端粒调控因子及端粒酶逆转录酶相关分析

目的 研究端粒调控因子Tankyrase和端粒酶逆转录酶（hTERT）在胃腺癌组织中的表达水平。并进行相关分析。方法应用荧光实时定量PCR（Real-time PCR）技术检测16例胃腙癌组织和离肿瘤边缘5cm处正常癌旁组织中的Tankyrase和hTERT mRNA表达水平，同时分析Tankyrase表达水平在不同胃腺癌临床分期和组织分化程度各组间的关系。结果胃腺癌中Tankyrase mRNA的表达（1．44×10^2,3.88×10^-5～0．4847）高于正常对照（1．0134×10^-2，0～4．933×10^-2）（T=31，P〈0．05）。hTERT mRNA在胃腺癌中的表达为（1．235×10^-4～0．13301），显著高于正常对照（0，0～4．38×10^-5）（T=0，P〈0．01），两者呈正相关（r=0．553，P〈0．05）。但在不同胃腺癌临床分期、组织分化程度各组之间差异均无统计学意义。结论Tankyrase和hTERT在胃腺癌中表达增高，呈正相关，可能是胃腺癌发生过程中的重要因素。

端粒调控因子tankyrase在胃腺癌中的表达

目的:研究端粒调控因子tankyrase在胃腺癌组织中的表达及其在胃腺癌发生和发展过程中的作用。方法:应用荧光实时定量PCR(Real-timePCR)技术检测16例胃腺癌组织及离肿瘤边缘5cm处的正常癌旁组织中tankyrasemRNA表达水平。应用Envision免疫组化法检测37例胃腺癌和13例正常对照组织中tankyrase蛋白质表达水平。分析tankyrase表达水平在胃腺癌临床分期和组织分化程度各组间的关系。结果:胃腺癌中tankyrasemRNA的表达[1.44×10-2,(3.88×10-5)-0.4847]高于正常对照[1.0134×10-2,0-(4.933×10-2)](P<0.05)。胃腺癌中tankyrase蛋白质表达高于正常对照(P<0.05)。但在不同胃腺癌临床分期、组织分化程度各组之间均未见统计学差异。结论:TankyrasemRNA和蛋白水平在胃腺癌中的表达明显增高,可能是胃腺癌发生过程中的重要因素。

TRF1 219位磷酸化在细胞周期调控中的作用研究

目的:研究端粒结合因子-1(TRF1)丝氨酸219位磷酸化对细胞周期的影响。方法:突变TRF1的219位氨基酸,构建模拟磷酸化和非磷酸化状态的突变体TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,核苷酸测序和免疫印迹验证目的基因序列及蛋白表达。将野生型和突变体质粒用脂质体转染法转入H eLa细胞,观察它们在细胞中的定位、流式细胞仪检测各细胞周期的细胞数量、免疫印迹检测转染后ATM蛋白水平的改变。结果:测序证实突变成功,GFP抗体免疫印迹证实了突变体的蛋白表达。荧光显微镜下观察到TRF1S219A-GFP和TRF1S219D-GFP均呈点状定位于细胞端粒。流式细胞仪结果显示,过表达野生型和非磷酸化突变体的H eLa细胞产生G 2/M期的阻滞(P<0.05)。转染野生型和突变体后H eLa细胞中ATM蛋白含量均比对照组增高。结论:ATM激酶对TRF1丝氨酸219位的磷酸化可以抑制由于TRF1过量表达而引起的细胞周期G 2/M期的阻滞。

p53^(301-393)突变体的细胞定位及对有丝分裂的影响

目的:研究p53N端缺失突变体(301-393氨基酸)的绿色荧光融合蛋白p53301-393-GFP在p53阳性和阴性细胞中的定位以及对有丝分裂的影响。方法:免疫印迹检测突变体融合蛋白的表达。将野生型p53-GFP和p53301-393-GFP质粒,分别转染p53阳性细胞株HeLa和p53阴性细胞株H1299,观察各融合蛋白的细胞定位。观察转染突变体后H1299细胞生长情况,计数有丝分裂期的细胞数。HeLa细胞转染突变体后,流式细胞仪检测细胞周期,免疫印迹检测p53蛋白水平的改变。结果:p53301-393-GFP融合蛋白能正确表达。突变体在p53阳性和阴性细胞中都弥散定位于细胞核,但只在p53阳性细胞中才定位于核仁。p53301-393-GFP融合蛋白对H1299细胞的有丝分裂有明显的抑制作用,使进入有丝分裂期的细胞数量明显较对照组减少,且能够诱导凋亡。转染突变体的HeLa细胞产生G2/M期阻滞(P<0.05),但是内源性p53蛋白水平无明显改变。结论:p53301-393-GFP突变体在p53阳性和阴性细胞中有不同的细胞定位,并能抑制细胞的有丝分裂,使细胞发生G2/M期阻滞。