新城疫检测技术的研究新进展

新城疫作为禽类重要的传染病之一,从发现至今已有80多年的历程,给养殖业带来不可估量的经济损失,因此对于该病的研究具有重要的意义。文章简要介绍了新城疫的几种免疫分析方法和分子生物学检测方法。

ICP-MS法测谷类和杂豆类中元素的比较

分析谷类和杂豆类中铁、锌、钙、镁等元素含量,探讨不同类别杂粮中元素的含量情况,对常见杂粮中人体所需的各种元素做出评价。采用微波消解处理杂粮样品,电感耦合等离子体-质谱(ICP-MS)法进行元素含量测定。杂粮中元素含量区间变化较大,如谷类中钒和豆类中的硒元素含量相差两三个数量级,元素之间含量差别也较大,如谷类中镁和硒,豆类中的钙和钴等。结果还表明谷类中的各种元素含量都较豆类中偏低,两类杂粮中铁、锌、钙、镁、铜、锰的含量都较高,采用统计软件SPSS11.5进行分析,结果显示钙、钼、钴、锡含量有显著性差异。结论表明:谷类和杂豆类两类杂粮中都含有丰富的人体必需元素,尤其是杂豆类中钙、钼、钴、锡、硒等元素含量较高,可能参与人体的多种代谢途径,具有更大的营养学意义,为食品工业和居民合理膳食结构提供基础数据,为制定科学合理的营养健康政策提供参考。

禽流感病毒检测技术的研究新进展

禽流感已被列为世界卫生组织(WHO)的流感大流行警告5级,中国将其列为一类传染病。该病的暴发不仅对养禽业造成毁灭性的危害,而且严重威胁到人类生命安全。为此快速准确的诊断对禽流感的防控具有重大的意义,文章就禽流感诊断方法的研究进展作一综述。

新城疫病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

为建立一种新城疫病毒(NDV)的简便、快速、高灵敏度的检测方法,本研究根据NDV融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,在恒温水浴中进行核酸扩增反应,对反应温度、反应时间以及反应液中Mg2+浓度进行优化,获得最佳反应条件,结果经凝胶电泳分析并在可见光下直接观察。整个RT-LAMP检测用时0.5 h,检测敏感度比RT-PCR高100倍,对禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒无交叉反应。本研究建立的NDV RT-LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强,操作简单等特点,有望在核酸扩增检测方法中取代RT-PCR技术。

3种新城疫病毒核酸扩增检测方法的比较研究

本研究利用3种方法对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行检测,并对这3种检测方法的灵敏度和特异性作出比较。根据新城疫病毒的融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP实时浊度仪进行检测。通过对恒温水浴中的反应温度、反应时间及反应液中Mg2+浓度进行优化获得最佳反应条件,结果用凝胶电泳分析;用优化的温度进行LAMP实时浊度仪检测,同时都与PCR方法进行比较。结果显示,获得了最佳反应条件,水浴LAMP方法最低检测限是1.58pg,比PCR高100倍,而LAMP实时浊度仪检测灵敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低检测限是0.158pg。3种方法对其他非新城疫病毒均无检出。结果表明,新城疫病毒水浴LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,有望在核酸扩增领域取代PCR技术,LAMP浊度仪法检测灵敏度更高,但是所需仪器和试剂比较昂贵。

农兽药多残留检测方法的研究进展

农药污染和兽药残留已对环境和人类健康构成严重威胁,农产品的质量安全问题日益突出,迫切需要开发简便、价廉、快速的农兽药多残留检测技术。目前,国内外在农兽药多残留检测方面的研究得到了长足的进展,研制出各种适合于农兽药多残留的检测方法。文章主要介绍了仪器分析法、免疫分析法在农兽药多残留检测中的研究进展和应用现状,讨论了各种检测方法存在的问题,并且对检测方法的发展进行了展望。

悬液芯片与常规酶联免疫吸附法检测庆大霉素残留的比较

目的:建立庆大霉素兽药残留的悬液芯片直接竞争检测法,并同时与常规酶联免疫法进行比较。方法:将庆大霉素单克隆抗体与表面带有羧基的聚苯乙烯微球通过酰胺键偶联形成检测探针,利用碳二亚胺法将庆大霉素与藻红蛋白偶联后形成酶标物,采用直接竞争法,在液相体系中庆大霉素与藻红蛋白酶标物竞争性与单克隆抗体相结合,反应后通过荧光信号获得庆大霉素竞争曲线。同时进行庆大霉素直接竞争酶联免疫法曲线的测定。对两种方法在检出限、检测区间以及加样回收率方面进行比较。结果表明:悬液芯片IC10、IC50分别为0.1、2.8ng/mL,检测区间为0.1～100ng/mL,酶联免疫竞争法IC10、IC50为0.27、1.95ng/mL,检测区间为0.1～10ng/mL。两种方法在牛奶、鸡肉、鸡肝、猪肉和猪肝中的回收率均在80%～120%之间。另外,悬液芯片法与其他氨基糖苷类抗生素基本无交叉反应,特异性良好。结论:悬液芯片系统具有操作简单,灵敏度高以及特异性良好等特点,与传统经典的农兽药残留酶联免疫检测法相比,具有一定的优势,从而为农兽药残留检测提供了新的检测技术。

改良逆转录环介导等温扩增检测技术快速实时检测H9亚型禽流感病毒

利用改良逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术建立一种快速、灵敏的检测方法用于H9亚型禽流感病毒检测。根据H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区序列中的8个区段设计6条特异性引物,在恒温条件下进行核酸扩增反应,并以琼脂糖凝胶电泳和目视检查绿色荧光两种方法对扩增结果进行判定。结果表明,RT-LAMP的最小检测限为100 fg,灵敏度比PT-PCR高100倍,且与H5亚型、H7亚型禽流感病毒,新城疫病毒(NDV)无交叉反应。目视检查绿色荧光与常规琼脂糖凝胶电泳的判定结果一致。整个扩增检测过程在35 min内即可完成。利用临床样本对RT-LAMP法进行验证,结果与RT-PCR一致。由实时浊度分析得到的标准曲线,计算出临床样本中的病毒质粒拷贝数均在2×107-2×104之间。因此,本研究建立的RT-LAMP方法快速、灵敏、特异性强,是H9亚型禽流感病毒的一种高效检测方法。

全自动尿沉渣分析仪联合尿干化学检测法在尿液检测中的应用

目的探究尿液检测中全自动尿沉渣分析仪联合干化学检测法的应用效果。方法随机选取本院2018年4月至2019年4月采集的276例患者尿液标本为研究对象,比较并分析单一尿干化学检测法、单一全自动尿沉渣分析仪、全自动尿沉渣分析仪联合尿干化学检测法的尿液检测效果,包括白细胞、红细胞、管型等指标,以期证实全自动尿沉渣分析仪联合尿干化学检测法的应用价值。结果全自动尿沉渣分析仪联合尿干化学检测法对白细胞、红细胞、管型的阳性检出率均高于单一尿干化学检测法、单一全自动尿沉渣分析仪,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在尿液检测中联合使用尿干化学法及全自动尿沉渣分析仪,可取得理想的检测效果,能为医生制定合理、有效的治疗方案提供重要依据,可进一步优化治疗效果,提升患者健康水平。

尿液分析仪与显微镜红细胞计数法在尿隐血检测中的应用比较

目的探究尿隐血检测中应用尿液分析仪与显微镜红细胞计数法的检验价值。方法选取2018年11月至2019年11月本院收治的171例需实施尿隐血检测患者作为研究对象,先对患者实施显微镜红细胞计数法检验(A组),再进行尿液分析仪潜血检测(B组)。分析并比较两种检测方法的诊断阳性率及医师对检测操作流程的满意率。结果B组检测阳性率为76.61%,A组检测阳性率为73.10%,组间比较差异无统计学意义;B组操作满意率为100.00%,明显高于A组的50.00%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论尿液分析仪与显微镜红细胞计数法对检测尿隐血均有一定检测价值,而尿液分析操作过程简单,诊断率较高,值得临床推广。

辽宁省朝阳地区八种小杂粮中必需微量元素的测定分析

采用微波消解法处理样品,电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定辽宁省朝阳地区较为常见的八种小杂粮(玉米、黏米、高粱米、红豆、豇豆、苏立豆、燕麦和荞麦)中铁、锌、铜、锰、硒、钼、钴、铬、镍九种人体必需的微量元素含量。结果表明,朝阳地区杂粮中人体必需的微量元素含量丰富,半微量元素铁及微量元素锌、锰含量相对较高,同种样品中不同微量元素的差异较大;杂粮中豆类的钼、钴含量最为丰富,显著高于米类和麦类杂粮(P<0.05),麦类杂粮中含有较为丰富的锰元素。该结果可为杂粮的营养价值评价及加工与利用提供科学依据,并对人们合理膳食具有一定的指导意义。

辽宁地区部分粮食中元素含量的测定及聚类分析

分析辽宁地区常见杂粮中的元素含量,研究杂粮中元素含量与其种类之间的相关性,以期为杂粮的分类和营养评价提供一种新的方法。采用微波消解处理样品,电感耦合等离子体-质谱法(ICP-M S)测定19种粮食中14种元素的含量,用统计软件(SPSS11.5)进行系统聚类分析。19种粮食均含有丰富的人体所需的元素,聚类分析其相似性较大,分成两大类,与粮食的传统性分类相符。用元素含量作为粮食的特征对粮食进行分类方法是可行的,相关系数较大的作物,其传统分类中的亲缘关系相似性也较大,揭示粮食中元素含量与作物的亲缘关系相关,并从元素含量方面进行营养价值评价,用于指导人们合理膳食,为人体各种元素的获得及保持平衡提供科学依据。

新城疫病毒3种检测方法的研究比较

目的:利用3种方法对新城疫(Newcastle disease virus,NDV)病毒进行检测并对这3种检测方法的优缺点做出比较。方法:分别将NDV强毒F48E9和弱毒Lasota接种SPF鸡胚后,获取尿囊液。利用双抗夹心ELISA法、悬液芯片系统以及RT-PCR进行检测。通过对制备的针对新城疫病毒的抗体4D9和6C4蛋白浓度测定后,选择6C4进行生物素标记,将4D9作为固相捕获抗体,利用生物素-链霉亲和素放大系统构建双抗夹心检测体系。通过对Genebank上已发表的新城疫强弱毒F基因进行电脑分析后,设计一组针对NDV强弱毒的通用型引物,分别对强弱毒进行RT-PCR并检测其检出限。结果:ELISA法对NDV强弱毒尿囊液的检出灵敏度为1∶160,但操作繁琐,耗时长;液相芯片对强弱毒尿囊液的检出限为1∶160和1∶320,然而和ELISA相比,操作较为方便,但仪器设备昂贵。RT-PCR对强弱毒RNA检出限分别为259pg和14pg,与前两种方法相比,PR-PCR在核酸水平上对病毒进行检测,理论上灵敏度较高,但是所需试剂、设备昂贵,且实验人员还需一定的技能培训。

环介导等温扩增(LAMP)技术的应用现状

LAMP技术具有简便、快速、高效、特异性强等优点,尤其适用于人类和动物疾病的检测,本文重点论述了目前LAMP方法在病原微生物检测、临床诊断、胚胎性别鉴定以及转基因食品等领域的应用及研究情况。表明该方法已具有成功应用的现实性,为快速基因检测提供了一种新的技术途径,可望作为常规检测工具。

分析全自动血细胞分析仪和血涂片细胞形态学联合应用在血常规检验中的具体价值

目的:研究常规检验中采用全自动血细胞+血涂片细胞形态学的应用效果。方法:选取2017年5月~2019年5月本院血常规检验的260例患者的血液标本作为研究对象,对这些样本均进行全自动血细胞分析仪检测以及血涂片细胞形态学检测。结果:在抽取的260例血液样本中,采用血涂片细胞形态学检测的阳性率是10%;采用全自动血细胞分析仪检测报警提示的阳性率是15%。血涂片检测和全自动血细胞分析仪在原始细胞、单核粒细胞、幼稚粒细胞、红细胞形态异常、嗜酸性粒细胞以及杆状粒细胞中的检测符合率分别是:66.67%、50.00%、75.00%、50.00%、86.67%、42.86%。结论:在对患者的常规血液检测中,采用全自动血细胞分析仪+血涂片细胞形态学检查,可发挥协同互补的作用,将二者的优势充分发挥,提高检测效果,值得临床借鉴应用。