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金黄色葡萄球菌肠毒素SEK的纯化及DAS-ELISA检测方法的建立与应用
被引量:
2
1
作者
杨丹茹
赵燕英
唐俊妮
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2019年第3期225-233,共9页
本研究目的为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK的双抗夹心酶联免疫吸附方法。将构建的原核表达载体pET-28a(+)-ΔNspSEK转化入BL 21(DE3)pLysS细胞中诱导表达,经Ni^(2+)-NTA亲和层析柱纯化获得重组SEK蛋白作为抗原。利用双...
本研究目的为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK的双抗夹心酶联免疫吸附方法。将构建的原核表达载体pET-28a(+)-ΔNspSEK转化入BL 21(DE3)pLysS细胞中诱导表达,经Ni^(2+)-NTA亲和层析柱纯化获得重组SEK蛋白作为抗原。利用双抗夹心酶联免疫方法检测程序,确定抗SEK单克隆抗体及抗SEK多克隆血清的最佳稀释度,并使用该方法应用于检测SEK人工污染样品的加标回收率和茶多酚及乳酸链球菌素(Nisin)对7株sek阳性菌株的SEK蛋白分泌影响。结果表明,原核表达载体得到可溶性表达,重组SEK蛋白分子量约为27.7ku;建立的双抗夹心酶联免疫检测方法中,单克隆抗体最佳包被浓度为2.89μg/mL、抗血清的最佳稀释度为1:500,回归方程为y=0.2165x+0.1627,相关系数R^2=0.9993,最低检测限为0.1μg/mL;检测SEK人工污染脱脂奶、LB肉汤和牛肉糜中的加标回收率高达97%以上;并且,采用建立的方法测得茶多酚和Nisin的添加浓度在其MIC及以下浓度时,茶多酚对7株sek阳性菌株蛋白分泌抑制效果更明显。
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关键词
金黄色葡萄球菌肠毒素SEK
原核表达
蛋白纯化
ELISA检测方法
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职称材料
绵羊肺炎支原体P208蛋白质的分子特征分析及免疫原性
被引量:
1
2
作者
管礼麟
马媛
+1 位作者
杨丹茹
杨
发龙
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2018年第1期81-86,共6页
为了研究绵羊肺炎支原体P208蛋白质的结构及功能,本试验在对p208基因进行生物信息学分析的基础上,对其部分基因片段进行了克隆及原核表达,并采用Western-blot对其免疫原性进行分析。结果显示,p208基因与猪肺炎支原体黏附素p216基因、殊...
为了研究绵羊肺炎支原体P208蛋白质的结构及功能,本试验在对p208基因进行生物信息学分析的基础上,对其部分基因片段进行了克隆及原核表达,并采用Western-blot对其免疫原性进行分析。结果显示,p208基因与猪肺炎支原体黏附素p216基因、殊异支原体细胞表面蛋白基因以及絮状支原体P97/LPPS家族蛋白基因具有较高的同源性。重组P208蛋白以可溶性形式在大肠杆菌BL21(DE3)工程菌中成功得到表达;纯化的重组蛋白与山羊抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P208蛋白质是绵羊肺炎支原体的免疫原之一。研究结果为进一步分析其功能及其应用提供了重要的依据。
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关键词
绵羊肺炎支原体
P208蛋白
分子特征
免疫原性
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职称材料
异体移植炎症因子1通过核因子κB信号促进牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放
3
作者
伍迎欢
杨丹茹
赵燕英
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期782-788,共7页
奶牛乳腺炎是指在不同理化因素刺激下奶牛乳腺的炎性反应,其严重影响了奶牛养殖业的健康发展。许多细胞因子是炎症调节剂,但与奶牛乳腺炎相关的关键细胞因子还未被鉴定。异体移植炎症因子1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)在免...
奶牛乳腺炎是指在不同理化因素刺激下奶牛乳腺的炎性反应,其严重影响了奶牛养殖业的健康发展。许多细胞因子是炎症调节剂,但与奶牛乳腺炎相关的关键细胞因子还未被鉴定。异体移植炎症因子1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)在免疫调节中扮演重要角色,并在多种炎性疾病中过量表达。因此,本研究探讨了牛AIF-1在乳腺炎中的可能作用。首先,利用ELISA试剂盒检测了乳腺炎牛奶中牛AIF-1的含量,并用RT-PCR方法克隆牛AIF-1基因,然后,用亲和层析纯化牛AIF-1蛋白。用此重组蛋白刺激牛乳腺上皮细胞,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,Western blot测定IκBα的磷酸化。结果显示,患乳腺炎奶牛乳中AIF-1的平均含量显著高于健康奶牛,而抗生素治愈后的奶牛乳中AIF-1的含量回落到正常水平。这些结果提示,牛AIF-1是一个分泌型蛋白,可能与乳腺炎相关。为了进一步探索这种关系,本研究克隆了牛AIF-1基因并纯化了牛AIF-1蛋白。此蛋白上调了牛乳腺上皮细胞肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,并刺激了IκBα的磷酸化。IκBα磷酸化抑制剂BAY 11-7085阻断了牛AIF-1刺激的炎性细胞因子上调。综上表明,牛AIF-1通过核因子κB信号促进了牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放。
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关键词
奶牛乳腺炎
牛乳腺上皮细胞
异体移植炎症因子1
核因子ΚB
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职称材料
题名
金黄色葡萄球菌肠毒素SEK的纯化及DAS-ELISA检测方法的建立与应用
被引量:
2
1
作者
杨丹茹
赵燕英
唐俊妮
机构
西南民族大学生命科学与技术学院青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室
出处
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2019年第3期225-233,共9页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFD0500500)
西南民族大学研究生创新项目(CX2018SZ20)
文摘
本研究目的为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK的双抗夹心酶联免疫吸附方法。将构建的原核表达载体pET-28a(+)-ΔNspSEK转化入BL 21(DE3)pLysS细胞中诱导表达,经Ni^(2+)-NTA亲和层析柱纯化获得重组SEK蛋白作为抗原。利用双抗夹心酶联免疫方法检测程序,确定抗SEK单克隆抗体及抗SEK多克隆血清的最佳稀释度,并使用该方法应用于检测SEK人工污染样品的加标回收率和茶多酚及乳酸链球菌素(Nisin)对7株sek阳性菌株的SEK蛋白分泌影响。结果表明,原核表达载体得到可溶性表达,重组SEK蛋白分子量约为27.7ku;建立的双抗夹心酶联免疫检测方法中,单克隆抗体最佳包被浓度为2.89μg/mL、抗血清的最佳稀释度为1:500,回归方程为y=0.2165x+0.1627,相关系数R^2=0.9993,最低检测限为0.1μg/mL;检测SEK人工污染脱脂奶、LB肉汤和牛肉糜中的加标回收率高达97%以上;并且,采用建立的方法测得茶多酚和Nisin的添加浓度在其MIC及以下浓度时,茶多酚对7株sek阳性菌株蛋白分泌抑制效果更明显。
关键词
金黄色葡萄球菌肠毒素SEK
原核表达
蛋白纯化
ELISA检测方法
Keywords
Staphylococcal enterotoxin K
prokaryotic expression
protein purification
ELISA
分类号
TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
绵羊肺炎支原体P208蛋白质的分子特征分析及免疫原性
被引量:
1
2
作者
管礼麟
马媛
杨丹茹
杨
发龙
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2018年第1期81-86,共6页
基金
"十三五"国家重点研发计划项目(2016YFD0500907)
西南民族大学研究生创新型科研项目(CX2016SZ090)
文摘
为了研究绵羊肺炎支原体P208蛋白质的结构及功能,本试验在对p208基因进行生物信息学分析的基础上,对其部分基因片段进行了克隆及原核表达,并采用Western-blot对其免疫原性进行分析。结果显示,p208基因与猪肺炎支原体黏附素p216基因、殊异支原体细胞表面蛋白基因以及絮状支原体P97/LPPS家族蛋白基因具有较高的同源性。重组P208蛋白以可溶性形式在大肠杆菌BL21(DE3)工程菌中成功得到表达;纯化的重组蛋白与山羊抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P208蛋白质是绵羊肺炎支原体的免疫原之一。研究结果为进一步分析其功能及其应用提供了重要的依据。
关键词
绵羊肺炎支原体
P208蛋白
分子特征
免疫原性
Keywords
Mycoplasma ovipneumoniae
P208 protein
molecular characterization
immunogenicity
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
异体移植炎症因子1通过核因子κB信号促进牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放
3
作者
伍迎欢
杨丹茹
赵燕英
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期782-788,共7页
基金
国家自然科学基金(31400794)
四川省杰出青年基金(2019JDJQ0017)
西南民族大学研究生创新项目(CX2020SZ29)。
文摘
奶牛乳腺炎是指在不同理化因素刺激下奶牛乳腺的炎性反应,其严重影响了奶牛养殖业的健康发展。许多细胞因子是炎症调节剂,但与奶牛乳腺炎相关的关键细胞因子还未被鉴定。异体移植炎症因子1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)在免疫调节中扮演重要角色,并在多种炎性疾病中过量表达。因此,本研究探讨了牛AIF-1在乳腺炎中的可能作用。首先,利用ELISA试剂盒检测了乳腺炎牛奶中牛AIF-1的含量,并用RT-PCR方法克隆牛AIF-1基因,然后,用亲和层析纯化牛AIF-1蛋白。用此重组蛋白刺激牛乳腺上皮细胞,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,Western blot测定IκBα的磷酸化。结果显示,患乳腺炎奶牛乳中AIF-1的平均含量显著高于健康奶牛,而抗生素治愈后的奶牛乳中AIF-1的含量回落到正常水平。这些结果提示,牛AIF-1是一个分泌型蛋白,可能与乳腺炎相关。为了进一步探索这种关系,本研究克隆了牛AIF-1基因并纯化了牛AIF-1蛋白。此蛋白上调了牛乳腺上皮细胞肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,并刺激了IκBα的磷酸化。IκBα磷酸化抑制剂BAY 11-7085阻断了牛AIF-1刺激的炎性细胞因子上调。综上表明,牛AIF-1通过核因子κB信号促进了牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放。
关键词
奶牛乳腺炎
牛乳腺上皮细胞
异体移植炎症因子1
核因子ΚB
Keywords
bovine mastitis
bovine mammary epithelial cells
allograft inflammatory factor-1
NF-κB
分类号
S857.26 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
金黄色葡萄球菌肠毒素SEK的纯化及DAS-ELISA检测方法的建立与应用
杨丹茹
赵燕英
唐俊妮
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
2
绵羊肺炎支原体P208蛋白质的分子特征分析及免疫原性
管礼麟
马媛
杨丹茹
杨
发龙
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2018
1
下载PDF
职称材料
3
异体移植炎症因子1通过核因子κB信号促进牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放
伍迎欢
杨丹茹
赵燕英
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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