ALK3基因在心肌细胞凋亡中的作用研究

目的研究心脏特异性骨形态形成蛋白受体IA(BMPR1 A,又名ALK3)基因敲除小鼠心肌组织中的细胞凋亡情况,探讨ALK3基因在心肌细胞凋亡过程中的作用及细胞凋亡与室间隔缺损的关系。方法实验分为纯合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-),杂合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+)和野生型小鼠(C57)3组,每组取5只。20只雌性α-MHC Cre+/-,ALK3+/-小鼠和20只雄性ALK3 F/F小鼠交配获得心脏特异性ALK3基因敲除的纯合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-)和杂合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+);雌性和雄性C57小鼠各10只交配获得子代野生型小鼠;均取13.5d胚胎。提取胎膜DNA,PCR鉴定基因型。光镜下HE染色显示心脏组织形态,透射电镜观察心肌细胞的超微结构和凋亡情况,并以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡率。结果光镜显示α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-小鼠存在室间隔缺损现象,α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+小鼠和C57小鼠心脏形态正常;透射电镜和TUNEL提示α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-小鼠心肌细胞凋亡现象较α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+小鼠和C57小鼠严重。结论ALK3基因在调控心脏发育和心肌细胞凋亡过程中起重要作用。心脏特异性ALK3基因敲除小鼠中,室间隔缺损可部分归因于心肌细胞的过度凋亡。

RNA干扰与高血压

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）启动的序列特异的转录后基因沉默。本文简述了RNAi在高血压中的应用。

糖尿病大鼠心肌组织microRNA-27b的改变及意义

目的研究microRNA-27b在糖尿病大鼠心肌组织中的表达变化和意义。方法建立糖尿病大鼠模型,VG染色观察心肌组织形态及胶原容量,microRNA芯片筛选心肌纤维化相关microRNA,realtime PCR验证rrmicroRNA的表达改变。结果 VG染色显示糖尿病组大鼠心肌组织内胶原容量高于对照组(P<0.05),microRNA芯片提示糖尿病组大鼠与对照组相比心肌组织中多个microRNA出现表达差异,Realtime PCR证实糖尿病大鼠心肌组织中microRNA-27b的表达较对照组上调(P<0.05)。结论 microRNA-27b可能与糖尿病大鼠心肌纤维化的发生相关。

MicroRNA与心肌纤维化的研究进展

心肌纤维化是病理性心肌重构的重要表现，主要由于细胞外基质蛋白分泌增加和异常沉积，导致心肌间质网络异常重构、结构发生紊乱。而心肌组织细胞外基质蛋白的异常聚集，主要是由于心脏成纤维细胞的异常激活、增殖和迁移增加，并向分泌型转化，转变为肌成纤维细胞，分泌胶原蛋白能力增强。因此，研究心脏成纤维细胞在各种病理条件下的激活通路和调控分子对于深入理解心肌纤维化具有重要意义。

Pax-8基因在大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,观察其对心肌细胞凋亡和增殖的影响。方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组,非特异性siRNA(NCsiRNA)组和空白对照组。前两组分别给予相应siRNA(5μl)和Lipofectamine 2000(5μl)配制成的siRNA-脂质体复合物溶液,空白对照组给予等量的细胞培养基。采用RT-PCR和Western blotting测定Pax-8的mRNA和蛋白质表达,荧光光度法检测半胱天冬酶(Caspase)-3活性以反映细胞凋亡,CCK-8法检验细胞的增殖抑制率。结果与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8 siRNA组的Pax-8 mRNA表达分别下调60.30%(P<0.05)和63.09%(P<0.05),蛋白表达分别下调50.38%(P<0.05)和54.17%(P<0.05),而NCsiRNA组与空白对照组间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的Caspase-3活性较NCsiRNA组和空白对照组明显升高(P<0.01),而后两者间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的细胞增殖抑制率明显高于NCsiRNA组(P<0.01)。结论Pax-8 siRNA能选择性下调心肌细胞中Pax-8的表达,并促进细胞凋亡、抑制细胞增殖。

Pax-8基因在胚胎心脏发育中的作用

目的:在心脏特异的骨形态形成蛋白受体IA(the bone morphogenetic protein receptor IA,ALK3)基因敲除小鼠模型中,纯合子的心脏特异ALK3基因敲除的小鼠死于胚胎中期,同时伴有室间隔缺损。用基因芯片(microarray)法筛选了ALK3下游基因,并获得下游候选基因(转录因子Pax-8)。为了进一步明确Pax-8基因在胚胎心脏发育中的角色,Pax-8基因在小鼠被系统敲除。方法:运用实时荧光定量RT-PCR法检测Pax-8基因在小鼠胚胎中的表达情况。运用原位杂交法显示Pax-8基因在小鼠胚胎心脏中的表达部位。TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,电镜下观察Pax-8基因敲除的小鼠心脏组织发育的病理学异常。结果:正常胚胎小鼠9.5、10.5、11.5、12.5以及13.5d的Pax-8基因的表达水平以10.5d表达最高。胚胎切片的原位杂交显示:转录因子Pax-8表达在13.5d的α-MHCCre+/-,ALK3F/+小鼠整个心脏中。Pax-8基因敲除的小鼠心脏表现出形态改变(心脏呈球形,左心室壁肥厚,室间隔增厚,左室乳头肌肥大),左心室壁和室间隔心肌组织细胞凋亡率明显增高,同时线粒体体积较对照组明显缩小并且数量增多。结论:Pax-8基因是心脏较特异的参与心脏正常发育的ALK3下游基因,并与心肌细胞凋亡有关。

Pax-8基因敲除小鼠心脏中Bcl2l14基因表达上调

目的:寻找先天性心脏病相关基因-转录因子Pax-8的下游基因。方法:分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子(Pax-8 KO-/-)和杂合子(Pax-8 KO+/-)的心脏总RNA,利用含31802个小鼠基因的基因芯片检测两组小鼠基因表达水平,找出差异表达的基因,并经半定量RT-PCR和荧光实时定量PCR技术初步筛选出转录因子Pax-8的下游基因。结果:基因芯片检测发现,Pax-8 KO-/-组与Pax-8 KO+/-相比有25个基因表达下调,另有17个基因表达上调,差异基因涉及细胞周期及信号转导的调节因子,直接参与代谢的酶,以及核转录因子等。用半定量RT-PCR验证发现:Bcl2-like 14(Bcl2l14)基因在Pax-8 KO-/-组上调。定量RT-PCR亦证实在Pax-8KO-/-组Bcl2l14基因的表达水平较Pax-8 KO+/-组及Pax-8 KO+/+(野生型)组分别上调2.07倍和2.23倍(P<0.01)。结论:Bcl2l14基因为转录因子Pax-8的下游基因,可能在先天性心脏病室间隔缺损的发病机制中发挥重要作用。

妊娠合并慢性心衰患者血清心肌标志物水平及心功能参数观察

目的:探讨妊娠合并慢性心力衰竭孕妇心肌损伤标志物水平及心功能参数指标变化的临床意义。方法:选取2010年1月-2016年12月本院收治的妊娠合并慢性心力衰竭孕妇36例为已孕心衰组,选取医院就诊的未孕慢性心力衰竭患者42例(未孕心衰组)和正常妊娠妇女50例(正常妊娠组),同期医院体检正常的健康女性50例(正常对照组)。测定4组妇女心肌钙蛋白I(cTnI)、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平;彩色多普勒超声诊断仪测定舒张压早期左室充盈峰速度(E)、心房收缩期左室充盈峰速度(A),计算E/A值、左室射血分数(LVEF)、每搏心输出量(SV)、心输出量(CO)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)。结果:cTnI、NT-proBNP测定水平已孕心衰组>未孕心衰组>正常妊娠组>正常对照组(P<0.05)。已孕心衰组E峰流速、A峰流速、E/A、LVEF、SV、CO均低于另外3组,LVEDV、LVESV高于另外(P<0.05);未孕心衰组上述指标也分别低于或高于正常妊娠组、正常对照组(P<0.05);正常妊娠组LVEDV、LVESV高于正常对照组(P<0.05)。结论:与未孕心衰女性相比,妊娠合并慢性心衰孕妇的心肌损伤标志物发生异常,心肌收缩、舒张功能进一步下降,在产科临床应引起注意予以检测和观察。

Pax-8基因敲除小鼠心脏中Fgf-6基因表达的上调及其意义

目的探讨先天性心脏病相关基因转录因子Pax-8的下游基因以及Pax-8基因下调引起心脏形态改变的机制。方法分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子（Pax-8 KO^-/-）和杂合子（Pax-8 KO^4/-）的心脏总RNA，利用含31802个小鼠基因的基因芯片检测Pax-8 KO^-/-和Pax-8 KO^-/-小鼠的基因表达水平，找出差异表达的基因，并经荧光实时定量PCR技术初步筛选出转录因子Pax-8的下游基因。结果基因芯片检测发现，Pax-8 KO^-/-小鼠较Pax-8 KO^＋／-小鼠有25个基因表达下调，另有17个基因表达上调，差异基因涉及细胞周期及信号转导的调节因子、直接参与代谢的酶以及核转录因子等。定量RT-PCR证实，Pax-8 KO^-/-小鼠Fgf-6基因的表达水平较Pax-8 KO^＋/-小鼠及野生型（Pax-8^＋/＋）小鼠分别上调1.13倍和1．67倍，差异均较显著（P〈0.01）。结论Fgf-6基因是转录因子Pax-8的下游基因，可能在心脏的发育过程中发挥着重要作用。

Pax-8基因在心脏发育中蛋白表达下调

目的:观察Pax-8基因在ALK3基因敲除小鼠心脏中的蛋白表达情况,探讨Pax-8基因在心脏发育中的作用。方法:基因芯片(microarray)和定量逆转录-聚合酶链反应测定ALK3基因的下游基因,免疫组化法检测13.5 d小鼠胚胎心脏特异性ALK3基因敲除小鼠胚胎中Pax-8蛋白的表达,连续病理切片及HE染色观察刚出生的Pax-8基因敲除小鼠的心脏形态。结果:在心脏特异的ALK3基因敲除小鼠中,转录因子Pax-8基因mRNA的表达水平上被下调7.1倍。免疫组化结果显示:13.5 d小鼠胚胎心脏特异性ALK3基因敲除的纯合子小鼠Pax-8基因在蛋白水平与杂合子相比也明显下调。Pax-8基因敲除小鼠纯合子有明显的室间隔和左心室肥厚,心脏呈球形。结论:Pax-8基因是ALK3基因的下游基因,与心脏发育有密切关系。

无张力疝修补术与巴西尼修补术治疗嵌顿性斜疝的对比研究

目的比较无张力疝修补术与传统巴西尼修补术治疗急诊嵌顿性斜疝的临床疗效。方法收集56例嵌顿性斜疝患者的临床资料,其中无张力修补术26例(无张力组),巴西尼修补术30例(巴西尼组),比较两组治疗效果。结果两组在体重指数、既往疝病史、嵌顿时间、术前白细胞、术后切口感染、复发、慢性疼痛等方面比较,差异均无统计学意义(t分别=0.82、1.21、0.36、1.14,χ^(2)分别=0.35、0.42、0.84,P均>0.05)。与无张力组比较,巴西尼组平均年龄更高,疝囊更大,手术时间较短,住院总费用较低,合并较多的基础疾病,美国麻醉医师协会(ASA)麻醉分级更高,远期病死率较高,差异均有统计学意义(t分别=2.42、2.71、3.36、4.94,χ^(2)分别=4.35、5.42、4.84,P均<0.05)。结论腹股沟嵌顿疝应根据患者情况采用个体化手术方式,使用补片行无张力修补是安全、可行的,但对于高龄、基础疾病多、预期寿命有限的患者可以采取传统巴西尼修补术。

痛经特色针灸治疗进展

痛经可分为原发性和继发性两类,多表现为月经来潮前或月经期间出现腹部痉挛性疼痛、肛门坠胀感、腰部酸痛等不适,甚至可休克晕厥.现将特色针刺治疗痛经的研究综述如下.

近十年眼外肌麻痹中西医结合治疗概况

眼外肌麻痹是由于眼外肌本身或者其支配的神经系统受到损害而发生的器质性病变,表现为复视及眼球运动障碍。以往临床关注和研究比较少且单纯西药治疗效果欠佳,影响患者的临床治疗方案及其预后。近年来,采用中西医结合治疗眼外肌麻痹取得了较好的成果,现针对眼外肌麻痹的中西医结合治疗进行报道,笔者针对眼外肌麻痹的病因、病机治疗,分别从中医和西医2方面进行阐述,希望可以为临床治疗工作中解决实际问题提供帮助。

近几年针灸治疗延髓性麻痹研究近况

采用以"延髓性麻痹""针灸"为主题词加关键词的检索方式,收集近几年中国期刊全文数据库(CNKI),万方数据库中针刺治疗动眼神经麻痹的临床研究文献。经过筛选,最后共纳入31篇符合要求的相关文献,从项针、体针、特色针刺、针药结合等多方面综述了针刺治疗动眼神经麻痹的临床研究进展。

心脏发育相关的微小RNA差异表达分析

目的探讨微小RNA（miRNA）在心脏发育中的作用。方法建立先天性心脏病-室间隔缺损相关基因Pax-8敲除小鼠模型Pax·8KO-／-（纯合子）及Pax-8KO＋／-（杂合子），提取纯合子和杂合子小鼠心脏总RNA，采用含有567种miRNA的芯片进行检测并分析miRNA表达谱的差异，并通过荧光实时定量PCR技术对结果进行验证。结果纯合子小鼠比杂合子小鼠左心室腔扩大，左心室壁肥厚，室间隔增厚，左室乳头肌肥大，心脏呈球形。超声结果显示杂合子小鼠左室收缩末期内径[（LVIDs）（1．23±0．25）mm比（1．93±0．50）mm]和左室舒张末期内径[（LVIDd）（2．13±0．18）mm比（2．89±0．29）]均明显小于纯合子小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．01）心肌左心室壁以及室间隔组织可见大量的凋亡心肌细胞。在纯合子小鼠发现miRNA表达谱中差异表达的miRNA共10个，其中2个miRNA表达下调，8个miRNA表达上调。荧光实时定量RT-PCR结果与芯片结果基本符合。结论miRNA参与心脏发育过程，在先天性心脏病室间隔缺损的发病机制中可能发挥重要作用。

针刺神门及四神聪对150例原发性失眠患者多导睡眠图影响的临床观察

目的:观察针刺神门和四神聪治疗原发性失眠的临床疗效与其对多导睡眠图(PSG)的影响。方法:将150例患者,随机分为调心神组(A组)、调脑神组(B组)、心脑神并调组(C组),每组50例。分别针刺神门、四神聪、神门加四神聪,监测睡眠PSG相应指标的变化。结果:3组针刺治疗前后在PSG睡眠进程与睡眠结构方面结果均有显著性差异,主要表现为TST时间延长、SE提高、SL降低、RL升高、AWT和AT减少,S1%降低,REM%、S2%和S3+S4%提高(P<0.01)。A、B两组比较在指标上无明显差异,而两组与C组比较,除RL、S2%项外均有显著性差异(P<0.01),且C组整体效果较A、B组优。结论:调心神、调脑神治疗原发性失眠效果显著,两者并调效果更佳。

假性甲状旁腺功能减退症案

患者,男,32岁,2017年12月16日初诊。主诉:言语不清、右手活动不利12年,加重。现病史:12年前无明显诱因出现舌根发硬,语言欠流畅,吐词不清,次日出现右手写字欠灵活,手指笨拙。山东某医院诊断为假性甲状旁腺功能减退症。前患者自觉言语不清,右手活动不利加重,故于山东大学附属省立医院针灸理疗康复科就诊。

Abdomen-rubbing qigong exercise and health preservation concept of Fang Kai,a Xin'an medical physician

The abdomen-rubbing qigong exercise was first developed by Fang Kai, a Xin＇an medical practitioner. It＇s an essential part of Xin＇an health preservation works. This health preservation method integrates massage with Daoyin and integrates meridian theory with Zangxiang theory. It＇s safe, simple and has no side effects. Practice of this qigong exercise can protect the spleen and stomach, tonify qi and essence, harmonize Ying-Nutrients and Wei-Defense, unblock meridians and circulate qi. This paper aims to summarize and promote this exercise.