马齿苋和乌梅复合物水煎液对兔离体小肠平滑肌运动的影响及其机制

为探究马齿苋和乌梅复合物水煎液(PCD)对家兔离体小肠平滑肌运动的影响,将马齿苋和乌梅制备成复合物水煎液,使用家兔离体小肠进行试验。利用激动剂乙酰胆碱(Ach)和氯化钡(BaCl_(2))诱导使标本痉挛性收缩,观察PCD对家兔离体小肠痉挛性收缩的作用;将无钙缓冲液与离体标本共孵育15 min,探究PCD对氯化钙(CaCl_(2))量效曲线的影响。结果显示:高浓度(终浓度≥4.624 g/L)的PCD能够显著抑制标本的自发收缩运动(P<0.05),且呈剂量依赖性;PCD显著抑制了Ach和BaCl_(2)诱导的小肠痉挛性收缩(P<0.05),并使CaCl_(2)量效曲线下降;PCD抑制离体小肠收缩的机制可能与抑制平滑肌细胞外Ca2+内流有关。

东胜区高标准农田建设项目促进农业产业化发展路径初探

高标准农田建设项目和农业产业化发展项目是作用完全不同的两类项目。从表面上看,高标准农田建设项目和产业化发展项目两者没有必然联系,然而,这两类项目除了各自发展目的与建设内容不同之外,共同目标都是促进农业增效、农民增收、改善农村生产、生活条件。实施农业产业化发展项目的龙头企业,如何与高标准农田建设有机结合,达到增强自身实力,带动地方产业发展,促进一二三产融合发展,是“三农”工作者新时期共同关注的问题。

1α羟化酶的真核表达和生物信息学特征及其在成年肉鸡组织中的差异表达

旨在构建1羟化酶(CYP27C1)真核表达载体,在293T细胞中重组表达CYP27C1-mycHis,探究cyp27c1基因在成年鸡不同组织中的表达水平,明确1α-羟化酶三级结构特征、与底物识别和活性中心底物结合相关的关键氨基酸。将合成的cyp27c1的开放阅读框(ORF)插入pMD18-T质粒,并将该质粒命名为pMD-cyp27c1。以改造后的质粒为模板,通过PCR扩增cyp27c1 ORF,将其插入pcDNA^(TM)3.1,构建真核表达载体pcDNA-cyp27c1。然后分别用pcDNA-cyp27c1及空载体pcDNA瞬时转染293T细胞,48 h后收集细胞,提取线粒体,用Bradford法测定蛋白质的质量浓度。1μg线粒体用于12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,以myc抗体作为一抗检测重组CYP27C1在293T细胞中的表达水平。利用实时荧光定量PCR检测cyp27c1在成年鸡组织中的表达水平。通过生物信息学分析CYP27C1的理化特性,并预测其亚细胞定位,利用同源建模、多序列同源比对和分子对接法研究CYP27C1的空间结构特征以及与底物(25-OH D_(3))结合和识别相关的关键氨基酸。测序结果显示,1608 bp编码区插入到pcDNA^(TM)3.1,并成功在其3′端融合了载体表达标签myc-His。在重组表达CYP27C1-mycHis的293T细胞线粒体中检测到相对分子质量为58000的特异性条带。实时荧光定量PCR结果表明,cyp27c1基因在鸡肝、肾、胸肌、腿肌、小肠、胸腺、脾、肾上腺、睾丸、卵巢等组织中均有表达,并且相对表达量存在组织差异性。cyp27c1基因编码1个由536个氨基酸组成的细胞色素P450,亚细胞定位于线粒体上,成熟蛋白质N-末端起始于V62。同源建模结果显示,CYP27C1中α螺旋、β折叠的氨基酸数量分别占蛋白质中总氨基酸数量的49.15%、5.90%,具有与其他线粒体细胞色素P450相似的开放式三级结构。多序列比对和分子对接结果表明,C482、R135与血红素形成较强的氢键;A136、K83是与25-OH D_(3)识别的关键氨基酸;活性中心L343、D347是与25-OH D_(3)结合的关键氨基酸。本研究成功构建了CYP27C1真核表达载体,并在293T细胞中超表达CYP27C1,确定了CYP27C1的三级结构和与底物识别及结合相关的关键氨基酸,为后续深入研究CYP27C1结构、功能和催化机制提供了基础。

浅谈我国足球职业化背景分析

中国的职业化,中国体制改革过程当中,中国体制进程的转变和中国政治经济生态环境的变化是紧密联系在一起的。我国大球项目推进职业化受时代背景和中国体制的限制,并且通过分析得出中日韩在推进足球职业化的模式相近,均受国家目标的制约和限制,不同于欧洲和美国自发的职业化模式。