区分NZB/WF1狼疮鼠不同体质的实验研究

目的检测划分NZB/WF1狼疮鼠体质,将其分为寒、常、热3种体质,并证实这些体质差异的客观存在。方法采用上海中医药大学实验中医学教研室方肇勤教授课题组建立的"实验小鼠四诊工作站",检测158只NZB/WF1小鼠体重、腋温、心率、小鼠35s活动度、爪尾色泽(r值)等指标,根据公式:权重总值=爪校正值×1+尾校正值×0.2+腋温校正值×0.7+心率校正值×0.05+跨格数×0.025计算总权重,根据"总权重值高,体质越热;总权重值低,体质越寒"的原则将NZB/WF1小鼠划分为寒体、常体和热体3种体质小鼠。分别检测不同体质小鼠肾组织羟脯氨酸含量、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因表达差异和肾组织免疫荧光染色情况。结果在158只NZB/WF1小鼠中,共分出热体小鼠33只,寒体小鼠34只,常体小鼠91只。常体和寒体小鼠的肾组织羟脯氨酸含量高于热体组(P<0.01),而常体和寒体间比较,差异无统计学意义。寒体及热体小鼠CTGF基因表达量显著高于常体小鼠(P<0.05),寒体与热体间比较,差异无统计学意义。寒体小鼠TGF-β1基因表达量低于常体及热体小鼠,但差异无统计学意义。不同体质小鼠肾组织免疫荧光染色也存在一定的差异。结论 NZB/WF1狼疮鼠存在体质差别。

益气破瘀法对狼疮鼠血清IL-10与IFN-γ及肾脏病理的影响

目的:观察益气破瘀法对NZB/WF1狼疮鼠的疗效,并探讨其作用机制。方法:将NZB/WF1小鼠随机分为模型组、中药组、西药组与中西医结合组。分别以生理盐水、益气破瘀小复方和骁悉对其进行干预治疗。以双抗夹心ELISA法检测血清IL-10、IFN-γ水平,肾组织行常规HE染色。结果:中药组、西药组、中西医结合组与模型组相比,血清IL-10、IFN-γ均有显著降低(P<0.01);各治疗组之间比较未见差异显著(P>0.05)。HE染色显示,中药组、西药组、中西医结合组肾脏病变与模型组相比,系膜细胞增生、系膜基质增宽等情况较轻,内皮下免疫复合物沉积较少,其中以中西医结合组病变最轻。结论:益气破瘀法能明显降低狼疮鼠血清IL-10、IFN-γ水平,延缓肾脏损害。采用中西医结合治疗的效果优于单用中药和单用西药。

益气利水破血解毒小复方对NZB/WF1狼疮鼠肾脏水通道蛋白干预作用的研究

目的:探索益气利水破血解毒小复方干预对NZB/W F1狼疮鼠肾脏水通道蛋白AQP1和AQP3表达的影响,帮助进一步了解其作用机制和靶点。方法:将NZB/W F1狼疮鼠随机分为对照组(0.5ml/d生理盐水灌胃)、中药治疗组(益气利水破血解毒小复方0.5ml/d灌胃)和西药治疗组(骁悉水溶液0.5ml/d灌胃),分别于干预第0、2、4、6周留取尿液样本检测尿蛋白水平,干预8周后处死小鼠行肾脏免疫组化,半定量分析AQPl、AQP3表达水平。结果:中药组和西药组小鼠尿蛋白定量均明显低于对照组(P<0.01),两治疗组间未见统计差异(P>0.05);中药组和西药组小鼠肾组织AQP1表达量显著高于对照组(P<0.01),西药组AQP1表达量高于中药二组间存在统计学差异(p<0.05)。与对照组相比,中药组和西药组小鼠肾组织AQP3表达量显著较高,有统计学差异(p<0.01),西药组与中药组小鼠肾组织AQP3表达量未见统计学差异(p>0.05)。结论:益气利水破血解毒小复方干预可有效降低NZB/WF1狼疮鼠尿蛋白水平,并加强肾脏水通道蛋白AQP1和AQP3的表达。

活血化瘀小复方对大鼠佐剂性关节炎影响的实验研究

目的:探讨活血化瘀小复方对佐剂关节炎(AA)大鼠炎性反应的抑制情况。方法:以SD大鼠为研究对象,共72只,随机选取10只为空白对照组,其余用弗氏完全佐剂造RA模型,造模后8d随机分出10只为预防组开始灌服活血化瘀小复方;造模成功后,随机分为中药组、雷公藤组、雷公藤加中药组、模型对照组,分别灌服相应药物干预。以排水法测量大鼠足体积;造模第54d,处死动物,取血检测血流变,纤维蛋白原等指标。结果:预防组抑制大鼠左后足(造模致炎侧)肿胀优于其它治疗组(P<0.05),其它各治疗组之间无差异;对大鼠右后足(对侧)肿胀的抑制,各治疗组组间无差异;使用活血化瘀小复方的三组在降低大鼠血清纤维蛋白原,改善血流变水平方面优于雷公藤组(P<0.05)。结论:活血化瘀小复方能抑制模型大鼠足肿胀;抑制局部炎性反应。

益气破血解毒小复方对NZB/WF1狼疮鼠淋巴细胞IFN-γ、IL-10基因表达影响的初步研究

目的:运用Real time PCR技术观察益气破血解毒小复方干预对NZB/WF1狼疮鼠脾淋巴细胞IFN-γ、IL-10基因表达的影响。方法:58只5月龄雌性NZB/WF1狼疮鼠随机分配至3组:空白组20只、中药组20只和西药组18只。空白组灌胃无菌生理盐水0.5ml/d,中药组灌胃益气破血解毒小复方0.5ml/d,西药组灌胃骁悉溶液0.5ml/d,中药组灌胃益气破血解毒小复方0.5ml/d,西药组灌胃骁悉溶液0.5ml/d(浓度1.3mg/ml),干预时间为60天。无菌条件下取出小鼠脾脏,机械分离、梯度离心法分离淋巴细胞。恒温培养72h后收获细胞,抽提总RNA,用Real time PCR法行IFN-γ、IL-10基因表达检测。结果:空白组的IFN-γ基因表达量显著高于西药组(P<0.01),而与中药组间无统计学差异(P>0.05)。空白组IL-10基因表达量显著高于中药组(P<0.05)和西药组(P<0.05),两治疗组间未见统计学差异(P>0.05)。

益气解毒活血方对NZB/W F1狼疮鼠肾炎肾纤维化的干预作用

目的:观察益气解毒活血方对NZB/W F1狼疮鼠肾炎肾纤维化的干预作用,并探讨其可能的作用机制。方法:随机将5月龄狼疮鼠分为空白对照组(空白组)、益气解毒活血小复方治疗组(中药组)、骁悉治疗组(西药组)、益气解毒活血小复方+骁悉治疗组(中西组)。持续干预治疗8周,并分别于实验第0、2、4、6周收集狼疮鼠24 h尿液进行蛋白定量检测,干预结束后观察不同组别狼疮鼠肾脏病理、肾脏羟脯氨酸(Hyp)含量及肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达情况。结果:不同治疗组均对NZB/W F1狼疮鼠24 h尿蛋白定量、肾脏Hyp含量、肾脏病理、肾组织TGF-β_1与CTGF mRNA表达有改善作用,但各治疗组之间比较无统计学差异;而肾脏病理显示益气解毒活血小复方+骁悉治疗组肾脏病变程度最轻。结论:益气解毒活血方具备降低NZB/W F1狼疮鼠蛋白尿,改善肾纤维化作用,其机制可能与下调致纤维化因子TGF-β_1、CTGF mRNA表达相关。