碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1复合骨髓间充质干细胞对大鼠退变椎间盘的修复作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)以温敏性壳聚糖(TCH)为载体对大鼠退变椎间盘的修复作用。方法针刺法建立SD大鼠椎间盘退变模型,4周后核磁共振下观察退变效果。体外培养BMSCs,并用含增强型绿色荧光蛋白的腺病毒转染使带有增强型绿色荧光蛋白基因,作荧光标记。将椎间盘退变的SD大鼠分成4组,实验组A组使用b FGF+TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶移植入退变的椎间盘中,B组和C组分别使用BMSCs+TCH凝胶和b FGF+TGF-β1+TCH凝胶,对照组D组使用PBS缓冲液。继续培养4周后核磁共振观察各组椎间盘的修复情况。HE、Masson染色、组织病理学观察各组椎间盘结构。逆转录PCR,Western blot检测各组髓核蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Sox-9、Ⅰ型胶原的表达。结果移植注射的BMSCs能在椎间盘中生长,呈类髓核分化。核磁共振结果显示:A组髓核信号明显高于其他3组,B组高于C组,D组髓核信号最低,硬脊膜受压,脊髓呈串珠状改变,各组间Pfirrmann分级结果差异有统计学意义(P<0.05)。HE、Masson染色显示:A组椎间盘结构完整,髓核细胞数量优于其他3组,髓核和纤维环界限清楚,B组髓核数量多于C组,B组纤维环未见断裂,而C组可见断裂的纤维环,D组髓核细胞被杂乱的纤维组织取代。逆转录PCR、Western blot显示:A组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Sox-9的表达最高,B组优于C组,D组表达最低(P<0.05)。而Ⅰ型胶原的表达在4组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植的BMSCs在退变椎间盘中能够存活,呈类髓核分化。b FGF+TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶复合体对退变的椎间盘具有明显修复作用。BMSCs+TCH凝胶治疗退变椎间盘的效果优于b FGF+TGF-β1+TCH凝胶但低于b FGF+TGF-β1+BMSCs+TCH凝胶复合体。

纤维蛋白胶支架搭载外胚间充质源雪旺细胞移植修复大鼠脊髓损伤

目的:观察外胚层间充质源的雪旺细胞在损伤脊髓中的迁移情况、组织相容性,评价纤维蛋白支架搭载该细胞移植治疗急性脊髓损伤的疗效。方法:(1)成年大鼠鼻中隔活体取出部分鼻黏膜制成细胞悬液,自然纯化并扩增鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs),用雪旺细胞诱导培养基将其诱导为雪旺细胞并用红色荧光进行标记。(2)建立脊髓针刺损伤模型并移植标记细胞,术后10 d,观察雪旺细胞在组织内的存活和迁移情况,并评价其组织相容性。(3)健康SD大鼠60只,制作脊髓横断模型,随机分为3组:单纯脊髓横断(SCI)组、纤维蛋白胶(Fibrin)移植组和细胞-支架(F-C)移植组,术后每周进行运动行为学评分。术后12周取出脊髓组织,采用免疫组织化学染色和Western Blot方法检测脊髓横断部位神经纤维重建和髓鞘再生情况,以及神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化。结果:(1)EMSCs来源的雪旺细胞体外分化扩增良好,免疫荧光结果显示其高表达S100、GFAP、P75、CNpase等表面标志蛋白。(2)移植进入体内的雪旺细胞存活良好并发生一定距离的迁移,且与脊髓内神经纤维有良好的相容性。(3)术后2周开始直至12周,F-C组较SCI组大鼠后肢运动功能有较明显恢复,差异有显著意义(P<0.05);Fibrin组亦有一定程度的恢复,但程度较轻;SCI组几乎没有恢复迹象。免疫组化染色结果显示:SCI组断端未见神经轴索通过,Fibrin组可见少量神经纤维通过,F-C组可见多量神经网络状结构。Western Blot检测结果显示:F-C组神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)相对含量均高于Fibrin组和SCI组(P<0.05)。结论:外胚层间充质源雪旺细胞移植对于脊髓损伤后的组织学和功能学恢复有明显促进作用,纤维蛋白做为移植修复脊髓损伤的生物支架具有良好的应用前景。

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后钙敏感受体的表达变化及其抑制剂NPS2390的作用

目的:探讨大鼠脊髓缺血再灌注损伤后钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)的表达变化以及CaSR抑制剂NPS2390对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响。方法:将48只SD大鼠随机分成假手术组(n=16),模型组(n=16)和NPS2390组(n=16)。假手术组仅开腹,不夹闭腹主动脉;模型组阻断腹主动脉30 min后再灌注;NPS2390组在建模前2 d尾静脉注射CaSR抑制剂NPS2390。每组按术后6、12、24 h和48 h细分为4个亚组。各组分别行BBB评分评判大鼠后肢运动功能,蛋白质印迹及免疫组织化学测定CaSR表达变化,TUNEL染色检测大鼠脊髓组织细胞凋亡情况。结果:模型组及NPS2390组BBB评分均明显低于假手术组(P <0. 05),NPS2390组各时间点评分高于模型组(P <0. 05)。蛋白质印迹结果显示,假手术组各时间点CaSR蛋白表达无明显差异(P>0. 05);与假手术组相比,模型组6～24 h CaSR表达量随时间延长增加,24 h表达最高,但NPS2390组低于模型组(P <0. 05);免疫组化结果与其一致。假手术组未见明显凋亡细胞;模型组各时间点细胞凋亡数均高于NPS2390组(P <0. 05),两组24、48 h细胞凋亡数均高于同组6 h和12 h(P <0. 05),24 h与48 h间细胞凋亡数差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:大鼠脊髓缺血再灌注损伤后CaSR表达逐渐升高,24 h为高峰; CaSR抑制剂NPS2390对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用。

DKP与BKP治疗骨质疏松性椎体压缩骨折的临床对比研究

目的:比较Jack椎体扩张器后凸成形术(Jack vertebral dilator-kyphoplasty,DKP)与球囊扩张后凸成形术(balloonkyphoplasty,BKP)治疗骨质疏松性椎体压缩骨折的临床疗效。方法 :回顾性研究2010年1月至2012年12月共56例单个椎体老年骨质疏松性椎体压缩骨折患者,其中33例患者行DKP手术治疗,23例患者行BKP手术治疗,比较两组手术时间、术中出血量、骨水泥注入量、视觉疼痛模拟评分(visual analogue scales,VAS)和Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI),观察骨水泥在椎体内的分布情况,测量手术前后病椎高度和Cobb角的改变。结果:56例患者均获随访,其中DKP组随访7~16个月,平均10.7个月;BKP组随访6~15个月,平均9.5个月。两组手术时间、出血量、骨水泥注入量相比,差异均无统计学意义(P>0.05),两组术后椎体高度、后凸Cobb角、疼痛VAS评分及ODI评分均较术前改善(P<0.05),DKP组在恢复椎体前缘高度和矫正后凸Cobb角方面优于BKP组(P<0.05)。DKP组出现1例椎体旁骨水泥少量渗漏(3.0%);BKP组出现5例渗漏(21.7%),均无临床症状。结论:DKP和BKP均可有效治疗老年骨质疏松性椎体压缩骨折,DKP在恢复椎体前缘高度及矫正后凸Cobb角上效果更显著,且骨水泥的渗漏率更低。

下肢骨折部位与深静脉血栓发生的关系

目的分析下肢骨折部位与下肢深静脉血栓发生的关系。方法下肢单侧单部位骨折患者2827例中,彩色多普勒超声筛查出下肢深静脉血栓患者127例。按骨折部位分为股骨近端骨折组(59例)、股骨干骨折组(19例)、膝部骨折组(25例)、小腿骨折组(22例)和足踝骨折组(2例),分析下肢深静脉血栓发生与骨折部位和血清D-二聚体水平的关联。结果深静脉血栓总发生率4.5%。单侧下肢血栓122例(96.1%),双侧5例(3.9%)。共检出血栓132处:左72处(54.6%),右60处(45.4%)(P<0.05);119处(90.2%)发生于骨折同侧,13处(9.8%)在对侧(P<0.05)。足踝部骨折组的D-二聚体水平低于其余四组(P<0.01)。小腿骨折组高风险血栓(血栓发生在腘静脉、股静脉;股总静脉和髂静脉)的发生率低于膝部骨折组、股骨干骨折组和股骨近端骨折组(P<0.01)。结论下肢骨折发生后,血栓一般发生在骨折同侧。膝部、股骨干和股骨近端骨折患者的血栓发生率较高,且以风险较高的血栓为主。

钙敏感受体和钙蛋白酶在大鼠脊髓的表达及其定位

目的探讨钙敏感受体(CaSR)和钙蛋白酶在大鼠脊髓缺血-再灌注损伤(SCII)中的作用。方法采用Western blot法检测CaSR在5只健康SD大鼠脊髓中的表达,免疫组化法观察CaSR及钙蛋白酶在脊髓表达的定位。结果 CaSR和钙蛋白酶在大鼠脊髓白质和灰质的前角、侧角及后角均有广泛表达。CaSR在脊髓神经元及神经胶质细胞的胞膜、胞浆和突起部均有表达,而钙蛋白酶仅在神经元的胞浆、胞膜和突起部表达。结论大鼠脊髓神经元细胞的细胞膜、胞浆及突起部是CaSR和钙蛋白酶的共表达部位,可能参与SCII的发生发展。