福建省茶树病毒种类鉴定及多重PCR检测技术的建立

【目的】明确福建省茶树主要病毒种类和分布情况,并建立同时快速检测多种病毒的多重PCR检测技术。【方法】2019—2023年,从福建省福州、南平、宁德、泉州、漳州、厦门、三明、莆田和龙岩9个地市区采集具有褪绿、皱缩和坏死等疑似病毒感染症状的茶树样品1869份,采用高通量测序技术结合PCR和RT-PCR检测的方法对茶树病毒病的病原进行鉴定,并将PCR扩增获得的特异性目的片段进行克隆和测序,对获得的序列进行系统发育分析;同时,根据GenBank上已报道的病毒序列设计特异性引物,通过退火温度、引物浓度、循环数等反应条件和反应程序的优化,建立同时检测福建茶树主要病毒的多重PCR检测技术,并测定该技术的特异性、灵敏度及实际应用效果。【结果】从所采集的茶树病样上检出3种病毒,按检出率从高到低依次为油茶双生病毒(oil tea associated geminivirus,OTaGV)(48.90%)、茶树坏死环斑病毒(tea plant necrotic ring blotch virus,TPNRBV)(26.75%)和茶树潜隐病毒1(camellia cryptic virus 1,CCV1)(17.98%);在检出病毒的1258份样品中,有807份为OTaGV、TPNRBV或CCV1单独侵染,检出率分别为37.20%、21.38%和5.56%;其余451份样品为2种或3种病毒复合侵染,复合侵染检出率达35.85%,OTaGV+CCV1、TPNRBV+CCV1、TPNRBV+OTaGV、OTaGV+CCV1+TPNRBV 4种类型复合侵染检出率分别为17.49%、0.40%、14.71%、3.26%。在地理分布上,OTaGV在福州、南平、宁德、泉州、漳州、厦门、三明、莆田和龙岩9个地区均有分布,其中漳州OTaGV检出率最高,为96.77%;CCV1在福州、南平、宁德、泉州、漳州、三明、莆田和龙岩8个地区均有分布,其中三明CCV1检出率最高,为66.00%;TPNRBV在福州、南平、宁德、泉州和漳州5个地区均有分布,其中泉州TPNRBV检出率最高,为79.13%;在福建省9个地区中,厦门地区仅检出OTaGV,三明、莆田和龙岩地区检出OTaGV和CCV1,其他5个地区同时检出OTaGV、TPNRBV和CCV1;福州、南平、宁德、泉州、漳州、三明、莆田7个地区检测到病毒复合侵染,其中漳州地区病毒复合侵染检出率最高(85.00%)、宁德地区病毒复合侵染检出率最低(23.03%)。利用测定的CCV1和TPNRBV部分基因序列构建系统发育树,结果表明本研究获得的CCV1分离物(FW)与已报道的福建分离物FJ-SH104(GenBank登录号:ON807095)亲缘关系最近、TPNRBV分离物(FU)与福建分离物QZHA92(GenBank登录号:OQ948454)亲缘关系最近。经优化建立的多重PCR检测技术特异性强,仅OTaGV、TPNRBV和CCV1能扩增出特异性目的片段,而其他病毒及健康茶树样品上均未扩增出特异性目的片段;多重PCR灵敏度最低可以检测到稀释至10^(-4)倍的OTaGV、TPNRBV和10^(-3)倍的CCV1;利用该多重PCR检测技术对茶园中采集的60份病样进行检测,检测结果与单一PCR检测结果完全相符。【结论】OTaGV、TPNRBV和CCV1是当前福建茶树上主要病毒种类,其中OTaGV为福建地区首次报道,该病毒可侵染茶树也为首次发现;在检出的3种病毒中,以OTaGV发生分布范围最广,其次为CCV1、TPNRBV;福建地区茶树病毒目前仍以单独侵染为主,但同时存在较多的复合侵染,复合侵染类型包括TPNRBV+CCV1、TPNRBV+OTaGV、CCV1+OTaGV和OTaGV+CCV1+TPNRBV;建立的多重PCR检测技术特异性强、灵敏度高,可用于茶园茶树上OTaGV、CCV1和TPNRBV3种病毒的快速检测。研究结果可为福建茶树病毒病的综合防控提供理论依据和技术支持。

基于动态事件树的安全风险分析方法

针对系统安全分析过程中,传统静态方法的局限性和现有动态方法的侧重点不同,对动态事件树分析方法进行了研究,给出了其基本理论概念,描述了基本建模过程。以某冷却缓冲装置的安全控制为例,实现了动态事件树的建模方法,通过仿真得到了该装置随时间演化过程中的动态行为及其事故演化的路径、时间和概率等信息。分析结果验证了动态事件树分析方法在动态概率安全分析中的有效性和适用性。

多射频无线Mesh网中的接口分域信道分配

在多射频多信道无线Mesh网中,是无线宽带接入的重要候选技术之一.为了满足无线宽带接入的容量要求,Mesh路由器节点常需要配置多个无线接口并使用多个正交信道.已有的信道分配方法虽能减少干扰和碰撞,但不能完全避免.本文提出一种域内中心式调度的接口分域信道分配(ICCA)方案,旨在完全避免干扰与碰撞以提高网络吞吐量,尤其能够降低传输时延,特别适合实时业务传输.

工业流化床反应器一级旋风分离器入口颗粒物性MP-PIC模拟

流化床反应器在石化和煤化工等重要工业领域应用广泛,在工业流化床反应器中,通常在顶部稀相空间内安装多组旋风分离器,用于分离夹带在出口气流中的颗粒。如何准确预测入口颗粒浓度和粒径分布对合理设计旋风分离器系统并保障其工艺分离性能至关重要。首次基于一套工业流化床反应器,利用MP-PIC多相流模型研究了颗粒在稀相空间的夹带行为,重点对比了稀相空间有无旋风分离器组对一级旋风分离器入口颗粒浓度及粒径分布的影响。结果表明,工业流化床反应器由于稀相空间内存在旋风分离器,使局部气体流通面积减少、气速增大、横截面轴向气速不均匀度升高,导致夹带进入旋风分离器中的颗粒量比没有旋风分离器时高很多,这表明采用基于传统小型冷模试验颗粒夹带关联式计算得到的旋风分离器入口浓度大幅低于实际的旋风分离器入口浓度。旋风分离器入口颗粒粒度分布也与密相床层及整个系统中颗粒粒度分布存在一定差异,平均粒径更小。

木尔坦棉花曲叶病毒及其伴随的β卫星分子复合侵染引起广东棉花曲叶病

【目的】明确引起广东棉花曲叶病的病原,为该病害的防控提供理论依据。【方法】应用PCR、滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)、基因克隆及测序等技术获得病毒分离物GD01基因组及卫星分子的序列,并对序列进行分析;通过构建GD01及其β卫星分子的侵染性克隆p GreenⅡ049-1.6A、p GreenⅡ049-2.0β和利用农杆菌介导的注射接种方法,测定GD01及其β卫星分子对棉花的致病性;进一步通过Southern blot检测对接种植株进行分析与验证。【结果】侵染广东棉花的病毒分离物GD01基因组仅含A组分(DNA-A),其全长为2 737nt,且与在中国发现的木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCu Mu V)第一个分离物朱槿分离物G6序列相似性为100%。该病毒分离物也伴随有β卫星分子,其全长为1 345 nt,与G6伴随的β卫星分子(Cotton leaf curl Multan betasatellite isolate G6,CLCu Mu B-[G6])序列相似性为99.9%。构建了GD01 DNA-A及其β卫星分子侵染性克隆p GreenⅡ049-1.6A、p GreenⅡ049-2.0β,农杆菌注射接种本氏烟,接种后15 d,二者混合接种的本氏烟植株新出的叶片表现明显的皱缩、卷曲等症状;随着时间的推移,本氏烟的症状越来越明显。农杆菌注射接种棉花,接种后30 d,二者混合接种的棉花植株新出叶片开始出现叶脉变深绿色,叶片卷曲等症状;接种后90 d,二者混合接种的植株大部分叶片表现为叶片向上卷曲、叶脉深绿色、叶脉肿大等典型棉花曲叶症状,且与田间自然病株症状相同,而二者各自单独接种的棉花植株没有产生明显的症状。Southern blot检测结果显示,表现典型曲叶症状的接种棉花植株均含有GD01 DNA-A及其β卫星分子,进一步支持这些症状是由GD01 DNA-A及其β卫星分子的共同侵染引起。【结论】病毒分离物GD01 DNA-A及其伴随的β卫星分子与入侵中国的CLCu Mu V第一个分离物朱槿分离物G6相同,CLCu Mu V-[GD01]及其伴随的CLCu Mu B-[GD01]复合侵染引起广东棉花曲叶病,利用农杆菌介导的侵染性克隆接种法,完成了CLCu Mu V及其CLCu Mu B复合侵染引起棉花曲叶病的柯赫氏法则(Koch's Postulates)。

番茄黄化曲叶病毒在湖北首次报道

2014年春季,在湖北省武汉市发现种植的番茄表现植株矮缩,叶片上卷,叶缘黄化等症状。PCR检测结果显示,所有采集的病样中均存在菜豆金色花叶病毒属病毒。进一步通过滚环扩增方法获得了该病毒的湖北分离物HB01的全基因组。基因克隆及序列分析结果表明,该病毒基因组全长为2 781nt,与已报道的番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)各分离物同源性在89.0%以上,而与来自中国不同地区的TYLCV分离物的同源率均在97.0%以上。因此,HB01属于TYLCV的一个分离物。

水稻条纹病毒NS3蛋白与水稻3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)间的互作

水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)NS3蛋白为病毒的沉默抑制子。利用酵母双杂交技术,从水稻cDNA文库中筛选出一个与RSV NS3蛋白互作的基因片段。推测该基因的功能是编码水稻3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)。双分子荧光互补实验进一步验证了NS3与GAPDH存在互作。瞬时表达实验表明,GAPDH与GFP基因融合蛋白在本氏烟表皮细胞细胞质中大量积累。此外,讨论了GAPDH蛋白在RSV侵染水稻过程中可能的功能。

水稻矮缩病毒Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生质体后的表达

【目的】为明确水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus, RDV) Pns6和P8蛋白在病毒侵染水稻原生质体后的表达动态,【方法】利用PEG介导的病毒侵染原生质体体系,通过免疫荧光和电镜技术分析Pns6、P8蛋白以及病毒粒体在水稻原生质体中的定位;同时,通过Western blot和实时荧光定量PCR分析Pns6和P8蛋白及其RNA在水稻原生质体中的积累量。【结果】病毒接种水稻原生质体48h后,Pns6蛋白在细胞质中可以形成类似于病毒原质(viroplasm)的点状内含体,P8蛋白也大量的表达。同时,病毒粒体在水稻原生质体中也形成内含体状的结构。病毒接种水稻原生质体12 h后,均可检测到Pns6和P8蛋白的表达,并且在36 h后达到最高值。病毒接种水稻原生质体后,Pns6 RNA在24 h时表达量达到最高,P8 RNA在36 h时表达量达到最高。【结论】RDV侵染水稻原生质体后,Pns6和P8蛋白均有表达,并且病毒也可能通过形成病毒原质来完成病毒在寄主细胞的复制和装配。

霸王花褐腐病的病原鉴定

【目的】明确导致广东省霸王花Hylocereusundatus褐腐病的病原种类．【方法】通过病组织分离、致病性测定、形态学观察及rDNA序列分析等方法对广东省霸王花褐腐病病原进行了种类鉴定．【结果和结论】在PDA培养基上，病原菌的菌落为深灰色，绒毛状．产生2种类型的节孢子：一种为浅色、薄壁的柱状孢子，大小为（5．00—10．69）μm×（2．61～4．52）μm；另一种为褐色、厚壁、圆形或椭圆形、基部平截、成链的孢子，大小为（5．15～12．39）μm×（3．87～6．07）um．应用真菌通用引物ITSI和ITS4进行PCR，获得该病原菌579bp的18S-28SrDNAITS序列．BLAST结果显示，该序列与Neoscytalidiumdimidiatum火龙果菌株的18S-28SrDNAITS序列相似性最高，为99％-100％．这些研究结果表明，引起广东省霸王花褐腐病的病原菌为N.dimidiatum．

义兴寨金矿黄铁矿的标型特征及成因意义

通过义兴寨金矿床黄铁矿的世代、晶形、微量元素、热电性等标型的研究，富金地段的黄铁矿（Ⅱ、Ⅲ）具有颗粒细小、晶形为五角十二面体和复杂聚形、热电系数在＋１７３～一２７８μｖ·Ｃ￣（－１），以Ｎ型为主的混合型导电的特点。

医院工资改革初探

随着用工制度改革的日趋深入,传统的分配机制已不能与之相适应.特别是固定工资的分配长期存在着平均主义的成份,不能充分的调动广大职工的积极性,进而会制约医院的发展.打破旧的分配机制代之以新的分配机制是医院内部改革的必然途径.

基于动态事件树的风险关键状态搜索算法

关键状态是系统风险演化中的重要环节,识别关键状态对系统风险控制等具有重要意义。首先结合动态事件树基本方法给出了一类关键状态和关键事件的数学定义,然后提出了此类关键状态的两种搜索算法——基于子树分解的搜索(sub-tree decomposition,STD)算法和基于逻辑运算的搜索(boolean calculation,BC)算法,并对其计算量进行了对比分析。最后,利用本文所提出的算法对一个冷却缓冲装置进行了示例分析,验证了该算法的有效性和可行性。

刍议初中思想品德课之魂——以有效的课堂评价提高教学实效性

如何有效提高初中思想品德课课堂教学实效性？初中思想品德课如何呈现出德育魅力。“灵魂”何在？这些问题是困扰广大从事初中思想品德学科教学教师的现实问题。文章从“初中思想品德课的‘魂’、‘魂之所依’、展望未来”三方面论述，着重从改变“三观一法”，促进教师专业化成长之历炼“一法”．促进自身专业发展、提升教法的视角展开，在思品课堂教学中通过多种有效的课堂评价，使学生“青睐”思想品德课。

谈航空护林化学灭火

一、我国化学灭火的过去和现状70年代,黑龙江省林科院森林保护研究所等单位研制出以磷酸铵为主剂的“704”灭火剂和东北林业大学研制的以硫酸铵为主剂的“75型”灭火剂都取得较好的灭火效果。1982年3月,东北航空护林局科研所研制出“82—3”森林化学灭火剂,不使用进口化肥,灭火效果接近或优于“704”灭火剂,成本仅为“704”的1/4。在我国航空化学灭火至今已实施十几年,其喷洒灭火药剂520多吨,扑灭了80多个火场。1980年春季调配了5架化学灭火飞机先后在20个火场喷洒了138架次化学灭火剂。

从养鱼中感悟到的企业人才管理

乔迁新居，突然有了养鱼的兴致。于是，粘了．鱼缸，配备了循环泵、温度计等养鱼器具，在市场上买了二十条小鱼．便开始了我的第一次养鱼。我每天认真地呵护着这些小鱼。本以为我如此小心侍弄，总该把鱼养好吧。谁知，时间不长，享受着同样待遇的鱼有了分化，个头上也分出了三六九等。

番茄褪绿病毒的进化动态与适应性进化特征

【目的】番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)是长线形病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属(Crinivirus)成员,现已成为我国番茄和其他蔬菜作物上最为常见的病毒之一。研究旨在查明ToCV的进化历史,尤其是该病毒何时何地传入我国,并阐明其适应性进化机制。【方法】根据ToCV外壳蛋白(coat protein,CP)基因两侧保守区设计1对特异性引物,对随机抽取的13个ToCV分离物进行扩增克隆,将测序获得的新序列与GenBank下载的含有采样时间和地理信息的序列合并得到103条ToCV CP基因序列,采用日期随机化检验(date-randomization test,DRT)检测数据集中的时间信号,并应用贝叶斯谱系动力学框架重建该病毒的进化动态。同时,应用系统发育与性状关联分析(phylogeny-trait association analysis)评估地理因素对ToCV适应性进化的影响。【结果】13个ToCV分离物均成功扩增出预期大小(约800 bp)的特异性片段,核苷酸序列与已报道的ToCV不同分离物CP基因序列一致性均在98%以上;基于聚类排列的日期随机化检验结果显示,通过实际采样时间和日期随机化的数据集分别推断获得的替代速率在95%置信区间之间没有存在重叠,表明本研究的数据集具有足够的时间信号,可以用于后续的贝叶斯分子定年(Bayesian molecular dating)分析。贝叶斯系统发育分析显示ToCV的最近共祖时间(the most recent common ancestor)为1920年(95%置信区间:1849-1976),该病毒约于2005年左右从美国引入中国。该病毒的CP基因替代速率约为1.12×10-3替代/位点/年(95%置信区间:6.08×10-4-1.73×10-3),与动物RNA病毒的相当,表明ToCV正处于快速进化之中。此外,系统发育分析与性状关联分析结果显示ToCV分离物与其来源地区的关联系数(association index)、简约分值(parsimony score)和最大单系分支(maximum monophyletic clade)统计检验均呈极显著水平(P<0.01),表明地理因素与ToCV适应性进化之间存在很强的关联性。【结论】ToCV正处于快速进化动态,该病毒的适应性进化主要受地理因素所驱动。研究结果将有助于增加对ToCV流行病学的认识,可为制定有效的防控策略提供依据。

关于电力建设工程中材料与设备的划分

在工程实践中，由于建设单位基本建设经验不足，基础工作考虑的不细，特别是工业项目由于专业性较强，在建筑材料及设备的财务处理上较容易出现问题。我们知道材料和设备在工程投资中占有重要比例，对其管理的正确与否会直接影响成本控制成果，本文针对电厂建设中材料与设备划分问题谈点看法。

裂解炉对流段新型清焦技术的应用及结焦分析

新疆独山子石化裂解装置现具有年产220 kt乙烯能力,共7台裂解炉。为应对原料多样性,提高双烯收率,将汽油加氢单元的碳五馏出物并入石脑油作为原料进行裂解,出现大部分裂解炉运行和烧焦过程中进料量难以达到设计值或操作弹性大幅降低的现象。文中介绍了表现最严重的4号裂解炉进料困难的原因及相关解决措施。