沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨赖氨酸乙酰基转移酶(Kat5)对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法:RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组(si-Kat5组)。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白水平。结果:甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞(P<0.05)。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞克隆形成率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05),P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:甲状腺乳头状癌细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。

BTg-3对甲状腺滤泡癌细胞增殖、侵袭和迁移及WNT/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨B细胞转位基因3(BTg-3)在甲状腺滤泡癌组织和细胞中的表达及其对甲状腺滤泡癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,阐明BTg-3在甲状腺滤泡癌发生发展中的可能作用机制。方法:选择经病理证实的甲状腺滤泡癌组织和甲状腺滤泡腺瘤组织标本各80例,免疫组织化学法检测甲状腺滤泡癌组织和甲状腺滤泡腺瘤组织中BTg-3表达情况,Western blotting法检测甲状腺滤泡症CGTHW-1和甲状腺滤泡上皮Nthy-ori细胞中BTg-3蛋白表达水平。将甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞随机分为空白对照组(不转染载体)、阴性对照组(转染阴性对照载体)和BTg-3过表达组(转染BTg-3过表达载体)。CCK-8法检测各组甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞增殖活性,平板克隆实验检测各组甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞克隆形成率,Transwell法检测各组甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞侵袭和迁移细胞数,Western blotting法检测各组甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞中Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白(Vimentin)、上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)、WNT1、β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成激酶3β(GSK3β)和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)蛋白表达水平。结果:甲状腺滤泡癌组织中BTg-3阳性表达率低于甲状腺滤泡腺瘤组织(χ^2=62.864,P<0.01)。甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞中BTg-3蛋白表达水平低于甲状腺滤泡上皮Nthy-ori细胞(t=34.484,P<0.01)。与空白对照组和阴性对照组比较,BTg-3过表达组甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞中BTg-3蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖活性、克隆形成率、侵袭细胞数和迁移细胞数降低(P<0.05),甲状腺滤泡癌CGTHW-1细胞中Ki67、PCNA、Vimentin、WNT1、β-catenin和p-GSK3β蛋白表达水平降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:甲状腺滤泡癌组织和细胞中BTg-3表达水平降低,过表达BTg-3可抑制甲状腺滤泡癌细胞增殖、侵袭和迁移,抑制WNT/β-catenin信号通路激活。

BTG3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其对细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探讨B细胞转位基因3(BTG3)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法:选择60例甲状腺乳头状癌患者的新鲜肿瘤标本及其对应的癌旁组织,采用免疫组化法测定组织中BTG3蛋白表达水平。将甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为BTG3过表达组、阴性对照组和空白对照组,分别于0、24、72 h加入10μl CCK-8试剂孵育2 h,测定TPC-1细胞增殖能力(OD值),采用微孔滤膜实验测定TPC-1细胞侵袭和迁移能力,采用蛋白质印迹法测定各组TPC-1细胞的波形蛋白、N-钙粘蛋白和E-钙粘蛋白水平。结果:甲状腺乳头状癌组织中BTG3蛋白阳性率低于癌旁组织(P<0.05)。TPC-1细胞0、24、72 h的OD值BTG3过表达组明显低于阴性对照组和空白对照组相应时间点的OD值(均P<0.001)。TPC-1细胞BTG3过表达组细胞侵袭迁移能力和E-钙粘蛋白水平高于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05);波形蛋白、N-钙粘蛋白水平低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05)。结论:BTG3在甲状腺乳头状癌组织中低表达;甲状腺乳头状癌细胞过表达BTG3后,其增殖、侵袭和迁移能力下降,波形蛋白、N-钙粘蛋白和E-钙粘蛋白水平发生变化。