胆固醇7α-羟化酶在毕赤酵母中的异源表达

胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)是胆固醇分解为胆汁酸的限速酶,其催化胆固醇为7α-羟基胆固醇,7α-羟基胆固醇是重要的甾体药物及中间体。以人源CYP7A1作为研究对象,首先构建了重组毕赤酵母/pPIC3.5K-CYP7A1;然后对7α-羟化酶进行分子改造,之后将酶与不同来源NADPH细胞色素氧化还原酶(CPR)适配,以提高目的产物7α-羟基胆固醇的产量。其中突变体G485A将7α-羟基胆固醇的产量提高了8.70%;5种不同来源的CPR与CYP7A1共表达毕赤酵母菌株均可提高7α-羟基胆固醇的产量,并且罗汉果(Siraitia grosvenorii)来源的CPR(SgCPR)与CYP7A1适配性最好,使7α-羟基胆固醇的产率提高了82.26%;在以上研究的基础上,构建突变体G485A与SgCPR共表达毕赤酵母菌株,最终7α-羟基胆固醇的产量提高了133.79%,其产量为0.25 mg/L。实验在毕赤酵母中成功异源表达人源胆固醇7α-羟化酶,并通过分子改造及与不同来源CPR适配的方法提高了7α-羟基胆固醇的产量。

从阳光里归来——读《教育的情调》有感

偶然获得马克斯·范梅南的《教育的情调》,那是一本薄薄的册子,却有着延绵无尽·不忍释手的魅力。这本书基于教育现象学,将教育理论用一个个简短生动的教育现象故事来呈现,让我们细细品味着“教育的敏感性和机智”。“教育现象学是一门探讨成年人与孩子如何相处的学问”,作者用朴实而温暖的笔触帶领我们去感受教育的温度,感受教育的爱与细节。

细胞色素P450还原酶与CYP17的共表达及其功能分析

17α-羟基黄体酮(17α-OH-PROG)是甾体激素类药物的关键中间体,其生物合成主要由细胞色素单加氧酶(CYP17)催化生成。在此过程中,细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase,CPR)作为细胞色素P450酶电子传递链的重要组成部分,直接影响CYP17的催化效率。为研究不同来源CPR与17α-羟化酶的适配性,首先以人源17α-羟化酶作为研究对象,构建了表达质粒pPIC3.5k-hCYP17,获得了重组毕赤酵母菌株。其次筛选获得3种不同来源CPR,构建了表达质粒pPICZX-CPR,获得17α-羟化酶与CPR共表达菌株,并在毕赤酵母中进行转化实验,对转化产物进行薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析。结果显示,重组菌株具有17α-羟化酶活性,能够催化黄体酮生成目标产物17α-OH-PROG以及副产物16α-羟基黄体酮(16α-OH-PROG)。不同来源的CPR与17α-羟化酶共表达与仅表达17α-羟化酶的产率相比均有所提高,其中hCPR-CYP17共表达菌株表现出最高的转化水平,17α-OH-PROG产率提高42%。上述结果表明:17α-羟化酶基因与CPR共表达能够提高其黄体酮17α-羟基化水平。为甾体黄体酮17α-羟基化的生物催化研究提供思路,对甾体药物的工业生产具有重要意义。