石油污染土壤热脱附修复的应用研究进展

热脱附技术由于适用范围广、处理时间短、处理效率高、污染物可回收,成为石油污染土壤修复领域的研究热点。为此,在剖析石油污染土壤热脱附机理的基础上,系统阐述了三种原位热脱附技术(电阻热脱附、蒸汽热脱附和热传导热脱附)和两种异位热脱附技术(直接热脱附和间接热脱附)在石油污染修复中的应用现状,最后指出石油污染土壤热脱附技术存在的问题和攻关方向,可为石油污染土壤热脱附技术的进一步推广应用提供支撑。

重组GGPPS腺病毒载体的构建及其调节肝星状细胞活化的研究

目的:构建携带人源ggpps基因的重组腺病毒并用其研究GGPPS对人肝星状细胞的活化作用.方法:利用PCR方法扩增ggpps基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成穿梭质粒pAdTrack-CMV-GGPPS.测序正确后,经PmeI单酶切线性化的pAdTrack-CMV-GGPPS与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组.经PacI酶切鉴定正确后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-GGPPS颗粒.利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生.用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并用免疫蛋白印迹和实时荧光定量PCR方法鉴定目的基因的表达.然后利用该病毒感染人肝星状细胞LX-2,观察对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成的影响.结果:成功地构建了携带ggpps基因的重组腺病毒,得到的病毒滴度经TCID50法检测为2.5×109PFU/mL.该病毒能够在人源的肝脏细胞中成功表达GGPPS蛋白.在LX-2细胞中过量表达GGPPS可以促进肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSCs)转分化成表达平滑肌肌动蛋白α(Alpha-Smooth muscle actin,α-SMA)的肌成纤维细胞(Myofibroblast,MF),同时检测到胞外基质成分纤连蛋白(Fibronectin,FN)的表达量显著增加.结论:成功构建的重组GGPPS腺病毒能促进肝星状细胞的活化.

GGPPS基因干扰腺病毒载体的构建及鉴定

构建GGPPS基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据GGPPS基因序列设计GGPPS干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-SiGGPPS干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞CPE,用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建GGPPS基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.995×107PFU/mL.GGPPS在人中具有保守性,该病毒能在人源的WRL-68细胞中成功表达,并且对GGPPS基因干扰效率达70%以上.

GGPPS多克隆抗体的制备与鉴定

构建人香叶基香叶基二磷酸合成酶基因(GGPPS)原核表达载体,制备兔抗人GGPPS多克隆抗体.利用DNA重组技术构建原核表达载体pGEX-4T-GGPPS,诱导表达GGPPS融合蛋白,分离纯化该融合蛋白后,作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体.成功构建了pGEX-4T-1-GGPPS原核表达载体,转化Rosetta菌株后可高效表达GGPPS融合蛋白,成功制备GGPPS多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价为1∶32000,并且抗体具有良好特异性.成功克隆GGPPS基因并制备了特异性的兔抗人GGPPS多克隆抗体,为进一步研究GGPPS的功能奠定了基础.

子痫前期孕妇尿液中ELABELA水平变化及意义

目的探讨子痫前期(PE)孕妇尿液中ELABELA(ELA)的表达及临床意义。方法 51例PE发病即就诊孕妇及48例产检正常孕妇作为研究对象,根据PE发病孕周将PE孕妇分为早发PE组(孕周≤34周, 27例)与晚发PE组(孕周>34周, 24例),并根据孕周将正常孕妇分为早发对照组(孕周≤34周, 28例)与近足月对照组(孕周>34周, 20例)。统计所有研究对象年龄、体质量指数(BMI)、收缩压及舒张压等基线资料,并于入院时采集尿液,通过酶联免疫吸附实验对尿液中的ELA进行检测。比较早发PE组与早发对照组、晚发PE组与近足月对照组基线资料的差异;比较早发PE组与早发对照组、晚发PE组与近足月对照组尿液中ELA水平的差异;比较早发PE组与晚发PE组尿液中ELA水平的差异。结果晚发PE组收缩压、舒张压明显高于近足月对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);早发PE组BMI、收缩压及舒张压均明显高于早发对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。晚发PE组尿液中ELA水平(6.99±1.10)ng/ml明显低于早发PE组的(8.51±1.80)ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 ELA表达降低可能与晚发PE的发病相关。

高校实验室危险废物管理现状及污染防治对策分析

高校实验室危险废物是危险废物管理工作的重点和难点之一。在对四川省部分高校实验室危险废物现状调研的基础上,结合文献分析,总结了高校实验室危险废物的主要特征和管理过程存在的问题。基于此,提出了通过扩大危险废物处置市场和建立厂家回收机制来提高危险废物综合利用和处置能力;通过危险废物管理部门加强监管和高校完善危险废物管理规章制度、明确管理责任、制定应急预案以及从分类、投放、暂存、收运、处置全过程提高环保要求加强实验室危险废物管理;通过减少化学品用量及加强环保教育等措施强化实验人员危险废物处置意识等污染防治对策。

鞘内注射γ-氨基丁酸转运体抑制剂NO-711在骨癌痛大鼠脊髓水平抑制磷酸化细胞外信号调节激酶1／2的上调

目的探讨脊髓水平脊髓细胞外信号调节激酶1／2（extracellular regulated kinase1／2，ERK1／2）活化在大鼠骨癌痛发生中的作用。方法实验1：雌性SD大鼠48只，体重160g-200g，按随机数字表法分成2组（每组24只），A组（对照组）、B组（模型组）。采用胫骨上段骨髓腔接种Walker-256乳腺癌细胞方法制备大鼠骨癌痛模型。于术前1d、术后1、3、5、7、10、14、21d测定大鼠机械刺激缩足反射阈值（mechanical withdrawal threshold，MWT）和自由行走痛行为学评分（arabulatory-evoked painscores，APS），术后第7、14、21天取大鼠腰段脊髓，采用Western blot方法检测ERK1／2的表达。实验2：60只大鼠按随机数字表法分为5组（每组12只）：S组、N1组、N2组、N3组和N4组。假手术组＋生理盐水（S组）、骨癌痛＋生理盐水（N1组）、骨癌痛＋NO-71110ug（N2组）、骨癌痛＋NO-71120ug（N3组）、骨癌痛＋NO-71140ug（N4组）。于术后第14天鞘内分别给予生理盐水（S组、N1组）、γ-氨基丁酸转运体（γ-aminobutyric acid transporter-1，GAT-1）抑制剂NO-711 10 ug（N2组）、NO-711 20ug（N3组）、NO．711 40ug（N4组）。最后一次给药后0．5、1、2、4、8、12、24h观察大鼠MWT和APS，于给药后4h取腰段脊髓，采用Western blot方法检测脊髓磷酸化细胞外信号调节激酶（phopho-extracellular regulated kinasel／2，p-ERK1／2）的表达。结果实验1：与A组和手术前比，从术后第7天开始，B组MWT（8．02±0．30）显著降低（P〈0．01），APS（0．88±0．22）和p-ERK1／2表达显著升高（P〈0．01）。实验2：与给药前相比，N1组大鼠MWT和APS在鞘内给予生理盐水（NS）后无明显改变。与给药前和N1组相比，NO-711可显著提高骨癌痛大鼠MWT（P〈0．05），其作用时间可分别达8h（N2组，6．49±0．64）和12h（N3组12．40±1．37、N4组11．48±0．69），但不能改善骨癌痛大鼠APS。免疫蛋白印迹法（Western blot）：与s组相比，M组p-ERK1／2表达明显上调（P〈0．01）；与N1组相比，N2、N3、N4组p-ERK1／2表达含量降低（P〈0．01）。结论脊髓背角p-ERK表达上调参与了骨癌痛的产生，NO-711通过抑制p-ERK表达上调缓解骨癌痛大鼠机械痛觉过敏。