谷氨酸棒状杆菌启动子在枯草芽孢杆菌中的克隆及其序列分析

利用枯草芽孢杆菌启动子探针质粒pPL 603为载体,从谷氨酸棒状杆菌1014-6染色体DNA上克隆到一个有较强启动功能的DNA片段。生物素标记的DNA-DNA分子杂交实验证明该片段确实来自谷氨酸棒状杆菌1014-6染色体DNA。在绘制该片段限制酶酶切图谱的基础上,经另一个启动子探针质粒pPL 703的亚克隆,将其启动子功能区定位在BamHI酶切片段中。对后者进行了核苷酸序列分析,发现它具有棒状杆菌类启动子的-35区和-10区序列。

谷氨酸棒状杆菌隐蔽性质粒pXZ10141的限制性酶切图谱

从谷氨酸棒状杆菌中分离到一个隐蔽性质粒pXZ10141,通过琼脂糖凝胶电泳测定其分子量为3.9Kb。经14种限制性内切酶的酶切,发现在质粒pXZ10141上BamH Ⅰ、BglⅡ、Cla Ⅰ、EcoRⅠ、Sal Ⅰ、Xba Ⅰ各有一个切点,Hind Ⅲ和Sma Ⅰ各有二个切点,Ava Ⅰ和Pvu Ⅱ各有三个切点,根据各酶切位点问的距离绘制了该质粒的限制性酶切图谱。

质粒pXZ10145DNA转化棒杆菌原生质体的研究

用SDS处理谷氨酸棒杆菌1014(Corynebactertum glutamlcum 1014),获得消除质粒的衍生株1014-6。通过质粒pXZ10145(Cm^r)转化1014-6菌株的原生质体,研究了转化最适条件。0.6u/ml青霉素处理对数期菌体可明显提高转化效率。转化促进剂PEG以分子量6000、浓度30%为最佳。转化在37℃水浴进行3min效果最好。转化效率最高可达2×10~4转化子/μg DNA。质粒pXZ10145也已成功地转入钝齿棒杆菌B9(C.crenatum B9)。并在新宿主中基本保持稳定。