βamyloid precursop protein,APP)17肽(APP695中319-335肽段)对APP转基因小鼠(APP695V717I)学习、记忆能力及海马神经细胞凋亡的影响。方法3月龄的APP695转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组,正常对照组采用月龄和性别与之相匹配的C57BL/6J小鼠。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽,每只每次0.34μg,每周3次;模型组和正常对照组给予等体积NS。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化,以流式细胞技术分析海马神经细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化。结果(1)水迷宫试验结果显示,模型组小鼠存在明显学习和记忆功能障碍,其第3、4、5天游完全程的时间[(93.22±16.35)、(86.73±20.26)、(77.13±29.35)s]和错误反应次数[(6.63±2.16)、(5.81±2.13)、(5.33±1.41)次]均较正常对照组[分别为(70.89±20.19)、(61.25±21.88)、(54.63±16.92)s和(5.01±1.93)、(2.97±0.96)、(2.31±1.01)次]增多(P<0.05);APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组(P<0.05),其上述水迷宫检测结果与正常对照组比较差异无统计学意义。(2)与正常对照组小鼠海马神经细胞凋亡发生率[(3.13±1.19)%]和线粒体膜电位[(176.39±13.88)mV]比较,模型组凋亡发生率[(8.06±2.31)%]显著增加(P<0.01)而线粒体膜电位[(97.51±15.73)mV]明显降低(P<0.01);APP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近,海马神经细胞凋亡发生率[(4.38±1.26)%]低于模型组(P<0.01),线粒体膜电位[(168.35±19.29)mV]高于模型组(P<0.01)。结论APP695转基因小鼠存在学习和记忆功能障碍,且其海马神经细胞凋亡率增加,线粒体膜电位降低;APP17肽能够明显改善该转基因小鼠的学习和记忆能力,其作用机制可能是通过稳定线粒体膜电位及抑制凋亡发生而实现。

脂蛋白（a）与脑血管疾病关系的研究进展

脂蛋白（ａ）与脑血管疾病关系的研究进展杜怡峰，韩仲岩脂蛋白（ａ）简称Ｌｐ（ａ），是一种特殊的血浆脂蛋白，它于１９６３年由Ｂｅｒｇ首先发现并命名。其后，世界各地的有关学者就这方面进行了不少探索，目前已逐渐认识到血浆Ｌｐ（ａ）与动脉粥样硬化、脑血管疾病有...

Kh DIC小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽的影响

目的观察Kh D IC(KM hn/IDLJ IMP CAMS)小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽(-βamyloid precursor pro-tein,APP,319-335肽段)的影响。方法2.5月龄的Kh D IC小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组,正常对照组采用月龄和性别相匹配的正常昆明(KM)小鼠。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽,每只每次0.34μg,每周3次;模型组和正常对照给予等量的生理盐水;25 w后成模。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化,应用羟胺法和硫代巴比妥酸(TBA)比色法分别检测了海马神经细胞线粒体抗氧化酶活性及自由基水平。结果①水迷宫结果显示,模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍,其游完全程的时间和错误反应次数均较正常对照组增多(P<0.05);APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组,其上述的水迷宫检测结果与正常对照组比较无显著性差异。②与正常对照组比较,模型组小鼠海马神经细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性明显降低(P<0.01),丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.01);APP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近,SOD活性高于模型组(P<0.01),而MDA含量低于模型组(P<0.01)。结论①Kh D IC小鼠存在学习和记忆功能障碍;而且其海马神经细胞线粒体氧化应激反应明显加剧。②APP17肽具有清除自由基和抑制氧化应激反应的作用,从而提高脑组织的抗氧化能力,保护学习、记忆功能。

氧化修饰低密度脂蛋白刺激血管内皮细胞表达VCAM-1的实验研究

目的：探讨氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）对血管内皮细胞表达血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ—１）的影响，以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法：在血管内皮细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）和ＯＸ－ＬＤＬ，３7℃下温育 ２４小时，应用定量免疫细胞化学分析技术检测内皮细胞 ＶＣＡＭ－１蛋白的表达。结果：与对照组和ＬＤＬ组比较，ＯＸ－ＬＤＬ组内皮细胞ＶＣＡＭ－１蛋白的表达显著增加。结抡：ＯＸ－ＬＤＬ能够明显刺激内皮细胞ＶＣＡＭ－１的表达。

新生大鼠海马神经细胞原代培养方法的改良

①目的 建立较理想的新生大鼠海马神经细胞体外原代培养方法。②方法 采用低浓度、长时间胰酶消化和机械分离相结合的方法进行单层原代培养。③结果 在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化 ,并能形成典型的神经细胞网络。④结论 该培养技术是海马神经细胞体外培养的理想方法。

急性脑梗死患者血清sICAM-1变化及临床意义

为探讨细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)与急性脑梗死 (ACI)发生发展的关系 ,应用酶联免疫吸附试验(EL ISA )双抗夹心法检测了 48例 ACI患者发病后 2 4小时内、第 3天、第 7天、第 14天血清内可溶性 ICAM- 1(s ICAM- 1)含量的变化 ,同时采用葡萄糖氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别测定了血糖和丙二醛 (MDA)水平。结果显示 ,ACI发病后 2周的血清 s ICAM- 1含量明显高于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ;发病后 2 4小时内即见血清s ICAM- 1水平增高 ,至第 3天达最高水平 ,以后逐渐降低。血清 s ICAM- 1水平与 MDA和血糖呈正相关。认为ICAM- 1参与了 ACI的病理损伤过程 。

Alzheimer病胰岛素信号传导通路的研究

目的探讨胰岛素信号传导通路相关蛋白变化在Alzheimer病发生发展中的作用。方法 1)体外原代培养Wistar胎鼠基底前脑胆碱能神经元并鉴定,以不同终浓度的纤维化Aβ1-40分别对原代培养的神经细胞进行干预,荧光显微镜观察细胞形态学变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,提取细胞总蛋白行免疫印迹(Western Blotting)检测神经元胰岛素信号转导通路相关蛋白的表达。2)用微量注射器在痴呆模型组大鼠侧脑室注射Aβ1-42寡聚体5μl,同样的方法于盐水(NS)组大鼠注射生理盐水5μl,正常组大鼠不做任何处理。2周后通过Y-迷宫实验检测大鼠行为学改变并取海马组织进行免疫组化染色。结果 1)以2μmol/L、5μmol/L和10μmol/L三个终浓度纤维化Aβ1-40进行干预的胆碱能神经元,细胞形态学观察及MTT实验均显示神经元活性有下降趋势,且下降程度与纤维化Aβ1-40浓度呈正相关。以μ5mol/L浓度的纤维化Aβ1-40对细胞进行不同时长(24h,48h,72h)干预后,细胞形态学观察及MTT实验均显示神经元活性的下降程度与纤维化Aβ1-40的干预时长呈正相关。2)以2μmol/L、5μmol/L和10μmol/L 3个终浓度纤维化Aβ1-40进行干预的胆碱能神经元,其胰岛素信号传导通路相关蛋白中,InsR(Insulin Receptor)、IRS-1[Insulin Receptor Substrate-IRS-1、Akt/PKB(serine/threonine protein kinase B)]及Bcl-2的表达减低,减低程度与纤维化Aβ1-40干预浓度呈正相关;以5mol/L终浓度的纤维化Aβ1-40对细胞进行不同时长(24h,48h,72h)干预后,InsR、IRS-1、Akt/PKB及Bcl-2表达的减低程度与纤维化Aβ1-40干预时长呈正相关。3)AD模型组大鼠海马区神经元InsR、IRS-1和Akt/PKB比对照组表达减低(P<0.05),差异有统计学意义。结论 Aβ可引起神经元损害和学习记忆功能障碍,其主要机制可能是介导了海马神经元胰岛素信号转导通路功能异常。

缺血性脑血管病病人血浆氧化修饰低密度脂蛋白的检测

①目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白 (OX LDL)与缺血性脑血管病的关系。②方法 应用酶联免疫吸附试验测定了 10 6例缺血性脑血管病病人血浆OX LDL含量。③结果 短暂性脑缺血发作 (TIA)组和脑梗死组血浆OX LDL水平均高于对照组 (F =14.6 7,q =5 .339.85 ,P <0 .0 1) ,且脑梗死急性期较恢复期明显升高(q =4.0 7,P <0 .0 5 )。④结论 血浆OX LDL水平增高可能与缺血性脑血管病的发生发展有密切关系。

血管因素与老年认知功能减退

目前已有许多证据表明,正常人或健康的脑老化现象与神经系统退行性疾病之间,具有相似的病因、发病机制和生化改变,相互重叠的临床和神经病理特征。鹿特丹研究(The Rotterdam Study)发现痴呆患病率从55岁的不到1%,增加到90岁及以上的超过40%,且血管病理学和血管危险因素与认知功能降低相关。有关研究显示,高血压、糖尿病、高胆固醇血症、脑血管病等能导致轻度认知功能障碍(MCI)认知下降促进其向阿尔茨海默病(AD)的转换。糖尿病、LDL、总胆固醇水平与老年认知功能下降程度有关。纵向观察性研究发现,高血压特别是发生于中青年期且未经有效控制的高血压与晚年发生痴呆症的风险有关。而服用抗高血压药物与痴呆症危险性降低有关联,临床随机化对照试验也部分支持在老龄高血压人群中用药物控制血压能降低痴呆发病风险。挪威Nord-Tr?ndelag健康研究(HUNT研究)于1984-1986年(HUNT1)和1995-1997年(HUNT2)纳入24 638名受试者,随访时间最长27年(平均17年),监测受试者的血压和认知功能。完成全部检测的受试者中,有579名被诊断患有AD,混合性痴呆或Va D。在瑞典一项队列研究中,基线时纳入793名认知正常的年龄≥50岁的中老年人,进行23年随访。根据受试者血糖水平及医院诊断、降糖药应用情况将受试者分为非糖尿病、前驱糖尿病、糖尿病3组。该研究发现患有前期糖尿病的受试者记忆力比无糖尿病的受试者更差(P=0.035)该研究还发现糖尿病受试者语言能力的逐年下降(P=0.014)和感知速度的下降(P=0.012)均大于无糖尿病受试者。社区动脉粥样硬化风险研究纳入13997名受试者,20年中随访5次。研究发现,总胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的升高与执行功能、注意力和处理速度测试的下降有关。高总胆固醇和甘油三酯水平与记忆的下降有关;但高密度脂蛋白胆固醇与认知改变无关。观察性研究表明中年期高胆固醇血症与晚年AD风险增加有关,尽管小规模临床随机化对照试验未能证明服用降胆固醇药物能降低AD风险。系统综述支持中年期肥胖和晚年AD发病危险增加有关,但中年后体重下降或晚年(如年龄≥75岁)低体重指数可能是AD临床前期的伴随现象。另外,神经病理学证实AD与脑血管疾病共存,它们共享许多风险因素,导致认知能下降的累加或协同效应。大量研究证明,大多数AD患者的脑血管结构发生变化。脑血管疾病和AD之间存在相当大的重叠,白质损伤(WML)患病率增加Aβ这些病变降低痴呆的临床表现的阈值,表明WML与脑Aβ负荷之间存在正相关关系。人群神经影像学研究也证实,不仅具有临床表现的脑卒中而且隐匿性脑梗塞以及腔隙梗塞、脑白质病变和微出血等脑小血管疾病(cerebral small vessel disease)均增加认知功能退化和痴呆症发病风险。近10多年研究表明,SVD(脑微血管或小血管损害)与衰老过程中的认知损害、轻度认知障碍和老年痴呆有密切关系。总之,长期暴露于心血管危险因素在AD的发生、发展中可能发挥重要作用,尤其是脑卒中与AD病理损伤的关系需要重视和进一步探索。

氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞株ICAM-1表达的影响

目的 观察氧化修饰低密度脂蛋白 (OX LDL)对血管内皮细胞表达细胞间粘附分子 1(ICAM 1)的影响 ,以探讨其在动脉粥样硬化和缺血性脑血管病发病过程中的作用。方法 在血管内皮细胞的培养基中分别加入 2 5μg mL的低密度脂蛋白 (LDL)和OX LDL ,37℃下温育 2 4h ,应用定量免疫细胞化学分析技术检测血管内皮细胞ICAM 1蛋白的表达。结果 OX LDL组血管内皮细胞ICAM 1蛋白的表达显著增加 ,而LDL组只有轻微增加。结论 OX LDL可能通过刺激血管内皮细胞ICAM

氧化修饰低密度脂蛋白与动脉粥样硬化关系的研究进展

近年的研究表明氧化修饰低密度脂蛋白在动脉粥样硬化的发生与发展中可能起着重要作用。本文就低密度脂蛋白氧化修饰的过程,影响氧化修饰的因素以及氧化修饰低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的可能机理作一简述。

氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞DNA合成的影响

目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白 (OX- LDL)对血管内皮细胞损伤的机制。方法 在人脐静脉内皮细胞体外培养的基础上 ,通过采用 3H-胸腺嘧啶核苷 (3H- Td R)掺入 DNA技术和硫代巴比妥酸比色法 ,分别分析了 OX- LDL对内皮细胞 DNA合成及脂质过氧化物 (LPO)的代谢产物丙二醛 (MDA)含量的影响。结果 当内皮细胞暴露于 OX- LDL(50～ 2 0 0μg/ ml) 2 4 h后 ,其 3H- Td R掺入明显减少 ,但 MDA含量显著增加。结论 OX- LDL能够明显抑制内皮细胞 DNA合成 ,并显著增加内皮细胞的脂质过氧化物含量。