雌激素缺乏加重痴呆小鼠脑内炎症反应的机制初探

目的研究雌激素缺乏不同时间段APP/PS1双转基因小鼠脑组织细胞内线粒体结构、线粒体雌激素受体(mitochondrial estrogen receptorβ,mt-ERβ)、胰岛素生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)、星胶细胞(astrocyte, AS)以及神经炎性因子的变化,以明确雌激素缺乏促进阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)神经炎症发生的可能分子机制。方法对雌性3月龄APP/PS1双转基因AD小鼠行双侧卵巢切除(AD-OVX),以假手术AD小鼠(AD-Sham)及同月龄正常野生型小鼠(WT)为对照,于术后1周(模拟绝经早期)和3月(模拟绝经中晚期),采用免疫荧光、透射电镜、RT-PCR和Western blot,分别检测卵巢切除(ovariectomy,OVX)后不同时间段APP/PS1小鼠脑内胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞、炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)以及脑组织细胞内线粒体超微结构、mt-ERβ和IGF-1R的变化。结果与正常野生型小鼠相比,无论OVX后1周还是3个月,AD-OVX组和ADSham组小鼠脑内GFAP阳性细胞数均显著增加;相应地,AD小鼠脑内炎症因子IL-6、TNF-α的mRNA水平也较正常小鼠明显增高(P<0.001);超微结构显示,与正常小鼠相比,AD脑组织细胞内线粒体肿胀明显,mt-ERβ和IGF-1R蛋白表达呈下调趋势(P<0.001)。在APP/PS1双转基因AD小鼠中,OVX后1周,AD-OVX组小鼠脑内GFAP阳性细胞数量较AD-Sham组显著减少(P<0.001),且脑内炎症因子IL-6、TNF-α的mRNA水平显著降低(P<0.001),但线粒体结构、mt-ERβ和IGF-1R蛋白表达无明显差异(P>0.05);而OVX后3个月,AD-OVX组脑内GFAP阳性细胞数量较AD-Sham组显著增多(P<0.001),且脑内炎症因子IL-6、TNF-α明显升高(P<0.001),线粒体肿胀明显,mt-ERβ蛋白表达有上调趋势(P<0.05),但仍低于正常小鼠;IGF-1R蛋白表达呈下调趋势(P<0.05)。结论痴呆小鼠脑内存在星胶细胞活化及炎症反应增强,雌激素缺乏早期可反应性的减少星胶细胞的增生及炎症反应,但随着雌激素缺乏时间的延长,痴呆小鼠脑内星胶细胞的活化及神经炎症反应进行性加重,该作用可能通过mt-ERβ介导的IGF-1R信号通路相关。

甘草素通过抗炎发挥对阿尔茨海默病的保护作用

目的研究植物雌激素甘草素(liquiritigenin,LG)是否通过抗炎对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发挥保护作用。方法 LG是从中药甘草中提取的一种黄酮类化合物单体,具有多靶向作用,如抗炎、抗氧化等。本实验用N2A细胞(神经瘤母细胞)作为正常对照细胞和稳定表达瑞士突变型淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的N2A细胞(N2AAPP)作为AD细胞模型,结合LG处理,通过MTT、ELISA、Western blot、RT-PCR检测LG对AD模型细胞的细胞活性、雌激素受体(ERβ)、炎症相关蛋白NLRP3和caspase-1以及炎症因子IL-1β、TNF-α的影响。结果与正常的N2A细胞相比,N2A-APP细胞中APP、BACE1蛋白表达以及Aβ水平显著增加,说明N2A-APP作为AD模型细胞的有效性。MTT结果显示LG不影响N2A的细胞活力(P>0.05)。Westers blot结果显示,与正常N2A细胞相比,N2A-APP细胞内ERβ的表达显著下调,而LG处理可显著逆转ERβ的表达。Westers blot结果还发现,与正常细胞相比,N2A-APP细胞内炎症相关蛋白NLRP3和p-caspase-1蛋白表达显著增强,而LG处理可有效逆转NLRP3和p-caspase-1的表达上调(P<0.01)。相应地,RT-PCR结果发现,LG可显著降低N2A-APP细胞内炎症因子IL-1β、TNF-α的水平。结论甘草素可有效抑制AD模型细胞的炎症反应,其机制可能与其上调ERβ蛋白的表达有关。

左旋棉酚通过下调X连锁凋亡抑制蛋白增强表柔比星抑制肝细胞癌的体外作用

目的探讨左旋棉酚增强表柔比星杀伤肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞的作用及可能机制。方法将HCC细胞(Hep3B及HuH7)分为溶剂对照组、左旋棉酚处理组、表柔比星处理组、联合用药组、对照siRNA+表柔比星组、沉默X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)+表柔比星处理组、对照质粒+联合用药组、过表达XIAP+联合用药组,采用CCK-8方法检测各组细胞存活情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测剪切型聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶[cleaved poly(ADP-ribose)polymerase,Cle-PARP]水平、XIAP水平及真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)磷酸化水平。结果与溶剂对照相比,低浓度的左旋棉酚(5μmol/L)单独处理对HCC细胞存活无明显抑制作用(P>0.05),而将左旋棉酚与表柔比星联合使用后可显著增强表柔比星对HCC细胞的杀伤(P<0.05)、促进HCC细胞的凋亡及对剪切型PARP的诱导,同时还能抑制表柔比星诱导的XIAP上调及eIF4E磷酸化。此外,表柔比星抑制HCC细胞存活及升高剪切型PARP的能力能被沉默XIAP所增强,而被过表达XIAP所抑制。结论左旋棉酚可增强表柔比星抑制HCC细胞存活促进细胞凋亡的能力,其机制可能与抑制XIAP上调和eIF4E磷酸化有关,提示左旋棉酚可作为表柔比星治疗HCC的潜在增敏剂。

雌激素缺乏对痴呆小鼠学习记忆及海马区细胞增殖和成熟的影响

该文旨在研究雌激素缺乏不同时间段对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及海马区细胞增殖和成熟的影响及探究潜在的机制。将3月龄APP/PS1双转基因AD雌性小鼠行双侧卵巢切除(AD-OVX),以假手术AD小鼠(AD-Sham)及同月龄正常野生型小鼠(WT)作为对照,于术后1周(模拟绝经早期)和3月(模拟绝经中晚期), Morris水迷宫行为测试结果显示,在APP/PS1双转基因AD小鼠中, OVX后1周, AD-OVX组与AD-Sham组比较,其逃避潜伏期、搜索路径以及穿越平台的次数无明显差异(P>0.05);而OVX后3月, AD-OVX组小鼠找到平台的时间和搜索路径显著延长(P<0.05),穿越平台的次数也相应减少(P<0.05);子宫重量结果、EDU细胞增殖状况、老年斑、脑内NeuN蛋白和芳香酶的变化水平分别显示,在APP/PS1双转基因AD小鼠中, OVX后1周, AD-OVX组与ADSham组比较,循环雌激素水平无明显变化;小鼠脑内未见老年斑;小鼠海马区新生阳性细胞数量和NeuN的表达反应性增多(P<0.05);此时小鼠脑内芳香酶表达也呈反应性升高(P<0.05)。而OVX后3月, AD-OVX组小鼠循环雌激素水平明显降低(P<0.05);脑内老年斑显著增加(P<0.05);小鼠海马区新生阳性细胞数量和NeuN的表达减少(P<0.05);此时小鼠脑内芳香酶水平也显著降低(P<0.05)。以上结果说明,雌激素缺乏早期可反应性地增加痴呆小鼠海马区细胞的增殖和成熟,对小鼠学习记忆无影响;但随着雌激素缺乏时间的延长,痴呆小鼠出现学习记忆的损害及海马区细胞增殖和成熟减少;该作用可能与脑内芳香酶水平的变化密切相关。

丙戊酸钠联合雌二醇对去卵巢APP/PS1双转基因小鼠精神行为及神经元的影响

该文旨在研究丙戊酸钠(valproic acid, VPA)和雌二醇(17β-Estradiol, E2)联合用药对去卵巢APP/PS1双转基因小鼠精神行为和脑内神经元的影响及可能机制。将3.5月龄雌性APP/PS1双转基因小鼠进行双侧卵巢切除(ovariectomy, OVX), 1个月后随机将小鼠分为4组,然后单独或联合应用VPA和E2处理1个月(生理盐水组为对照)。高架十字迷宫实验结果显示,与对照组相比, VPA和E2单独用药组小鼠进入开放臂的次数和在开臂停滞时间均有上升,但无统计学意义(P>0.05),而VPA+E2联合用药组小鼠较对照组有显著上升(P<0.05)。旷场实验结果显示,与对照组相比,各药物处理组小鼠在旷场中央区活动的路程和时间显著上调(P<0.05),这可显著改善小鼠的焦虑情绪和自主性活动变化。与对照组相比, E2组和VPA+E2组NeuN的表达量升高具有统计学意义(P<0.05),VPA组无明显改变(P>0.05);高尔基染色结果显示, VPA+E2组树突棘密度升高较对照组和E2组均具有统计学意义(P<0.05),是VPA组的1.39倍,但无显著统计学差异(P>0.05)。Western blot结果显示, E2组和VPA+E2组与对照组相比ERα的表达量升高具有统计学差异(P<0.05),其中VPA+E2组升高更为显著, VPA组与对照组相比没有明显差异(P>0.05);VPA+E2组小鼠脑内Wnt3a表达量与对照组、VPA组和E2组相比其升高均具有统计学意义(P<0.05);E2组和VPA+E2组β-Catenin含量相较对照组升高具有显著统计学意义(P<0.05)。上述结果说明,丙戊酸钠联合雌二醇治疗可缓解小鼠的焦虑情绪并延缓小鼠脑内神经元的变性,这种改善作用可能与ERα-Wnt/β-Catenin信号通路激活相关。