云南省西部地区宿主和媒介感染伯氏疏螺旋体的基因多样性调查与分析

目的了解云南省西部地区宿主动物和媒介蜱感染伯氏疏螺旋体的基因多样性,为进一步掌握该地区莱姆病菌株的特性奠定基础。方法对采用伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA间隔区基因筛查阳性的云南西部地区采集的家畜、小型兽类、蜱虫样本,进行伯氏疏螺旋体鞭毛蛋白基因(FLA基因)和16S rRNA基因的检测,综合分析病原体的基因信息,了解当地流行株的生物学特性及流行特征。结果共检测301份样本,共检出7种基因型伯氏疏螺旋体,其中宿主动物共检出5种:B.afzelii(阿弗西尼疏螺旋体)、B.garinii(伽氏疏螺旋体)、B.burgdorferi s.s.(狭义伯氏疏螺旋体)、B.japonica(日本疏螺旋体)、B.valaisiana(法雷斯疏螺旋体);媒介蜱检出7种:B.afzelii(阿弗西尼疏螺旋体)、B.garinii(伽氏疏螺旋体)、B.burgdorferi s.s.(狭义伯氏疏螺旋体)、B.japonica(日本疏螺旋体)、B.valaisiana(法雷斯疏螺旋体)、B.sinica(中华基因型伯氏疏螺旋体)及未定种Borrelia sp.。B.afzelii、B.garinii和B.burgdorferi s.s.为优势流行株,占总阳性的85.04%(256/301)。不同地区、不同来源的相同基因型株基因序列存在种内差异,同一地区的宿主和媒介中检出的相同基因型螺旋体具有较高的同源性和较近的遗传进化关系。结论云南西部地区宿主和媒介感染伯氏疏螺旋体基因型具有较高的多样性特征,存在多种致病基因型,给当地人群的健康造成一定危害,需加强防范。

输血科全自动化转移血辫标本的多中心实验研究

目的 探索医院输血科转移血辫标本全自动化方式对于提升质量管理标准化、规范化水平的意义。方法 收集我国10家大型三级甲等综合医院输血科2021年1月~3月由所在地的采供血机构供应的悬浮红细胞(袋)上的血辫标本(从悬浮红细胞血袋上截下1段已热合好的血辫标本)共16 548份,随机均分为实验组(n=8 274):采用DS-6800A型全自动样本转移系统转移;对照组(n=8 274):采用手工转移。记录并统计比较2组转移血辫样本标签所用时间、血辫标本全流程操作所用时间、转移后标签核对准确率、台面整洁度和血辫标本转移准确率指标。结果 实验组与对照组比较,转移血辫样本标签用时(s):0.67±0.3 vs 3.67±0.6(P<0.05);血辫标本全流程操作用时(s):16.93±0.5 vs 19.85±1(P<0.05);转移后标本及标签核对准确率:100%(8 274/8 274)vs 97.91%(8 101/8 274);台面整洁度:99.19%(8 207/8 274)vs 94.39%(7 810/8 274);血辫标本转移准确率:100%(8 274/8 274)vs 95.85%(7 931/8 274)。结论 自动化仪器转移血辫标本提高了标本转移的效率和质量,有益于医院输血科实现标准化和规范化室间质评和质控。

公立医院财务风险分析及防范对策

公立医院能够为人们提供医疗服务,是整个医疗服务体系的基础。随着政策和环境的变化,公立医院的发展面临一定挑战,如果没有处理好财务问题,将会产生较大的风险,医院必须重视财务风险防范工作。本文介绍了公立医院财务风险的类型,主要涉及投资、筹资以及运营方面的风险,从外部因素和内部因素的角度上探讨财务风险的形成原因,为了有效预防和控制财务风险,提出了针对性的防范策略。

恙虫病实验室检测规范专家共识

恙虫病,又名丛林斑疹伤寒,是主要经恙螨幼虫叮咬传播,由恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)感染引起的,并以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要临床特征的一种自然疫源性疾病,主要流行于东亚和东南亚地区。恙虫病的临床症状不典型,很容易被误诊和漏诊。中国医药生物技术协会生物诊断技术分会和中国微生物学会人兽共患病病原学专业委员会的专家学者参考国际相关指南,梳理国内外恙虫病精确、快速实验室检测相关进展,总结经验,形成了本共识。旨在明确实验室检测在恙虫病确诊方面的作用,为恙虫病的早期精准和快速实验室诊断提供支持,从而为临床医生及时使用有效抗生素干预治疗和预防并发症提供有益帮助。

蜱类自然携带布鲁氏菌及其潜在传播作用

布鲁氏菌病是一种危害严重的自然疫源性疾病,传播方式复杂,病原体在疫区有多种保存形式。近年研究证明,蜱可能是布鲁氏菌储存和传播的重要途径之一,在疫源地的传播和流行中具有重要的流行病学意义。蜱可自然携带布鲁氏菌,并存在经期、经卵传递可能;蜱可能是布鲁氏菌传播媒介,在蜱传播病原体的2个重要器官(唾液腺和中肠)中检出了布鲁氏菌;已在蜱中检出B.melitensis和B.abortus两种可致人发病的布鲁氏菌,尤其B.melitensis对人具有高致病性,布鲁氏菌可能存在“家畜—蜱—家畜/人”的传播循环。

自身抗体阳性伴直接抗人球蛋白试验阳性患者血型血清学特征及输血疗效

目的探讨自身抗体和直接抗人蛋白试验(DAT)阳性患者的血型血清学特征及配血的处理方法,寻求安全、有效的输血对策。方法结合吸收放散方法采用不同厂家、批号的抗筛细胞和谱细胞对待检血清和红细胞放散液进行自身抗体和同种抗体特异性的鉴别;选取合适的献血者进行主次侧交叉配血试验;分析自身抗体、同种抗体的特异性及其与ABO血型、疾病、贫血的关联和对输血及输血疗效的影响。结果 139例研究对象均为自身抗体阳性伴DAT阳性且交叉配血试验主次侧均不合,其中20例只含有自身抗体,59例伴Rh系统或MNs系统或Kidd系统抗体,47例为自身抗体不能排除同种抗体,13例伴有药物抗体或其他系统抗体;共进行221次输血治疗,未发生溶血性输血反应。自身抗体和DAT的凝集强度与贫血呈正相关(P<0.05),与输血疗效呈负相关(P<0.05);自身抗体的强度与自身红细胞被致敏的程度呈正相关(P<0.05),且多为免疫性疾病,与ABO血型无明显相关性(P>0.05)。结论对于自身抗体伴DAT阳性的病例,其贫血的严重程度、输血次数、输血后疗效与自身抗体和DAT的凝集强度有关,交叉配血前必须采用合理的流程和方法判定是否伴有同种抗体,选取相应抗原阴性的献血者或该地区出现较高频率的同种抗体对应的抗原系统同型的献血者配血,可提高安全输血效率,最大限度地减少输血不良反应发生。

云南西部地区居民区小型兽类携带病原体检测

目的了解云南西部地区居民区小型兽类携带病原体情况,为自然疫源性疾病的防治提供科学依据。方法在滇西地区8个州(市)中抽取的10个县(市、区)40个自然村中,随机抽取800户家庭(每村20户),进行室内捕鼠,采集鼠脾脏标本并提取基因组DNA,鼠肺标本提取RNA,运用聚合酶链反应(PCR)或免疫学方法,检测鼠疫、巴尔通体、伯氏疏螺旋体、巴贝西原虫、人粒细胞无形体、埃立克体、汉坦病毒等病原体。结果捕获9种421只小型兽类,采集脏器样本404份,血清样本325份。检出鼠疫F1抗体两种方法共同阳性血清1份;扩增到巴尔通体枸橼酸合酶(gltA)基因64份,阳性率为15.84%,基因分析表明属6种基因型;检出伯氏疏螺旋体5S^23S rRNA间隔区基因5份,阳性率为1.24%,系统发育树显示均为Borrelia afzelii型;检出1例复合感染。其余病原体检测均为阴性。结论滇西地区室内小型兽类感染病原体种类多,分布广,对人类健康有一定的危害,需加强监测并采取预防控制措施。

血小板输注无效相关因素的研究进展

目的血小板的主要生理功能是参与止血和凝血过程。血小板输注是现代成分输血的重要组成部分。近年来,血小板的临床使用日益增加,伴随而来血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)相当棘手,其相关因素主要分为免疫性和非免疫性两大类。免疫因素主要包括人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)、人类血小板同种抗原(human platelet alloantigens,HPA)、ABO血型相容性、CD36等;非免疫因素包括脾肿大、感染发热、弥散性血管内凝血(DIC)、药物、临床因素和个体差异等。

鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的:利用原核表达的鼠疫耶尔森氏菌P la蛋白(rP la),通过杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(mAb),为相关研究工作奠定基础。方法:大肠杆菌表达的P la蛋白,包涵体经尿素反复洗涤纯化后免疫BALB/c小鼠,取血清抗体效价高的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,以表达Pla、表达GST、天然提取Pla 3种蛋白为抗原物,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,并结合Western blot对所获取mAb的特异性进行鉴定。结果:经间接ELISA筛选,获得3株能稳定分泌抗天然Pla蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为15B8、14H4、19A4,亚类测定分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ链;腹水经间接ELISA法检测效价可达1∶106;Westernblot实验证实该3株mAb能特异性识别天然Pla蛋白。结论:成功获得了抗鼠疫耶尔森氏菌天然Pla抗原的特异性mAb,为进一步研究Pla蛋白及研发诊断试剂奠定了基础。

杂交瘤细胞(10株)染色体形态、数目与抗体分泌的关系

目的:探讨杂交瘤细胞染色体形态、数目与抗体分泌能力及稳定性的关系。方法:对我室融合成功的10株杂交瘤细胞,采用秋水仙素法制备染色体,分别计数100个完整的中期分裂相细胞,并观察其形态。制备腹水和收集细胞培养上清液,间接ELISA法检测抗体效价。结果:经染色体计数与分析,10株杂交瘤细胞中,7株瘤株细胞间染色体形态一致,分散好,既有端着丝点染色体,也见中间着丝点染色体,染色体数目的标准差小于5.0,腹水和细胞培养上清抗体效价高,分泌稳定性好;3株染色体数差异大、标准差大的瘤株中,2株抗体效价低,分泌不稳定。结论:杂交瘤细胞染色体形态、数目与其分泌单克隆抗体的能力和稳定性有关,进行染色体分析有利于了解瘤株特性,可作为筛选高效、稳定瘤株的参考依据。

鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价

目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。

BALB/c小鼠选择与腹水产量和抗体效价间关系的研究

目的观察在鼠疫F1单克隆抗体制备过程中，BALB／c小鼠的选择和饲养与所获腹水量和抗体效价的关系，为大量制备该单克隆抗体提供实验室参考依据。方法根据小鼠周龄、性别和饲养条件对BALB／c小鼠进行分组，并采用动物体内诱生法制备腹水，间接ELISA用来检测腹水中F1单克隆抗体效价。结果12～16周龄组、雄性和加强营养组小鼠所获腹水产量和效价均高于其它周龄组和对照组。结论选择适当周龄的雄性小鼠、饲养过程中加强营养和管理可适当提高腹水产量和抗体的效价。

单克隆抗体大量生产技术及研究进展

随着单克隆抗体在医学基础、临床诊断、治疗及其他领域的广泛应用,生产技术也随着现代科技的进展而迅速发展。单克隆抗体生产技术的提高解决了单抗应用中存在的一些问题,拓展了单抗的应用空间。现就单克隆抗体大量生产技术作一综述。

人脂联素基因在L-02细胞中表达及其功能检测

目的:在人正常肝细胞株L-02中表达外源人脂联素蛋白,并观察其生物学活性。方法:采用脂质体法将成功构建的人脂联素真核表达质粒pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-Adiponectin转染L-02细胞;免疫组织化学定位观察脂联素的表达;Western blot检测培养上清及细胞沉淀中脂联素水平;酶联免疫法测定培养基血糖。结果:构建的真核表达质粒能有效转染L-02细胞,并在培养上清及细胞沉淀中检测到脂联素蛋白,该重组蛋白能够降低高糖处理的L-02细胞的血糖水平。结论:重组人脂联素蛋白能在L-02中有效表达,该蛋白定位在细胞质,并且能分泌到胞外,表达产物经体外实验证实具有生物学活性。

平均分布细胞进行鼠疫杂交瘤株克隆化的实验研究

目的探讨在建立了分泌抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株后,对其进行克隆化的实验方法。方法对我课题组融合成功的5株杂交瘤株,采用初步计数后取约100个细胞,平均分布于96孔细胞培养板进行克隆化,用间接ELISA法检测培养孔上清的抗体。结果用该方法进行克隆化,在96孔板中单克隆生长孔平均为26孔、多克隆为15孔,在1～2次克隆后,上清抗体检测均达到100%,与有限稀释法无差异。结论采用计数100个细胞进行克隆化的方法是可行的。

鼠疫F1单克隆抗体腹水制备过程中的影响因素分析

目的分析制备鼠疫F1单克隆抗体腹水中的一些影响因素。方法收集课题组在制备腹水过程中的相关资料并进行分析。结果腹水的制备受小鼠、免疫抑制剂、杂交瘤细胞的性状、腹水的采集与处理等方面因素的影响。结论通过采取一些措施,可以适当提高鼠疫F1单克隆抗体的腹水质量。

重症监护室老年糖尿病合并多器官脏器衰竭临床分析

目的探讨重症监护室老年糖尿病合并多器官脏器衰竭的临床特征,以为疾病治疗提供参考。方法选取2015年4月—2017年3月该院重症监护室收治的110老年糖尿病患者为研究对象,其中有32例为老年糖尿病合并多器官脏器衰竭患者,将110例老年糖尿病患者按照血糖水平分成A组(36例)、B组(36例)、C组(38例),对患者的临床治疗进行分析。结果 32例老年糖尿病合并多器官衰竭患者中,器官衰竭数量在3~7个之间,同时随着器官衰竭数量的增加,患者的病死率也明显上升;3组不同血糖水平的患者中,C组出现多器官脏器衰竭的人数明显要多于A组与B组,B组多于A组,即血糖水平升高与多器官脏器衰竭并发数呈正相关关系。结论重症监护室老年糖尿病合并多器官脏器衰竭中,器官脏器衰竭数量与病死率呈正相关,同时多器官脏器衰竭发生也与血糖水平有直接联系。因此临床上有效降低患者血糖水平以及在多器官脏器衰竭前设法阻断单器官衰竭向多器官衰竭发展是降低患者死亡率的关键。

云南居民区鼠类体外寄生蚤物种多样性调查

【目的】了解云南居民区鼠类寄生蚤的群落结构和空间分布特征。【方法】根据云南不同经纬度、海拔等自然环境条件，于2007年4月-2012年11月，选取云南17个县（市）居民区作为样区，系统开展鼠类体外寄生蚤的调查，运用群落结构指标对居民区鼠类寄生蚤的群落特征和沿环境梯度的空间分布进行研究。【结果】结果显示：在调查的17个县（市）室内共检获鼠类体外寄生蚤521头，隶属4科7亚科9属12种。居民区寄生蚤的纬度和垂直分布类似，低纬度和低海拔范围的种类相对较少，印鼠客蚤和缓慢细蚤是室内寄生蚤的优势种。相对纬度和海拔较高的区域，居民区寄生蚤种类增多，但优势种不突出；在经度水平分布上，蚤种类于99°～101°E经度带形成一个高峰，室内寄生的优势种印鼠客蚤和缓慢细蚤几乎在所有经度带都可见到分布，显示了较宽的生态幅。另外，居民区寄生蚤物种丰富度和多样性指数水平分布（纬度）和垂直分布呈现为单峰格局，总体显示随着纬度和海拔的升高，先升高后降低的分布特征，而在另一个水平分布（经度），则呈现由西向东呈递减的趋势。【结论】研究认为，云南居民区蚤类的空间分布表现为独特的地理区域特征，气候环境、森林植被和人类生活生产方式通过影响蚤类栖息生境来影响蚤类的分布。

云南鼠疫耶尔森菌基因分型研究

目的通过对来自云南省鼠疫自然疫源地155株鼠疫菌进行基因分型,了解鼠疫菌的进化规律。方法根据22个差异区段(differentregions,DFR)设计引物,PCR扩增鼠疫菌的每个DFR。结果滇西山地闽广沿海居民区黄胸鼠鼠疫自然疫源地137株鼠疫菌的基因型均为9型。滇西山地齐氏姬鼠大绒鼠鼠疫自然疫源地18株鼠疫菌,有10株菌为7型,8株菌为9型。结论滇西山地齐氏姬鼠大绒鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌的基因型为7型和9型,而滇闽广沿海居民区黄胸鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌的基因型主要为9型。两疫源地鼠疫菌在遗传关系上有亲缘性,后者可能由前者进化而来。