βE2上调Nrf2通路抵抗光诱导的大鼠视网膜功能损伤

目的探讨17β-雌二醇(17β-estradiol,βE2)是否可以激活NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2, Nrf2)通路抵抗光损诱导的视网膜功能下调。方法雌性SD大鼠去势2周,分为对照组(Control)、光损组(LD)、生理盐水组、生理盐水光损组(Saline-LD)、βE2组及βE2光损组(βE2-LD)。光损伤干预为,将大鼠暗适应18 h后暴露于8 000-lux强度的荧光下12 h,暗恢复1 d,各组进行相应处理后,行视网膜电图(electroretinogram, ERG)、免疫荧光、Real-time PCR及免疫组化检测。结果 ERG结果显示,LD组ERG均较Control组降低(P<0.05)。光损伤后活性氧(ROS)升高,抗氧化基因Sod1、Sod2、Cat、Glrx1、Glrx2、Txn1、Txn2 mRNA降低(P<0.05)。βE2-LD组较Saline-LD的ROS降低,Nrf2蛋白及抗氧化基因水平升高,ERG得到一定程度的恢复(P<0.05)。结论βE2可恢复大鼠视网膜的功能,其机制可能与上调Nrf2及抗氧化基因有关。

H_2O_2诱导SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度的变化

目的观察H2O2诱导原代培养SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内Ca2＋浓度（[Ca2＋]i）的变化及其来源。方法取1-3d内新生SD大鼠视网膜进行原代细胞培养,以100μmol/L H2O2作用0、2、4、8、12、24h,采用MTT法进行细胞活力检测,应用Hoechst 33342染色法进行细胞凋亡检测,以Fluo-3AM为细胞内Ca2＋探针并利用荧光激活细胞分类技术（FACS）进行[Ca2＋]i检测,确定H2O2诱导细胞损伤及凋亡过程中[Ca2＋]i的变化;应用细胞外Ca2＋螯合剂EGTA初步检测H2O2诱导的[Ca2＋]i变化是否源于细胞外Ca2＋内流。结果 100μmol/L H2O2可诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡,且凋亡数目呈时间依赖性递增;100μmol/L H2O2作用2-24h均可显著降低细胞活力,而[Ca2＋]i的升高出现在H2O2作用2h且维持至12h,然后逐渐下降,至24h恢复至正常水平;0.5-5mmol/L EGTA可显著削弱由100μmol/L H2O2作用2h导致的[Ca2＋]i增加。结论在H2O2诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡过程中,[Ca2＋]i的升高发生在凋亡的早期阶段,而非细胞凋亡全过程中;H2O2的损伤作用所导致的[Ca2＋]i升高部分来源于细胞外Ca2＋的内流。