miR-155表达变化对TGF-β1损伤足细胞蛋白podocin、CD2AP、synaptopodin的影响

目的:研究miR-155 mimics/inihibitor转染足细胞后微小RNA-155(miR-155)的表达变化及其对TGF-β1损伤足细胞的影响。方法:体外培养小鼠足细胞,细胞免疫荧光染色鉴定足细胞分化成熟;用TGF-β1处理足细胞构建足细胞损伤模型,RT-PCR和Western blot分别检测miR-155和CD2AP的表达;免疫荧光显微镜观察转染成功指示剂Cy3,RT-PCR检测miR-155 mimics/miR-155 inihibitor转染(0 h、24 h、48 h、72 h)后miR-155的表达;选取转染时间48~72 h,RT-PCR检测Normal、TGF-β1、TGF-β1+mimics、TGF-β1+mimics NC、TGF-β1+inhibitor、TGF-β1+inhibitor NC组细胞miR-155及podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA表达,Western blot检测3种蛋白的表达,免疫荧光观察各组CD2AP的荧光分布和表达。结果:CD2AP呈足细胞分化成熟的特征分布;TGF-β1干预后miR-155表达上升,CD2AP蛋白表达下降(P<0.05);miR-155 mimics或miR-155 inihibitor转染48 h、72 h后,miR-155表达明显增加或减少(P<0.05);miR-155 mimics可上调TGF-β1诱导的miR-155表达(P<0.05),且可促进TGF-β1诱导的足细胞podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),而转染miR-155 inihibitor对足细胞蛋白的作用与miR-155 mimics相反。免疫荧光结果显示CD2AP蛋白的表达与Western blot、RT-PCR结果一致。结论:miR-155可靶向足细胞蛋白podocin、CD2AP和synaptopodin的表达,miR-155过表达可促进足细胞损伤,miR-155表达下调则可改善足细胞的损伤,因此,miR-155可作为足细胞损伤新的药物靶标。

miR-155调控线粒体自噬对足细胞损伤的机制研究

目的探讨miR-155对足细胞凋亡的影响,并深入研究其机制。方法MPC5细胞(经H 2O 2预处理)分为miR-155抑表达组、miR-155过表达组、对照(空质粒)组、空白组。分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot法检测线粒体自噬通路相关因子FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、p62及凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA或蛋白表达;JC-1探针检测线粒体膜电位;ELISA检测细胞内ROS含量;CCK8、流式细胞术检测细胞活性及凋亡。结果相较于对照组,miR-155抑表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1和Bcl-2表达明显升高,细胞活性和线粒体膜电位明显增加(P<0.05),p62、Caspase-3和Bax的表达明显降低,ROS含量和细胞凋亡率显著下降(P<0.05);miR-155过表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、Bcl-2的表达明显下调,细胞活性和线粒体膜电位明显降低(P<0.05),p62、Caspase-3和Bax表达,细胞内ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。对照组与空白组的结果比较无统计学意义(P>0.05)。结论上调miR-155表达,可促进足细胞凋亡,其机制可能与miR-155靶向FOXO1,抑制线粒体自噬,促进足细胞氧化应激损伤有关。

类风湿关节炎的治疗研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种发病机制尚未明确的自身免疫性疾病,可随着病情的发展对患者的眼睛、皮肤等形成影响,进而严重影响到患者的身心健康。目前, RA的治疗以西药为主,但近年来中医疗法的应用也日益增多,中西医在RA治疗中的应用呈现出多样化的研究趋势。本文以RA、西医、中医、中西医等为主要关键词,在知网、万方等平台搜索了相关文献,并对19篇文献从西医、中医、中西医联合等方面进行研究综述,旨在更好地为相关领域研究提供参考资料。

特发性膜性肾病相关诊断生物标志物的研究进展

特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)是目前导致成人肾病综合征的主要病因,发病率逐年上升。IMN的发病机制复杂,病程迁徙,反复发作,可发展为终末期肾脏病,早期发现和干预治疗是改善患者预后的关键措施。近年来国内外学者对IMN相关诊断生物标志物的研究取得了重大进展,这对疾病的早期诊断有重要意义。

不同浓度miR-155mimics和miR-155 inihibitor在足细胞中的转染效果

目的探讨瞬时转染miR-155mimics和miR-155 inihibitor化学合成物在足细胞中表达变化及其稳定情况。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,用脂质体法将miR-155mimics/NC、miR-155 inihibitor/NC、Cy3 miR-155 mimics/inhibitor NC转染足细胞,构建足细胞内miR-155高表达模型、低表达模型、荧光基团。然后用免疫荧光显微镜观察不同剂量LipofectamineTM 2000转染不同浓度Cy3 miR-155 NC后的荧光转染效果。用实时荧光定量PCR技术检测足细胞中miR-155mimics浓度梯度(50、80、100 nmol/mL)、miR-155 inihibitor浓度梯度(80、100、150 nmol/mL)的miRNA-155表达。结果达到一定剂量的LipofectamineTM 2000足以饱和不同浓度的miRNA,并将不同浓度Cy3 miR-155 NC成功转入足细胞内,且转染效率达80%以上。qRT-PCR结果显示转染miR-155mimics、miR-155 inihibitor 24 h后,miR-155在足细胞中的表达明显改变,与阴性对照组(NC)比较差异有统计学意义,表明转染成功。转染80 nmol/mL浓度的miR-155mimics,miR-155在足细胞中的表达明显上调(P<0.001),与其他浓度对比表达量升高,差异有统计学意义。转染150 nmol/mL浓度的miR-155 inihibitor,miR-155在足细胞中的表达明显下调(P<0.001),与其他浓度对比表达量降低,差异有统计学意义。结论 LipofectamineTM 2000达到适当剂量时将各工作浓度的miRNA-155转入足细胞内的转染效果高。80 nmol/mL的miR-155mimics和150 nmol/mL的miR-155 inhibitor可能较适合用于实验研究。

U0126对TGF-β1诱导足细胞炎症因子分泌和miR-155表达的影响

目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(erk)1/2通路抑制剂U0126对转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导足细胞炎症因子分泌和微RNA(microRNA,miR)-155表达的影响。方法 体外培养小鼠足细胞,随机分为正常对照组、TGF-β1组和TGF-β1+U0126组,使用Westernblot法检测erk1/2磷酸化水平,ELISA法检测足细胞上清TNF-α及IL-6蛋白表达水平,RT-qPCR法检测足细胞miR-155表达水平。结果 与正常对照组相比,TGF-β1诱导足细胞后,erk1/2磷酸化水平明显上升,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌增多,足细胞miR-155表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β1组相比,TGF-β1+U0126组erk1/2磷酸化水平被抑制,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌减少,足细胞miR-155表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 erk1/2通路抑制剂U0126可抑制足细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌,下调足细胞miR-155的表达。

狼疮性肾炎相关基因的共表达网络构建与分析

目的基于基因表达综合数据库(GEO)挖掘与狼疮性肾炎(LN)相关的潜在基因。方法从GEO中搜集LN相关的样本,获得GSE32591、GSE81622、GSE99967共3个数据集。利用GEO2R平台对这3个数据集进行分析,筛选出共同差异基因,并利用在线分析工具DAVID完成GO富集分析和KEGG通路富集分析。将筛选出的共同差异基因导入STRING在线数据库,构建共同差异基因的蛋白-蛋白相互作用网络,利用Cytoscape软件进行模块分析并识别枢纽基因。结果筛选得到110个共同差异基因。GO富集分析发现这些基因主要参与了防御反应、免疫反应、对病毒的反应、对细菌的反应、对伤害的反应、炎症反应等生物学过程。KEGG通路富集分析主要包括了系统性红斑狼疮、抗原处理和呈递、补体与凝血级联、RIG-I样受体等信号通路。从最显著基因模块中识别出10个枢纽基因:RSAD2、OAS1、MX1、ISG15、DDX58、IFIH1、IFI44、IFI44L、IFIT1、IFIT3。结论生物信息学分析显示RSAD2、OAS1、MX1、ISG15、DDX58、IFIH1、IFI44、IFI44L、IFIT1、IFIT3可能是与LN相关的枢纽基因,为LN的机制研究提供了一种全新的思路。