布鲁氏菌效应蛋白BspH部分生物信息学分析及与其互作宿主蛋白的筛选

为分析BspH蛋白的部分分子生物信息学及与其互作的宿主蛋白,本研究通过在线软件Predicting Antigenic Peptides分析BspH蛋白的抗原决定簇、SWISS MODEL预测BspH蛋白的三级结构。委托公司合成BspH基因并构建重组表达质粒pET-B2m-BspH,经酶切和测序鉴定正确后,将pET-B2m-BspH转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达重组BspH蛋白(rBspH),利用镍柱亲和层析法纯化该重组蛋白,并经SDS-PAGE检测。将纯化的rBspH免疫日本大耳兔4次,4免后1周即首免后49 d采血分离血清制备BspH蛋白多克隆抗体(PAb)并经ELISA检测其效价,采用western blot检测该PAb与BspH蛋白的反应性。预测结果显示,BspH蛋白有19个抗原决定簇,三级结构以α-螺旋为主。SDS-PAGE结果显示,在65 ku处出现目的条带,且rBspH主要以包涵体的形式表达,纯化效果较好。ELISA和western blot结果显示,制备的PAb效价为1:1024000,且该PAb可以与纯化的rBspH反应,在65 ku处出现特异性条带。将委托公司构建的重组诱饵质粒pGBKT7-BspH和pGADT7共转化酵母菌感受态细胞,30℃培养3 d~5 d后上述转化的酵母菌在DDO/X培养板上长出蓝色菌落,表明p GBKT7-BspH质粒已转入酵母菌中,且表达了诱饵蛋白BspH;在TDO/X和QDO/X/A培养板上均不生长,且在DDO/X培养板上形成的菌落大小和数量与阴性对照酵母菌基本一致,表明诱饵蛋白BspH在酵母菌中无自激活活性和毒性。在此基础上,将pGBKT7-BspH和小鼠RAW264.7细胞cDNA文库共转化酵母菌Y2H Gold感受态细胞,以表达的BspH作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交技术从上述cDNA文库中初步鉴定与BspH存在相互作用的宿主蛋白,结果显示共有28个阳性菌落变蓝,分别提取该28个阳性菌落中的质粒并测序,将测序后的序列在NCBI数据库进行BLASTX比对分析,共得到18种同源性为88.93%~100%并能与BspH蛋白相互作用的宿主蛋白,对其中的5个宿主蛋白进一步经回交验证试验,结果显示,BspH与5个宿主蛋白AKIP1、UBXN1、HSP90AA1、PRC1、PGM1均存在互作。本研究表达并纯化了布鲁氏菌效应蛋白BspH,制备了BspH蛋白的PAb,并筛选到与BspH蛋白互作的5个宿主蛋白,为进一步探究BspH蛋白在布鲁氏菌感染中的功能及其致病机制提供参考依据。

铜仁市2019-2020年大学生对艾滋病知识认知及对艾滋病患者的态度调查

目的了解铜仁市高校大学生对艾滋病知识认知情况及对艾滋病患者的态度。方法2019年12月至2020年1月采用分层整群抽样法调查铜仁市高校在校大学生618人。自行设计调查问卷,以班级为单位进行问卷调查。结果本次调查收到有效问卷为618份(100%)。大学生对艾滋病基本知识的总知晓率为68.9%,对艾滋病的传播途径知晓率为83.9%,对艾滋病高危人群知晓率为63.9%。78.2%的大学生认为艾滋病离他们并不远,81.1%的大学生对艾滋病是畏惧的,69.5%的大学生对身边患有艾滋病的朋友或亲人表示同情;过半的大学生愿意与艾滋病患者相处。结论铜仁市高校大学生对艾滋病知识有较好的知晓率,但对艾滋病知识的掌握情况还不够全面,需加强艾滋病宣传教育工作。