电针对SAMP8小鼠血脑屏障的影响

目的研究电针通过对快速老化痴呆模型SAMP8小鼠血脑屏障的调控,以期加强药物入脑。方法 30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组(n=7)、电针组(n=7)、药物组(n=7)和针药组(n=7),以同源抗快速老化小鼠SAMR1作为对照组(n=7)。电针组和针药组电针印堂、百会;药物组和针药组予盐酸多奈哌齐灌胃;对照组和模型组常规抓取。共4周。电镜观察血脑屏障紧密连接开放程度和基底膜厚度;定量聚合酶链式反应检测海马区紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5和Occludin mRNA的表达,免疫组化检测海马区乙酰胆碱酯酶(AChE)的含量。结果对照组、电针组和针药组紧密连接以及基底膜结构均优于模型组和药物组;针药组AChE表达最低,以下依次是药物组和对照组、电针组、模型组(P <0.001);电针组和针药组ZO-1、Claudin-5和Occludin mRNA表达水平高于药物组(P <0.01)。结论电针能够改善SAMP8小鼠血脑屏障结构,可能与调节紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5和Occludin的表达有关。

电针对大鼠失神经腓肠肌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/70KD核糖体蛋白S6激酶信号通路的影响

目的探讨电针延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩的可能机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠18只随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)和电针组(n=6)。后两组钳夹伤右侧坐骨神经制备失神经骨骼肌萎缩模型。造模后第2天,电针组电针右侧足三里穴和环跳穴,共2周。取双侧腓肠肌称重,计算腓肠肌湿重比;HE染色测量肌纤维横截面积和直径;Western blotting检测大鼠骨骼肌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、70KD核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和磷酸化p70S6K (p-p70S6K)蛋白表达;实时定量聚合酶链反应检测大鼠骨骼肌中mTOR、p70S6K基因表达。结果与假手术组相比,模型组和电针组腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积及直径显著下降(P<0.001),电针组明显高于模型组(P<0.01)。与假手术组相比,模型组右侧腓肠肌mTOR、p-mTOR、p70S6K和p-p70S6K蛋白表达升高(P<0.01);电针组高于模型组(P<0.05)。与假手术组相比,模型组右侧腓肠肌mTOR、p70S6K基因表达升高(P<0.05);电针组高于模型组(P<0.05)。结论电针可延缓失神经骨骼肌萎缩,可能与激活mTOR/p70S6K信号通路,影响骨骼肌蛋白合成有关。

课程思政在推拿学专业课的实践探索

基于“立德树人、三全育人”的教育理念,从课程思政的时代背景出发,结合推拿学课程教学的特点,探索专业课程思政教育的实施途径。以《推拿学》课程颈椎病为教学案例,通过课程思政的必要性、教学内容及教学总结三方面进行探讨,努力打造一个有“知识高度、创新力度、思想温度”的高质量课堂,激发学生兴趣及潜能,培养学生绣花精神、大医精诚、职业道德感、文化自信,加强实践操作能力,使课程思政润物细无声地融入专业课教学,培养理想信念坚定、道德情操高尚、专业水平牢固的现代化推拿人才。

电针对快速衰老小鼠肝脏自噬及脂质代谢的影响

目的:研究电针对快衰老小鼠(SAMP8)肝脏中自噬相关因子LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7、P62表达的影响,探讨电针改善衰老小鼠肝脏脂质代谢的机制。方法:30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、药物组、电针组,每组7只,以同周龄抗快速老化SAMR1小鼠7只作为对照组。对照组和模型组动物常规饲养4周,不进行任何干预;药物组采用雷帕霉素按(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))腹腔注射干预(1次/日,连续每周6 d);电针组予双侧“肾俞”“太冲”穴电针治疗(15 min/次,1次/日,连续每周6 d)。检测小鼠的血清脂质代谢情况、肝脏脂质沉积情况、肝脏自噬体的分布、肝脏LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7、P62蛋白表达与mRNA表达的变化。结果:与对照组比较,模型组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)显著升高(P<0.01);模型组肝脏脂滴沉积明显,自噬体减少,自噬相关因子LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7蛋白及mRNA表达水平明显下降(P<0.01),P62蛋白及mRNA表达水平明显增高(P<0.01)。与模型组相比,电针组与药物组小鼠血清TG、TC、LDL含量明显降低(P<0.01);肝脏脂滴沉积减轻,自噬体增多,LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7的蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),P62蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01)。电针组肝脏Beclin1、Atg7蛋白及mRNA表达水平均与药物组无明显差异(P>0.05)。结论:电针能够减轻肝脏脂质代谢紊乱,可能与调节肝脏自噬相关因子LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7、P62的表达变化,从而促进SAMP8小鼠肝脏自噬有关。

电针调控SAMP8小鼠血脑屏障增强盐酸多奈哌齐对β-淀粉样蛋白的清除

目的:观察电针对快速老化(SAMP8)小鼠血脑屏障中β-淀粉样蛋白(Aβ)代谢途径相关因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)、P糖蛋白(Pgp)、紧密连接蛋白Claudin-5的调控,探讨电针加强盐酸多奈哌齐清除Aβ的机制。方法:30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、药物组、针药组,每组6只,以6只同周龄抗快速老化SAMR1小鼠作为对照组。药物组采用盐酸多奈哌齐灌胃,1.3 mg·kg^-1·d^-1,连续4周;针药组在药物组的基础上予"印堂""百会"穴电针治疗,每次15 min,频率2 Hz,电流1 mA,每日1次,每周6次,连续4周。运用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力及空间探索能力的变化;HE染色观察各组小鼠海马区神经元形态;实时荧光定量PCR法检测小鼠海马区MMP9、LRP-1、Pgp、Claudin-5、AβmRNA相对表达量。结果:与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.01),穿越原平台次数明显减少(P<0.01),海马神经元结构形态发生明显改变,MMP-9、AβmRNA表达水平明显增加(P<0.01),LRP-1、Pgp、Claudin-5 mRNA表达水平明显下降(P<0.01)。与模型组相比,药物组、针药组逃避潜伏期均明显缩短(P<0.01,P<0.05),穿越原平台次数明显增加(P<0.01),海马神经元细胞排列规则整齐、细胞层数明显增加,AβmRNA表达水平明显下降(P<0.01),LRP-1、Pgp mRNA表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01);针药组MMP-9 mRNA表达水平明显下降(P<0.01),Claudin-5 mRNA表达水平明显上调(P<0.01)。与药物组相比,针药组逃避潜伏期从第4天开始明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越原平台次数明显增高(P<0.01),海马神经元损伤减轻,MMP-9、AβmRNA表达水平明显下降(P<0.01),LRP-1、Pgp、Claudin-5 mRNA表达水平明显上调(P<0.01)。结论:电针可能通过下调MMP-9,上调LRP-1、Pgp、Claudin-5增强盐酸多奈哌齐对Aβ在血脑屏障中的转运,从而增强盐酸多奈哌齐治疗阿尔茨海默病的效果。

电针通过调控微小RNA对失神经肌萎缩大鼠肌卫星细胞增殖的影响

目的:观察电针干预对失神经肌萎缩大鼠腓肠肌中微小RNA-1(Mir-1)、微小RNA-133a(Mir-133a)、微小RNA-133b(Mir-133b)、配对盒转录因子Pax7、组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)表达的影响,探讨电针延缓失神经肌萎缩的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组8只。横断坐骨神经制备大鼠右后肢失神经肌萎缩模型。电针组电针大鼠患侧'足三里''环跳',每次10 min,每日1次,连续干预2周。电针干预结束后称取并计算各组大鼠的腓肠肌湿重比,HE染色后测定腓肠肌纤维横截面积,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠腓肠肌中Mir-1、Mir-133a、Mir-133b、HDAC4 mRNA、Pax7 mRNA的相对表达量。结果:造模2周后,模型组大鼠腓肠肌湿重比和肌纤维横截面积明显低于假手术组(P<0. 01);与模型组相比,电针组大鼠腓肠肌湿重比和肌纤维横截面积显著增加(P<0. 01)。与假手术组相比,模型组腓肠肌中Mir-1、Mir-133a相对表达量降低,HDAC4 mRNA和Mir-133b相对表达量升高(P<0. 05),Pax7mRNA相对表达量无明显变化(P>0. 05);电针组术侧腓肠肌中Pax7、HDAC4 mRNA相对表达量较模型组增加(P<0. 05),Mir-1、Mir-133a、Mir-133b相对表达量较模型组减少(P<0. 05)。结论:电针干预可能通过抑制失神经肌萎缩大鼠腓肠肌中Mir-1、Mir-133a、Mir-133b的表达,增加Pax7、HDAC4 mRNA的表达,促进失神经肌萎缩大鼠肌卫星细胞的增殖。

推拿联合跑台训练对急性骨骼肌损伤大鼠肌蛋白代谢相关因子的影响

目的:观察推拿、跑台训练及联合干预对急性骨骼肌损伤大鼠腓肠肌蛋白代谢信号通路相关分子雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化(p-)mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、p-p70S6K、Smad2/3、肌生成抑制素(MSTN)表达的影响,探讨骨骼肌修复的可能机制。方法:采用随机数字表法将30只雄性SD大鼠分为正常组、自然恢复组、推拿组、跑台组及联合组。通过打击器制备大鼠右后肢急性骨骼肌损伤动物模型。于造模24 h后推拿组予以患侧拇指揉法干预,跑台组予以跑台训练,联合组则予以推拿及跑台训练联合干预;各组大鼠每周干预5次,连续干预3周。于干预结束后进行行为学检测,分析各组大鼠步态并统计落入电网次数,采用HE染色测定腓肠肌纤维横截面积,采用免疫印迹法检测mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、Smad2/3蛋白相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测腓肠肌中MSTN mRNA相对表达量。结果:电网打击实验结果显示,推拿组、跑台组及联合组被打击次数均较自然恢复组明显减少(P<0.05)。推拿组、跑台组及联合组肌纤维横截面积、患侧腓肠肌湿重均较自然恢复组明显增加(P<0.05);且跑台组、联合组肌纤维横截面积亦较推拿组明显增大(P<0.05)。与正常组比较,自然恢复组、推拿组、跑台组及联合组mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白相对表达量均明显升高(P<0.05),Smad2/3蛋白相对表达量和MSTN mRNA相对表达量均明显降低(P<0.05);与自然恢复组比较,推拿组、跑台组及联合组mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白相对表达量均明显升高(P<0.05),Smad2/3蛋白相对表达量及MSTN mRNA相对表达量均明显减少(P<0.05);与推拿组比较,跑台组及联合组mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白相对表达量均明显增加(P<0.05),Smad2/3蛋白相对表达量及MSTN mRNA相对表达量均明显降低(P<0.05)。结论:早期推拿、跑台训练及联合干预均可能通过抑制Myostatin-Smad2/3信号通路,促进mTOR-p70S6K信号通路来增加急性骨骼肌损伤大鼠肌蛋白合成,促进肌肉肥大,改善损伤后腓肠肌结构及功能,且以跑台训练及跑台训练联合推拿干预的疗效较显著。

电针对衰老性肌萎缩小鼠腓肠肌中促血管生成和蛋白转运相关因子的影响

目的:观察电针对衰老性肌萎缩小鼠腓肠肌中促血管生成和蛋白转运相关因子的影响,探讨电针抗衰老性肌萎缩的潜在分子机制。方法:将14只30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组和电针组,每组7只,以7只同周龄抗快速衰老SAMR1小鼠为对照组。电针组小鼠予以1 mA、4 Hz的连续波电针干预双侧"足三里""阳陵泉",1次/d,每次20 min,每周6次,干预4周。应用力竭跑台实验检测小鼠运动功能;测量腓肠肌质量并计算与体质量的比值;HE染色法和透射电镜观察腓肠肌形态,并计算腓肠肌横截面积;Western blot法检测腓肠肌中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化(p)-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、p-p70S6K和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的相对表达量;实时荧光定量PCR法检测HIF-1α、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、肌肉环指蛋白1(MuRF1)、肌萎缩盒F蛋白(MAFbx)mRNA的相对表达量。结果:与对照组比较,模型组小鼠力竭跑台实验的跑步时间与跑步距离减少(P<0.01),体质量和腓肠肌质量减少(P<0.05,P<0.01),腓肠肌质量/体质量减小(P<0.01),腓肠肌细胞萎缩且横截面积变小(P<0.01),p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K和HIF-1α蛋白的相对表达量减少(P<0.01),HIF-1α和VEGF-A mRNA相对表达量减少(P<0.01),MuRF1、MAFbx mRNA相对表达量增加(P<0.01)。与模型组比较,电针干预后小鼠力竭跑台实验的跑步时间与跑步距离增加(P<0.05),腓肠肌质量和腓肠肌质量/体质量增加(P<0.05),腓肠肌萎缩程度减轻且横截面积增大(P<0.01),p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K和HIF-1α蛋白的相对表达量增加(P<0.01),HIF-1α和VEGF-A mRNA相对表达量增加(P<0.01),MuRF1、MAFbx mRNA相对表达量减少(P<0.01,P<0.05)。结论:电针可能通过调控腓肠肌促血管生成程序和蛋白转运,延缓小鼠衰老性肌萎缩。

电针对急性痛风性关节炎大鼠滑膜巨噬细胞M 1/M 2极化分型的影响

目的:观察电针对激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)以及对巨噬细胞从M 1促炎表型转换为M2抗炎表型的影响,探讨电针治疗急性痛风性关节炎的机制。方法:Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组、电针组,每组15只。大鼠左膝关节注射0.2mL尿酸钠晶体(MSU)混悬液制备急性痛风性关节炎模型。秋水仙碱组予秋水仙碱0.3 mg·kg^-1·d^-1灌胃;电针组电针左侧"足三里""三阴交",刺激10min,每日1次,连续7d。HE染色观察大鼠膝关节滑膜组织的病理形态;Western blot法检测大鼠膝关节滑膜组织磷酸化AMPK(p-AMPK)α蛋白表达水平;实时荧光定量PCR法检测大鼠膝关节滑膜组织中精氨酸酶-1(Arginase-1)、一氧化氮合酶(NOS)2、NOD样受体蛋白(NLRP)3、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量。结果:与空白组比较,模型组滑膜组织炎性浸润程度重,炎性细胞增多,p-AMPKα表达水平显著降低(P<0.01),Arginase-1、NOS 2、IL-1β和NLRP 3mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,秋水仙碱组滑膜组织炎性浸润程度较轻,炎性细胞较少,电针组次之;秋水仙碱组和电针组NOS 2、IL-1β和NLRP 3mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);秋水仙碱组和电针组p-AMPKα蛋白和Arginase-1mRNA表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05)。与秋水仙碱组比较,电针组Arginase-1mRNA表达水平显著减低(P<0.05)。结论:电针治疗急性痛风性关节炎可能与激活AMPK来上调Arginase-1的表达,下调NOS 2、IL-1β、NLRP 3的表达,促进巨噬细胞从M 1促炎表型转换为M 2抗炎表型,进而抑制MSU晶体诱导的炎性反应有关。

电针对脊髓损伤小鼠运动功能及炎性和氧化应激反应的影响

目的:观察电针对脊髓损伤(SCI)小鼠运动功能的影响,从抗炎及抗氧化方面探讨电针促进SCI小鼠功能修复的机制。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组及电针组,每组12只。采用钳夹法制备小鼠SCI模型。电针组于造模后3 h电针双侧"足三里""三阴交",每日1次,连续治疗7 d。采用Basso Mouse Scale(BMS)评分评估小鼠后肢运动功能变化;HE染色法观察脊髓损伤区病理形态学变化;Western blot法检测小鼠脊髓中载脂蛋白E(ApoE)及磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧化酶-1(HO-1)的表达;免疫荧光染色法检测脊髓中星形胶质细胞的增生程度。结果:造模后第7天,与假手术组比较,模型组小鼠的BMS评分显著下降(P<0. 05);脊髓组织结构紊乱,炎性浸润严重,正常神经元大量减少;脊髓中ApoE、p-NF-κB、IL-1β、p-ERK1/2、Nrf2、HO-1的表达显著升高(P<0. 05);星形胶质细胞数量显著增加(P<0. 05)。与模型组比较,电针组小鼠的BMS评分显著升高(P<0. 05);脊髓组织结构较完整,炎性浸润较轻,正常神经元较多;脊髓中p-NF-κB、IL-1β的表达显著降低(P<0. 05),ApoE、p-ERK1/2、Nrf2、HO-1显著升高(P<0. 05);星形胶质细胞数量显著减少(P<0. 05)。结论:电针能够显著改善SCI小鼠的炎性反应和氧化应激反应,抑制星形胶质细胞过度增生,从而促进脊髓功能的修复,其作用机制可能与上调脊髓中ApoE的表达,增强Nrf2/HO-1抗氧化途径和抑制NF-κB激活有关。

电针通过调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对衰老小鼠肝脏自噬与氧化应激的影响

目的:观察电针对衰老小鼠体力及肝脏AMP活化的蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)、Atg5、Atg7、Atg13和Beclin1表达的影响,探索其通过激活AMPK/mTOR/ULK1通路延缓衰老的机制。方法:将30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、雷帕霉素组、电针组、电针+抑制剂组,每组6只,以同周龄抗快速衰老SAMR1小鼠6只作为对照组。雷帕霉素组予以腹腔注射诱导自噬药物雷帕霉素(2 mg·kg^(-1)·d^(-1));电针组予以电针双侧"太冲""肾俞",每次15 min;电针+抑制剂组电针治疗前予以腹腔注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))。各组均每周干预6 d,连续2周。采用力竭游泳实验观察小鼠体力变化;HE染色法观察小鼠肝脏病理形态变化;Western blot法检测小鼠肝脏AMPK/mTOR/ULK1信号通路相关蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测小鼠肝脏自噬相关基因表达水平;免疫组织化学法观察小鼠肝脏血红素加氧酶1(HO-1)表达;羟胺法检测小鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与对照组比较,模型组小鼠力竭游泳时间明显缩短(P<0.01);肝脏AMPK、磷酸化(p)-AMPK、ULK1、p-ULK1蛋白及Atg5、Atg7、Atg13、Beclin1、ULK1 mRNA表达,肝脏HO-1阳性表达及SOD活性均明显下降(P<0.01);肝脏mTOR、p-mTOR蛋白表达及MDA含量升高(P<0.01)。与模型组比较,雷帕霉素组、电针组、电针+抑制剂组力竭游泳时间延长(P<0.01,P<0.05);AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1蛋白及Atg5、Atg7、Atg13、Beclin1、ULK1 mRNA表达,肝脏HO-1阳性表达及SOD活性上升(P<0.01,P<0.05);肝脏mTOR、p-mTOR蛋白表达及MDA含量下降(P<0.01,P<0.05)。与雷帕霉素组和电针组比较,电针+抑制剂组小鼠力竭游泳时间缩短(P<0.01),肝脏AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1蛋白及Atg5、Atg7、Atg13、Beclin1、ULK1 mRNA表达,肝脏HO-1阳性表达及SOD活性均明显下降(P<0.01);肝脏mTOR、p-mTOR蛋白表达及MDA含量明显升高(P<0.01)。模型组小鼠肝细胞排列散乱,细胞呈空泡样改变;雷帕霉素组、电针组肝细胞排列较整齐,细胞空泡减少;电针+抑制剂组肝组织病理形态改善不明显。结论:电针可通过调节自噬相关信号通路AMPK/mTOR/ULK1促进衰老小鼠肝脏自噬的发生,进而抑制其过度的氧化应激,可在一定程度上延缓机体衰老的过程。