电针激活μ-阿片受体缓解大鼠痛情绪的机制

目的:探究电针(EA)通过激活μ-阿片受体(MOR)缓解大鼠痛情绪的机制。方法:预先在前扣带皮层喙侧部(rACC)分别注射生理盐水(NS)或MOR拮抗剂CTOP,并通过给大鼠左侧足底注射0.08 ml完全弗氏佐剂(CFA)建立条件位置逃避(CPA)模型,用电针(10 Hz,3 mA)或假电针(sham EA)刺激大鼠环跳穴(GB30)。行为测试完毕后,使用Western Blot检测rACC脑组织中的MOR蛋白表达以及N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基2A和2B(NR2A和NR2B)的磷酸化水平。通过免疫荧光双标技术分别观察大鼠MOR和NR2A或NR2B的共表达情况。结果:与对照组比,注射CFA的大鼠第3 d在痛环境停留时间明显比第1 d缩短(P<0.05)并且rACC脑区p-NR2A、p-NR2B水平升高(P<0.01);电针治疗减少了CFA引起的逃避时间(P<0.05),增加了MOR的表达(P<0.01);在rACC给予CTOP后电针的作用被反转;免疫荧光结果显示在rACC脑区同一神经元上MOR分别与NR2A或NR2B共表达。结论:电针可能通过激活rACC脑区中的MOR下调p-NR2A和p-NR2B水平达到缓解CFA诱导痛情绪的效果。

大鼠脑前扣带皮层(ACC)兴奋性与厌恶情绪的行为-电生理学观察

目的:探讨激活大鼠ACC脑区的阿片受体降低伤害刺激引起厌恶情绪的作用。方法:将实验大鼠随机分为7组,完全弗氏佐剂(CFA)+生理盐水(NS)组,生理盐水(NS)+生理盐水(NS)组,生理盐水(NS)+0x0E?SymbolmA@0x0F-阿片受体激动剂([DAla 2,NMe-Phe 4,Gly-ol 5]enkephinlin,DAMGO)组,完全弗氏佐剂(CFA)+0.01/0.04/0.2/1μg/μl DAMGO组(n=6)。实验周期为3 d,第1日测量基础值,第2日预先通过ACC区域给药1μl,然后将0.08 ml完全弗氏佐剂(CFA)注射到大鼠左后脚掌,第3日观察大鼠的CPA反应、缩足反射潜伏期(PWL)和ACC脑区的电活动。结果:①皮下注射CFA的大鼠,注射前与注射后相比,PWL明显减少(P<0.05);②在笼具痛侧,CFA组大鼠停留的时间明显少于非痛侧(P<0.05);③在ACC脑区预先注射0.04/0.2/1μg/μl DAMGO可明显减弱C-CPA反应(P<0.05);④在ACC脑区预先注射0.04/0.2/1μg/μl DAMGO可以降低CFA诱发ACC脑区放电频率的增加(P<0.05)。结论:激活了大鼠ACC脑区上的μ-阿片受体可以降低伤害性刺激诱发的厌恶情绪的发生。

不同浓度的完全弗氏佐剂影响大鼠疼痛行为的观察

目的:观察脚掌注射不同浓度完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)产生的不同强度的伤害刺激对大鼠痛感受和痛情绪反应程度的影响。方法:福尔马林诱导的条件性位置回避(conditioned place avoidance,CPA)的行为测试近来被用于评估痛情绪反应。本实验采用另一种炎性致痛物质CFA在大鼠的脚掌皮下注射使之产生持续性炎性痛,诱导大鼠产生条件性位置回避(conditioned place avoidance,C-CPA)反应。根据在大鼠的脚掌皮下注射不同浓度的CFA将大鼠分为正常(Naive)组,生理盐水(NS)组,1/5 CFA组,1/3 CFA组,1/2 CFA组,之后分别检测各组大鼠的热缩足潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)和C-CPA反应。结果:1/3 CFA组和1/2 CFA组匹配后热缩足潜伏期与匹配前比较,均明显减小,即痛阈下降,且两组匹配前与匹配后的差值与生理盐水组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);1/3 CFA组的下降值小于1/2 CFA组(P<0.05);1/2 CFA组在匹配后痛侧停留的时间明显缩短,且回避分数与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CFA所诱导的PWL反应和CPA反应的程度与CFA的注射浓度有关,从行为上证实大鼠痛情绪与痛感受的产生存在不同的机制。

利用微透析技术在大鼠脑内取样的方法

本文通过查询文献并结合笔者的实际操作经验,介绍微透析技术原理,以及利用微透析技术进行清醒大鼠rACC脑区定位取样的方法。

电针刺激对大鼠条件性位置回避行为反应的影响及其作用机制

目的探讨电针(electroacupuncture,EA)刺激对大鼠条件性位置回避(conditioned place avoidance,CPA)行为反应的影响及其可能的作用机制。方法免疫荧光染色法检测正常大鼠前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)脑区组织中μ-阿片受体和NR1的共表达情况。于大鼠ACC脑区内分别预先微量注射μ-阿片受体拮抗剂CTOP及0.9%氯化钠(NS)后,经左脚掌皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)诱导产生慢性炎性疼痛,并与特定环境进行匹配,建立CPA模型,再进行环跳穴位电针(electroacupuncture,EA)刺激(即CTOP+CFA+EA组和NS+CFA+EA组),同时设假EA刺激组(EA不通电,即CTOP+CFA+shamEA组和NS+CFA+shamEA组)及对照组(ACC及脚掌均注射NS,EA不通电,即NS+NS+shamEA组),记录CPA试验的第1、3天各组大鼠在痛侧匹配室停留时间,计算回避分数。将各组大鼠放置50℃热板上,检测EA刺激对大鼠热痛行为反应的影响。Western blot法检测各组大鼠ACC脑区组织中μ-阿片受体及磷酸化NR1(p-NR1)的表达水平。结果μ-阿片受体与NR1在正常大鼠ACC脑区同一个神经元上共表达。NS+CFA+shamEA组大鼠第3天在痛侧停留时间比第1天显著缩短(P<0.001),回避分数比NS+NS+shamEA组显著增大(P<0.001);NS+CFA+EA组大鼠第3天在痛侧停留时间与第1天相比,差异无统计学意义(P>0.05),回避分数比NS+CFA+shamEA显著减小(P<0.001)。EA刺激不影响大鼠的热痛行为反应。与NS+CFA+shamEA组比较,NS+CFA+EA组大鼠ACC脑区μ-阿片受体表达量明显增高(P<0.001),p-NR1蛋白表达量明显降低(P<0.001)。CTOP可明显逆转EA刺激对CFA诱导CPA反应及ACC脑区μ-阿片受体、p-NR1的表达水平的影响(P<0.001)。结论大鼠CPA反应可能是由CFA诱导ACC脑区p-NR1水平增高导致的,而EA刺激可通过激活μ-阿片受体来减弱该反应。