骨髓间充质干细胞体外培养及肝向分化方案的优化

目的优化一套简便、可靠、稳定的大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养、鉴定及肝向分化的方案。方法采用全骨髓差速贴壁法分离提取大鼠骨髓间充质干细胞,通过优化的1.5 h差速贴壁结合12 h首次全量换液方法,及体外改良培养方案实现细胞高效纯化扩增。流式细胞术表面标志物检测结合成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定细胞群。采用添加b FGF、HGF、EGF等多种生长因子的三步诱导法促使骨髓间充质干细胞向肝系分化,并进行形态学、免疫学、基因水平评估。结果分离纯化的细胞群阳性表达CD29、CD44、CD90,阴性表达CD34、CD45,经成脂、成骨、成软骨诱导液作用后,油红O、茜素红、甲苯胺蓝染色均呈阳性。经三步法肝向诱导处理后,细胞群呈肝样细胞形态改变,表达肝脏特异性标志物ALB、AFP,肝系相关基因表达水平呈时间依赖性逐渐上升。结论优化后的方案能够简便、可靠、稳定地获得高纯度的大鼠骨髓间充质干细胞,并能在特定微环境作用下实现肝向分化。

生长因子诱导骨髓间充质干细胞肝向分化抑制慢性肝纤维化

背景:骨髓间充质干细胞在改善肝纤维化或肝硬化所致肝损伤中的作用仍存在争议,骨髓间充质干细胞移植对慢性肝纤维化的治疗作用是否与其分化程度相关,尚有待进一步研究。目的:通过体外诱导骨髓间充质干细胞肝向分化并进行体内植入,观察其对肝脏慢性纤维化的治疗作用。方法:分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,通过体外诱导骨髓间充质干细胞肝向分化,获得肝样细胞。采用四氯化碳构建大鼠慢性肝纤维化模型,将骨髓间充质干细胞或肝样细胞通过尾静脉注射法行体内植入,观察并比较各组间大鼠生存率、肝纤维化程度、肝功能指标。结果与结论:(1)骨髓间充质干细胞具有体外分化潜能,经诱导成功分化为肝样细胞;(2)将肝样细胞移植到慢性肝纤维化大鼠体内,大鼠4周生存率提高至66.7%,肝纤维化程度减轻至(14.69±0.37)%,白蛋白水平提高至(29.4±0.7)mg/L,谷草转氨酶水平降低至(347.0±11.3)U/L,优于模型组及骨髓间充质干细胞移植组(P<0.05);(3)结果提示,骨髓间充质干细胞经肝向诱导分化后行体内移植,能够改善慢性肝纤维化大鼠的肝脏功能,减轻纤维化程度,并提高生存率。

基于脾脏脱细胞支架构建组织工程肝脏的体内植入策略

目的体外构建基于脾脏脱细胞支架的组织工程肝脏,并探索其理想的体内植入策略。方法获取健康SD大鼠脾脏,采用低温冻融结合十二烷基硫酸钠灌注法制备脾脏脱细胞支架(DSM)。Seglen改良两步胶原酶灌注法获取大鼠原代肝细胞,经脾动脉再植入DSM内体外构建组织工程肝脏。以SD大鼠为受体,比较异位血管吻合移植、肝断面缝合移植、肝内嵌入移植以及肠系膜包裹移植4种策略的优缺点。结果肝细胞支架种植率为(74.5±7.7)%,HE染色与扫描电镜显示细胞状态良好,免疫荧光染色证实细胞正常表达ALB、G6Pc。异位血管吻合移植手术难度高,围手术期死亡率高达33.3%,术后6 h支架内形成大量血栓;肝断面缝合无法迅速建立充分血供,术后3 d未见成形移植物;肝内嵌入移植法细胞最长可存活14 d;肠系膜包裹移植术后14 d时支架内细胞存活率为(38.3±7.1)%。结论利用DSM构建的组织工程肝脏能部分表达肝细胞特异性功能,肠系膜包裹移植策略简单安全有效,是目前可行的体内移植方式。

磁吻合技术实现无缝线肝脏快速植入的临床前研究

肝移植是终末期肝病唯一有效的治疗手段。虽然移植器官保存技术、免疫抑制剂及外科手术的不断进展在很大程度上提高了肝移植成功率,但是术中传统的手工缝合血管的方法,易引起器官缺血-再灌注损伤、血管狭窄等并发症,导致患者生存质量下降。研制并发明一种能高效完成血管无缝线吻合的新型血管吻合器,利用磁压榨吻合技术达到血管快速吻合的目的,最终得以实现肝移植术中肝脏附属管道无缝线快速重建,尽可能地降低手术难度、缩短无肝期、减少手术并发症发生率。全面、深入、系统地研究磁吻合技术的基础理论和临床应用的可行性、安全性,可促进血管吻合重建技术的临床转化应用。

高压辊磨机辊面磨损过程分析及新型辊面的应用

通过对高压辊磨机辊面磨损过程的研究,找出了压力、水分、物料性质及粒度组成是影响辊面磨损的主要因素,通过对影响因素的控制,可提高辊面的使用寿命;同时针对辊面的磨损过程,提出了一种新型辊面,并介绍了新型辊面在金属矿山的生产应用情况。

3D打印技术在现代外科领域的应用

3D打印技术广泛应用于医学、汽车工业、航空航天、建筑、食品、教育等与人类生活息息相关的各个领域,为人类社会发展和科技创新带来了新的机遇。本文对3D打印技术的打印材料及其在外科工程中的应用(包括医疗器械、医学模型、体内植入物、组织和器官打印等)和发展前景进行了综述。

一种模块化三维灌注培养系统的研制

目的:研制一种模块化三维灌注培养系统,解决目前培养系统结构复杂、难消毒、易污染的问题。方法:该系统主要由生物反应器模块、氧合模块、动力模块以及换液模块构成,各模块壳体通过3D打印制作。其中生物反应器模块主体为80 ml蓝口瓶,装载培养基及细胞支架复合物。氧合模块装载膜肺、空气过滤器、气泡过滤器等,为培养系统的核心组件。动力模块由蠕动泵和空气泵组成,为培养基及气体提供动力。换液模块中装有深紫外LED灯,可进行消毒和更换培养基。结果:通过该系统进行大鼠脾脏脱细胞支架培养,细胞与支架黏附紧密、生长状态良好,且未发生污染。结论:该系统具有结构合理、易消毒、污染少、制作成本低、稳定性高、易于扩展且操作简单的优点,可很方便地进行基于脱细胞支架的三维灌注培养,值得推广应用。

超冷器官保存技术及应用

在器官移植手术中,器官保存的主要目的是保持离体器官内部组织细胞的活性,为器官转运及分配、受者术前评估以及手术团队准备赢得时间。器官保存的主要方法可分为常温机械灌注保存和低温保存。其中低温保存是目前临床上最为常用的器官保存方法,但在低温保存状态下,组织细胞内部仍存在代谢活动,这导致器官的长时间保存极为困难。超冷器官保存技术是一种新型的低温器官保存技术,极大地延长了器官的保存时间,未来有望成为器官保存的重要手段,为“器官库”的建立提供技术支持。

大鼠肝下下腔静脉端端磁吻合技术探究

目的研制一种适用于大鼠肝下下腔静脉的磁性吻合装置并验证其可行性及安全性。方法根据大鼠下腔静脉解剖特点,设计并加工了一种适用于大鼠肝下下腔静脉端端吻合的磁性装置,该装置分为内环和外环两个部分,内环为具有镀层的钕铁硼磁环,外环由聚醚醚酮经3D打印制成,其上均匀分布10个细孔,其中5个细孔用于加载细针,另外5个细孔在吻合时与对侧吻合环的细针相互嵌合。将外环上均匀加载细针后与内环粘接在一起组成磁性吻合环,将两侧血管断端穿过吻合环后外翻固定至细针上,再将两侧磁性吻合环相吸便完成血管吻合。选取20只SD大鼠利用磁性吻合装置进行肝下下腔静脉端端磁吻合,分析大鼠术中血管阻断时间、术后存活情况、术后吻合口通畅情况和术后吻合口大体观及组织学检查情况。结果所有大鼠均顺利完成大鼠肝下下腔静脉端端磁吻合,血管阻断时间为4~6 min。其中1只大鼠在术后10 d死亡,其余大鼠均存活至术后2个月。存活大鼠术后1 d、3 d、1个月及2个月血管吻合口通畅率分别为100%、100%、95%及95%。术后2个月时血管吻合装置未发现明显移位、成角,血管吻合环未发现明显腐蚀、裂解迹象,周围组织未见明显增生及水肿,两侧血管断端已完全愈合,吻合口未见明显狭窄及血栓形成。组织学检查发现吻合口两侧血管管壁连续性良好,吻合口内面可见内皮细胞覆盖,未见血栓及纤维组织附着。结论利用本研究设计的磁性吻合装置施行大鼠肝下下腔静脉端端磁吻合是安全可行的。

YE3系列三相异步电动机能效达标措施

介绍了YE3系列高效三相异步电动机能效达标采取的措施,通过研究YE3系列高效三相异步电动机定转子铜损耗、风摩损耗和温升三者之间的关系,确定了YE3系列高效三相异步电动机所用风扇的类型;通过多组型式试验,验证了适当的放大定转子之间的气隙,可以减小三相异步电动机的杂散损耗,进一步提高三相异步电动机的效率。

论色彩心理暗示在食品包装设计中的应用

不吃糖的人,也会因为包装上独特而激发他购买回家的欲望,所以,在超市这种竞争销售的模式下,好的食品包装设计也一定会脱颖而出.而在食品包装设计中,色彩心理暗示对消费者的心理的引导占据了很大一部分比重.色彩是最原始的审美形式,这是由于对色彩的感受有动物性的自然反应作为直接基础.当人们采购某种商品,色彩则是他们对于商品的最直观的印象.大多数的商品都需要被包装,优秀的食品包装设计犹如锦上添花,好的设计色彩则可以更直观的表明商品的特点和属性.

供肝免冲洗灌注的大鼠肝移植实验研究

目的探讨供肝免冲洗灌注的大鼠肝移植的可行性。方法将72只健康成年SD大鼠随机分为3组:供体全身肝素化的供肝免冲洗灌注(NFLS组),供体不行全身肝素化的供肝免冲洗灌注(NFL组),供体行全身肝素化的供肝UW液冲洗灌注(对照组)。每组各24只,组内大鼠随机作为供受体进行同种异体大鼠肝移植。分别于移植术后24、72 h获取组织及血清标本送检,检测血清AST、ALT及TB;同时观察各组供肝术后大体观和组织病理学变化。3组AST、TB等肝功能指标比较采用Kruskal-Wallis秩和检验,两两比较采用Wilcoxon检验。结果3组均顺利完成肝移植,术后受体均顺利存活。NFLS组受体术后72 h血清AST、TB水平分别为112(89,181)U/L、0.5(0.4,0.6)μmol/L,明显低于对照组的453(361,692)U/L、1.8(1.5,2.2)μmol/L(Z=-2.56,-2.89;P<0.05)。3组术后24、72 h移植肝灌注良好,移植肝表面均未见明显坏死灶。HE染色显示NFLS组和对照组移植肝肝小叶结构正常,仅有轻微肝脏小叶中心微空泡脂肪变性;NFL组移植肝肝窦内部可观察到微循环血栓形成。结论与传统的器官保存液冲洗灌注相比,免冲洗灌注大鼠肝移植术后肝功能和组织学损伤并无明显加重,供肝免冲洗灌注肝移植可能具有一定可行性,供体全身肝素化是其关键条件。

磁外科学发展趋势及展望

磁外科(磁外科学)相关技术在过去40余年里取得了丰硕的成果,既解决了一些临床瓶颈问题,也优化了一些外科基本操作,展示出良好的发展前景.磁外科建立了自身的理论知识体系,同时也丰富了大外科体系架构,培养了一批致力于磁外科发展的医工结合专业人才.标志性的成绩表现在:相关的基础研究、临床研究在广度和深度上愈发完善,重要研究成果转化率也逐渐提高,相当多的技术切切实实地服务于临床,解决了临床实际问题.随着基础研究的深入和交叉领域的拓展,磁外科展示出巨大的发展空间,更蓄积了引领若干技术变革潜质.

磁压榨吻合技术在大鼠肝移植模型建立中的应用

目的采用磁压榨吻合(MCA)技术代替传统缝合法,建立一种无缝线快速吻合肝移植模型,为临床肝移植相关问题研究搭建一个良好的技术平台。方法 SPF级健康雄性SD成年大鼠300只,体重为250~280 g,供、受体各150只。以"双袖套"法为基础,采用MCA行大鼠肝上下腔静脉(SHVC)重建建立大鼠原位肝移植模型。练习分3个阶段,分为前期40对,中期40对,后期70对。观察并记录各阶段大鼠肝移植术手术时间及术后1、5 d存活率;分析手术失败的原因并改良手术技巧。结果供体手术时间从前期(45.0±5.0)min减少至后期(22.0±3.0)min,无肝期从(28.5±5.0)min减少至(11.8±3.1)min,受体手术时间从(76.1±7.0)min减少至(47.7±2.9)min。前期、中期、后期的术后1、5 d存活率分别为25%(10/40)、80%(32/40)、97%(68/70)和5%(2/40)、45%(18/40)、83%(58/70)。前期大鼠肝移植手术失败主要是由于无肝期长、门静脉(PV)-肝下下腔静脉(IHVC)吻合失败、术中出血多,受体多数未完成手术或术后2~4 h死亡。中、后期大鼠肝移植手术失败主要是由于PV-IHVC吻合失败。结论采用改良的MCA可快速吻合SHVC,提高移植成功率,为初学者减少练习难度与周期,建立了一种理想的肝移植模型。

肝癌实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞分离培养方案的优化

目的分离培养人原发性肝癌(肝癌)实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞(CAF),并检测其生物学特性。方法标本来源于2015年9月至2016年10月西安交通大学第一附属医院15例肝癌患者手术切除新鲜肝癌组织。其中男12例,女3例;年龄28～64岁,中位年龄45岁;肝细胞癌13例,胆管细胞型肝癌2例。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。采用胶原酶消化法分离培养人原代肝癌细胞及CAF。倒置显微镜下观察肝癌实质及CAF的形态特征。CCK-8法测定细胞活性,免疫荧光鉴定肝癌细胞标志物AFP及CAF标志物波形蛋白(Vimentin)表达。结果原代肝癌实质细胞培养成功率为2/15,CAF培养成功率为11/15,均为肝细胞癌。肝癌实质细胞为上皮样细胞,铺路石样分布。CAF为长梭形或多角形,呈"鱼群样"分布。肝癌细胞与CAF生长状态良好,增殖活跃,呈对数型生长,CAF的增殖能力略强于肝癌细胞。免疫荧光染色显示原代肝癌细胞质中AFP染色阳性,CAF中Vimentin蛋白表达阳性。结论采用胶原酶消化法可以成功获得高增殖活性的人原代肝癌实质细胞及CAF。

磁外科理念能使疝与腹壁外科技术再优化

磁外科是一门新型的外科技术体系,按照临床应用及原理的不同可以将磁外科技术分为以下5类:磁压榨技术、磁导航技术、磁锚定技术、磁悬浮技术以及磁示踪技术。不同的磁外科技术以其独特的优势创新了多种新型外科诊断和治疗方法,同时也优化了众多传统的外科诊疗手段。目前,磁外科技术已经在管腔重建、组织牵引暴露以及病变追踪等领域应用并展现出了良好的应用前景。在疝和腹壁外科手术中,磁外科技术具备优化某些手术操作的潜质,如在腔镜疝修补手术中利用磁力导航可以使得疝补片术中移动和固定更灵活,磁力锚定可以使得腔镜手术更微创,磁力牵引可以使腹壁组织游离更便捷,而磁力吻合可以使得腹腔感染控制和减容更安全。