LncRNA-HOTAIR调控H3K27me3影响巨噬细胞迁移的机制

目的观察HOX转录反义RNA(LncRNA-HOTAIR)和组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)暴露的巨噬细胞模型中的表达,并在基因表观遗传学水平上探讨HOTAIR调控H3K27me3对巨噬细胞迁移的具体机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,以oxLDL暴露巨噬细胞制备模型。将细胞分为对照组(A组)、oxLDL组(B组)、巨噬细胞+组蛋白去甲基化酶抑制剂GSKJ4+oxLDL组(C组)、巨噬细胞+组蛋白甲基化酶抑制剂GSK126+oxLDL组(D组)、巨噬细胞+oe-HOTAIR+oxLDL组(E组)、巨噬细胞+pcDNA+oxLDL组(F组)、巨噬细胞+oe-HOTAIR+GSKJ4+oxLDL组(G组)、巨噬细胞+pcDNA+GSKJ4+oxLDL组(H组)、巨噬细胞+oe-HOTAIR+GSK126+oxLDL组(Ⅰ组)、巨噬细胞+pcDNA+GSK126+oxLDL组(J组)。采用Western blotting法分别检测各组细胞中H3K27me3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达,采用qPCR法检测各组细胞中HOTAIR表达,采用Transwell法检测各组细胞中巨噬细胞迁移能力。结果(1)与A组相比,B组TNF-α的表达和巨噬细胞迁移增加,HOTAIR和H3K27me3表达降低,且两者呈正相关(P<0.01)。(2)与B组相比,C组H3K27me3表达增加,TNF-α表达降低,巨噬细胞迁移减少(P<0.01),HOTAIR表达无明显变化(P>0.05);与B组相比,D组H3K27me3表达降低,TNF-α表达和巨噬细胞迁移增加(P<0.01),HOTAIR表达无明显变化(P>0.05)。(3)与B组相比,E组HOTAIR、H3K27me3表达增加,TNF-α表达降低,巨噬细胞迁移减少(P<0.01);与B组相比,F组HOTAIR、H3K27me3、TNF-α的表达和巨噬细胞迁移均无明显变化(P>0.05)。(4)与E组相比,G组HOTAIR表达无明显变化(P>0.05),H3K27me3表达增加,TNF-α表达降低,巨噬细胞迁移减少(P<0.01);与G组相比,H组HOTAIR和H3K27me3表达降低,TNF-α表达和巨噬细胞迁移增加(P<0.01);与E组相比,Ⅰ组HOTAIR的表达无明显变化(P>0.05),H3K27me3表达降低,TNF-α的表达和巨噬细胞迁移增加(P<0.01);与Ⅰ组相比,J组HOTAIR和H3K27me3表达降低,TNF-α表达和巨噬细胞迁移增加(P<0.01)。结论在oxLDL暴露巨噬细胞迁移模型中,H3K27me3表达降低,其经基因表观遗传学影响TNF-α的表达。LncRNA-HOTAIR是与H3K27me3的表达呈正相关的上游调控因子,HOTAIR降低TNF-α表达及巨噬细胞迁移过程可经H3K27me3途径。