肠道病毒A71型结构蛋白和非结构蛋白对p85表达及p38途径活化的影响

目的探讨肠道病毒A71型(EV-A71)结构蛋白和非结构蛋白对p85表达和p38途径活化的影响。方法通过RT-PCR扩增EV-A71的12个基因片段,经酶切反应和连接反应将目的片段连接到pcDNA3.1(+)/myc-His A真核表达载体,制备去内毒素的重组质粒;使用SuperFect转染试剂将2μg重组真核质粒转染至HEK293细胞24h后,免疫印迹检测p85表达和p38的磷酸化。结果正确构建12个EV-A71结构蛋白和非结构蛋白的真核重组质粒;与未转染细胞相比,EV-A71 P1区结构蛋白(VP1、VP3和VP4)、P2区非结构蛋白(2A、2B、2C和2BC)和P3区非结构蛋白(3A、3C、3D和3AB)均能不同程度的改变p85的表达和p38的磷酸化水平;EV-A71结构蛋白VP2虽不能显著提升p85的表达,但能提升p38的磷酸化水平。结论EV-A71的12个亚单位蛋白可与宿主细胞发生互作,进而调控宿主细胞的生物学过程。

肠道病毒A71型亚单位蛋白对RD细胞自噬活化的影响

肠道病毒A71型(Enterovirus-A71, EV-A71)能够活化宿主细胞的自噬并依赖自噬促进其复制,然而EV-A71的亚单位蛋白对自噬的活化目前仍不清楚。为探讨EV-A71亚单位蛋白对人横纹肌肉瘤(Human rhabdomyosarcoma, RD)细胞自噬活化的影响,将EV-A71的亚单位蛋白重组真核质粒转染至RD细胞,采用抑制剂MK-2206阻断PI3K/Akt途径,共聚焦显微镜和免疫印迹检测自噬活化。过表达EV-A71亚单位蛋白的RD细胞中PI3K/Akt途径、p38、JNK和ERK途径均呈现不同程度活化,同时RD细胞呈现出绿色荧光表明自噬发生活化,特别是EV-A71的VP2和2A。EV-A71亚单位蛋白使LC3-II/LC3-I的转化水平提升,EV-A71亚单位蛋白(VP2、VP3、VP4、2A、2B和2C)显著提升p62的表达水平,EV-A71 VP1显著下调p62的表达水平但显著上调LAMP-1和LAMP-2的表达水平。阻断PI3K/Akt途径后,过表达EV-A71亚单位蛋白的RD细胞绿色荧光强度显著减弱、自噬被阻断,同时LC3-II/LC3-I的转化水平显著降低而p62的表达水平提升,过表达EV-A71 VP1能提升p62表达水平但降低LAMP-1表达水平。因此,EV-A71亚单位蛋白能够不同程度依赖PI3K/Akt途径活化细胞自噬。

俄罗斯西欧派的文化世界

一个半世纪前使俄国斯拉夫主义者和西欧主义者绞尽脑汁的二者必择其一的抉择,最近一些年变得更为现实了。为了确定自己在整个欧洲大家庭的位置,俄罗斯不得不一次再次地回顾自己千年的历程。关于这个大家庭,不仅知识界人士,而且政治家们谈论的调门都越来越高。东欧和东北欧历来是各种扩张的文化流派的交汇之地。来自拜占庭、斯堪的纳维亚或者西欧和亚洲腹地的五花八门的、有时相互矛盾的思想在这里发生碰撞,使俄罗斯的物质文化和精神文化不仅均匀地、渐进地受到这些外来思想的影响,而且。