一种高效经济的高质量植物RNA提取方法

建立了一种高效经济的植物RNA提取方法 .在提取缓冲液中加入蔗糖、氯化钾和镁离子以提供对RNA分子的保护 .破碎后的细胞于提取缓冲液中裂解后 ,用酚 /氯仿变性并去除内源RNA酶和其他蛋白质 ,而后用pH 5 6 的NaAc沉淀RNA .用该方法提取RNA的得率较高 ,经电泳检测 ,RNA的完整性很好 .RNA印迹分析和RT PCR也都得到很好的结果 .该方法还使实验成本大大降低 .

一种快速检测蛋白酶抑制剂电泳活性的染色方法

根据特异蛋白酶抑制剂抑制靶蛋白酶的作用而阻止水解的原理 ,借助明胶 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品 ,胶板经蛋白酶水解后 ,以考马斯亮蓝染色 ,建立了一种简便、直观、灵敏的检测蛋白酶 (胰蛋白酶 )抑制剂活性的染色方法 。

快速检测植物类囊体膜蛋白体内磷酸化的方法

借助特异的磷酸蛋白探针 ,建立了快速检测植物类囊体膜蛋白体内磷酸化的方法 ,可以检测到光照处理的豌豆叶圆片类囊体膜中 8条磷酸化蛋白带存在 ,它们的分子质量分别为 6 5、 45、 36、 33、 30、 2 9、 2 0和10ku .进一步使用光系统Ⅱ反应中心蛋白和捕光色素复合物Ⅱ (LHCⅡ )的特异抗体 ,确定了上述磷酸化蛋白的归属 ,分别是磷酸化D1和 (或 )D2的聚合体 (6 5ku)、CP43(4 5ku)、D2 (36ku)、D1(33ku) ,LHCB1(30ku) ,LHCB2 (2 9ku)和 psbHgene产物 (10ku) ,2 0ku小肽尚不清楚其来源 .

铵胁迫下Bacillus aryabhattai NM1-A2脂质代谢的多组学分析

为了探究脂质代谢在抵抗铵胁迫中的具体作用,本研究以一株高耐铵菌株Bacillus aryabhattai NM1-A2为研究对象,通过全基因组和转录组分析挖掘脂质代谢通路和关键基因,利用实时荧光定量PCR对筛选的差异表达基因进行定量分析,并测定丙二醛含量和抗氧化酶活性.结果表明,铵胁迫下脂肪酸合成相关基因(accC、fabG和fabF等)均上调表达,脂肪酸降解相关基因(ACSL、fadB和fadN等)大多下调表达,可能导致脂肪酸积累.醛脱氢酶编码基因ALDH上调表达以减少脂质氧化产物的积累.此外,铵胁迫诱导超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶表达水平和活性的提高,以减少活性氧产生和细胞损伤.因此,活跃的脂质代谢和抗氧化酶系统是B.aryabhattai NM1-A2抵抗铵胁迫的重要途径.

用于植物光系统Ⅱ蛋白酶检测的活性染色方法

采用分离胶中加入 0 2 5 %明胶作为底物的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,对光系统Ⅱ颗粒及其 1mol/LNaCl抽提液中存在的蛋白酶进行了分离、活性检测和部分性质分析 .在PSⅡ颗粒的 1mol/LNaCl抽提液中检测到有6条酶带存在 ,分子质量分别为 34、 37、 5 0、 5 4、 5 8和 6 8ku .初步分析了还原剂、离子强度等对蛋白酶活性的影响 .此方法分离与检测同步 ,具有灵敏度高、方便等优点 .

豇豆胰蛋白酶抑制剂不同组分的制备方法

以豇豆种子为材料,经脱脂、乙酸钠抽提、硫酸铵分级沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物。再经凝胶过滤、离子交换层析和FPLC,分别得到了豇豆蛋白酶抑制剂的不同组分,并进行了SDS-PAGE分析。同时通过明胶活性电泳,证实了各部分均具备专一的胰蛋白酶抑制剂活性。

铜离子对钝顶螺旋藻完整细胞中光系统Ⅱ活性和藻胆体能量传递的影响

Cu2 + 抑制钝顶螺旋藻 ( Spirulina platensis)完整细胞中电子传递活性 ( H2 O→ MV) ,并抑制 PS 的放氧活性。低浓度的 Cu2 +处理 ,使钝顶螺旋藻细胞中藻蓝蛋白荧光发射峰位置蓝移、发射强度改变 ,表明藻胆体中能量传递发生了变化。Cu2 +处理纯化的藻蓝蛋白 ,使其在长波区 ( 61 6— 62 0 nm)吸收减小、荧光发射峰蓝移 ( 64 7nm→ 64 3nm) ;而变藻蓝蛋白不受影响 ,说明 Cu2 + 选择性作用于藻蓝蛋白。

一种用于色素蛋白分离的新凝胶系统

用混合去垢剂增溶低离子强度条件下的温和电泳方法，对菠菜叶绿体类囊体膜和不同ＰＳⅡ制剂进行了色素蛋白复合体组成的分析．并结合ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和吸收光谱对部分色素蛋白复合体进行了鉴定．此法简便、迅速、游离色素少．

具放氧功能的PSⅡ反应中心复合物的分离及其特性

用Triton X-100处理PSⅡ颗粒,接着通过DEAE-Toyopearl 650S一步柱层析制备PSⅡ反应中心复合物具有良好的DCIP光还原活性和放氧功能,SDS-PAGE分析表明含有47,43,33,32,30kD和9kD6种多肽组分;还具有和前人用其它方法制备的放氧PSⅡ反应中心复合物相同的吸收光谱和荧光发射光谱。圆二色谱检测证明,本法所制备的复合物仍保持色素蛋白固有的α-螺旋结构与反应中心叶绿素的二聚体存在形式。EPR谱检测证明,该复合物具有保持完好的电子供体D存在;Mn^(2+)参与了电子传递。

弱光和Tris处理条件下PSⅡ放氧核心复合物的损伤

弱光条件下 (12 0 μmol·m- 2 ·s- 1)用Tris (0 .8mol/L ,pH 6 .5～ 10 .0 )处理具有放氧活性的PSⅡ核心复合物 ,可引起 33kD锰稳定蛋白的释放和锰复合物的破坏 ,并导致核心复合物的结构发生明显的改变 .温和电泳、SDS PAGE和双向电泳分析表明 ,主要是PSⅡ核心复合物的二聚体和单体减少 ,并且复合物部分解体 ;除反应中心D1和D2 蛋白外 ,核心天线CP4 3和CP4 7的量也减少 ,33kD锰稳定蛋白要发生降解 .避光时 。

光合作用研究的一些进展

本文介绍国内外光合作用研究的现状和热点。光合作用已成为生物化学、物理学、化学等基础学科和晶体学、波谱学等技术学科的研究目标，为了解决粮食、能源、资源和环境问题，必须进行光合作用的基础研究和应用研究。最后指出了光合作用的发展方向。

猪血浆纤维连接蛋白的分离纯化和抗血清的制备

纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)是一类结构上类似、免疫原性相同的高分子糖蛋白,具有广泛的生物学活性。根据在体内分布的不同,一般分为血浆型与细胞型两种,血浆型FN主要存在于血浆及体液中,又称可溶性FN。血浆FN含量对多种疾病的诊断和预后有重要意义。临床上采用FN的替代治疗血浆FN缺乏患者具有一定的疗效。为此,我们改进了从猪血浆中纯化FN的方法,制备了单价特异的兔抗猪血浆FN血清,初步探讨了免疫电泳检测FN的可能性。

几种植物PSⅡ颗粒的水裂解活性、DCIP光还原活性与某些性质的比较

选用菠菜、牛皮菜、蕹菜、蚕豆和莴苣五种蔬菜植物叶片制备PSⅡ颗粒,它们都表现出相同的吸收光谱和低温荧光发射光谱特性,且无PSⅠ碎片的污染。它们都具有相同的SignalⅡ_S超精细结构,照光可使信号增强。五种植物PSⅡ颗粒多肽组分电泳分析的差别,主要表现在25kD以下的组分及其相对量上。菠菜、蚕豆和蕹菜PSⅡ顺粒的锰原子相对量为～4Mn/240Ghl,它们都具有较高的水裂解活性与DGIP光还原活性;牛皮菜和莴苣PSⅡ颗粒的锰原子相对量为～3Mn/240Chl,它们的水裂解活性与DGIP光还原活性也较低。

牛皮菜叶中三种不同光化学活性的PS Ⅱ反应中心复合物的纯化和特性

悬浮于3种不同缓冲介质中的牛皮菜(莙荙菜)PSⅡ颗粒经不同浓度的 Triton X—100处理后,用 DEAE—Toyopearl 650S离子交换柱层析分离.可分别得到3种具有不同光化学活性的PSⅡ反应中心复合物:即放氧的PSⅡ反应中心复合物(Ⅰ)、具DCIP光还原活性的PSⅡ反应中心复合物(Ⅱ)和仅发生Pheo^-光累积的 PSⅡ反应中心复合物(Ⅲ)。(Ⅰ)的多肽组分为 47、43、33、32、30、9 kD和4kD;(Ⅱ)的多肽组分为 47、32、30、9 kD和 4kD;(Ⅲ)的多肽组分为 32、30、9 kD和 4 kD。这3种PSⅡ反应中心复合物的吸收光谱和荧光光谱特性;及其主要化学成分的相对含量,与从菠菜等制备出来的相应3种PSⅡ反应中心复合物基本相同。

PSⅡ反应中心复合物制备条件的选择

采用Triton X—100处理、超速离心和离子交换层析等方法,由菠菜PSⅡ颗粒制备得PSⅡ反应中心DI/D2/Cyt b559复合物。整个过程分为PSⅡ颗粒的解体和解体后反应中心的分离两步骤。避光、低温、PH值、解体时间和Triton X—100与PsⅡ颗粒的相对量是影响PSⅡ颗粒解体的因素。Triton X—100浓度和NaCl浓度则影响解体后反应中心复合物的分离。并比较了去垢剂类型、植物种类和叶片生长期对PSⅡ颗粒解体的影响.

水杨酸对水分胁迫黄瓜幼苗叶片生理过程的影响

研究了外源水杨酸 salicylic acid,SA 对水分胁迫下黄瓜幼苗叶片主要生理过程的影响 . 1m mol/L 的 SA处理黄瓜幼苗 2 4 h后 ,叶片中 POD活性剧增 ,SOD活性增加不明显 ,H2 O2 清除酶 CAT和 APX活性受抑制 ,H2 O2 含量上升引起膜脂过氧化产物 MDA含量上升 ,造成轻度氧化胁迫 ;在随后水分胁迫过程中 ,经 SA预处理积累的 H2 O2 诱导 APX和 CAT活性上升并清除产生的 H2 O2 ;SA预处理后 ,叶片中 Rubisco含量及其基因转录水平明显高于对照 ,光合作用受影响较小 .这表明 SA使黄瓜幼苗生理活性有较大改善 。

叶绿素缺乏大麦突变体叶绿体结构功能及生化特性的研究

突变大麦类囊体膜吸收光谱的蓝区峰值明显高于野生型 ;A683 /A652 比值较高 ;CD谱信号较弱 ,这说明其捕光色素蛋白复合物发生了变化 .SDS PAGE结果表明 ,突变大麦的Rubisco的水平与野生型一致 ,但在类囊体膜上分子量为 2 4～

京尼平对丝素蛋白交联的染色作用

京尼平是一种环烯醚萜类化合物,能够与氨基酸反应生成蓝色素.制备的无色丝素蛋白溶液与京尼平溶液混合后,溶液显蓝紫色.利用紫外可见光光谱和荧光光谱,分析了整个反应过程,考察了温度、酸碱度等影响因素,并对颜色产物对光照的稳定性进行了分析,初步探讨了京尼平对丝素蛋白交联染色作用的机制.结果显示:生成的颜色产物在590nm处具有特征光吸收,高温和碱性条件有利于反应的进行;交联产物的颜色与反应时pH相关,酸性条件下偏蓝色,碱性条件下偏紫色;生成的颜色产物具有较高的稳定性,于自然光强下放置一个月或5000lx光强照射6h,590nm吸收值减小不显著.丝素蛋白的内源荧光显著降低,表明反应导致丝素蛋白构象的剧烈变化.京尼平可能与丝素蛋白中某些氨基酸侧链基团反应形成稳定的颜色产物.研究结果对环烯醚萜类化合物用于蚕丝染色具有一定的指导意义.

黄化油菜突变体Cr3529子叶类囊体膜光谱性质研究

以发育10d的黄化油菜突变体为材料,分析了突变体油菜子叶类囊体膜的色素含量、室温吸收光谱、叶绿素荧光发射和激发光谱以及蛋白内源荧光光谱的变化.数据显示:与野生型相比,突变体油菜子叶类囊体膜的光合色素Chla和Chlb含量均减少,但Chla/b比值升高;突变体油菜子叶类囊体膜叶绿素捕光能力和受激发能力均下降,且较依赖于Chla捕光并将光能激发传递给PS 反应中心;突变体油菜子叶类囊体膜的蛋白内源荧光也明显异于野生型,进一步表明突变体油菜子叶类囊体膜蛋白组成发生了改变.