新生大鼠皮层神经元体外无血清原代培养

目的探讨建立较为简便的新生大鼠皮层神经元细胞体外无血清原代培养方法。方法取新生大鼠(24h)大脑皮层组织,消化后种植在有多聚-L-赖氨酸包被的六孔培养板中,以含10%胎牛血清DEME-HG培养液种植,4～8h后换用含B27的Neurobasal培养基维持饲养。于不同时间在倒置相差显微镜下观察形态变化,分别采用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学对神经元特异性标记物神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因及蛋白进行鉴定。结果 2～8h神经元细胞贴壁,随着时间延长,形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间相互接触形成网络,培养7～10d神经元胞体最为丰满,通过RT-PCR、Western blot和免疫组织化学证明所分离培养的是神经元细胞。结论该方法简单易行,神经元纯度较高,可作为神经元体外培养的良好模型用于以后的研究。

新生大鼠皮层神经元原代培养及糖-氧剥夺损伤模型的建立

目的:建立较为简便的新生大鼠皮层神经元细胞原代培养方法并建立糖-氧剥夺细胞损伤模型。方法取新生的大鼠(24 h)大脑皮层组织,消化后种植在多聚-L-赖氨酸包被的六孔培养皿上,用含10%胎牛血清DEME-HG液种植,4~8 h后换再用含有B27的Neurobasal培养基维持饲养。于不同时间点在倒置相差显微镜下观察形态变化,用免疫组化方法对神经元特异性标记物NSE染色鉴定。选取培养第7 d的神经元随机分为不作处理的对照组和过糖-氧剥夺建立细胞损伤模型组,Western blotting检测NSE蛋白表达。结果2~8 h神经元细胞贴壁,随着时间的延长,形态呈多变,突起逐渐增多,神经元突起间相互接触形成网络,培养7~10 d时神经元胞体最为丰满,通过免疫组化验证证明所分离培养的是神经元细胞。糖-氧剥夺细胞损伤模型组NSE蛋白表达量较对照组 NSE蛋白表达量明显降低。结论该神经元方法简单易行,神经元纯度较高,并成功的建立糖-氧剥夺神经元损伤模型。

Neuritin蛋白在脑损伤组织中的时相性表达及意义

目的:检测神经突蛋白(neuritin)在大鼠创伤性脑损伤组织中的时相性表达,探讨其在脑损伤后的意义。方法:42只SD大鼠分为正常组、对照组和实验组,改良Feeney法建立大鼠脑损伤模型,术后分6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d共6个亚组。免疫组化、Western-blot检测脑损伤组织中neuritin蛋白表达。结果:免疫组化:实验组neuritin蛋白6 h呈阳性表达,12 h^7 d呈强阳性,明显高于对照组与正常组,14 d呈弱阳性表达。Western-blot:实验组neuritin蛋白6 h稍增高,24 h达高峰,持续到7 d,与对照组、正常组比较差异均有统计学差异(P<0.01),14 d明显降低,较正常组差异仍有统计学意义(P<0.05)。结论:Neuritin蛋白在脑损伤组织中表达明显增高,可能在脑损伤后起着重要作用。

经外侧裂-岛叶入路显微手术治疗高血压脑出血的临床分析

目的 探讨经外侧裂-岛叶入路显微手术治疗高血压脑出血的方法及效果。方法 对66例高血压脑出血采取经外侧裂-岛叶入路显微手术清除血肿(显微手术组),并与同期61例行传统骨瓣开颅治疗(常规骨瓣组)的高血压脑出血患者的临床疗效进行对比。结果 两组患者的术后昏迷时间分别为(7.4±6.2)d和(11.5±8.4)d,术后3d复查血肿的清除率分别为(87.9±3.1)%和(64.2±3.8)%,显微手术组明显优于常规骨瓣组(P<0.05);术后3个月进行随访,显微手术组与常规骨瓣组的预后良好率分别为72.72%和47.54%,差异具有显著性(P<0.05)。结论 经外侧裂-岛叶入路显微手术治疗高血压脑出血具有手术时间短、对脑组织的破坏轻、手术视野暴露满意、血肿清除彻底、止血可靠、患者预后好等优点,值得临床上推广。

氧-糖剥夺致皮层神经元一氧化氮的变化及对Caspase-3的影响

目的观察氧-糖剥夺致皮层神经元一氧化氮(NO)的变化及对Caspase-3的影响。方法体外原代培养神经元,选取培养7d的神经元随机分为3组:正常对照组(A组),氧-糖剥夺损伤组(B组),细胞损伤+L-N-硝基精氨酸甲脂(L-NAME)干预组(C组)。采用硝酸还原法检测各组培养液中NO的含量,Western blot检测Caspase-3、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)蛋白表达,半定量RT-PCR检测Caspase-3mRNA表达。结果 B组培养液中NO的含量为(1.77±0.17)μmoL/L,与A组(0.93±0.15)μmoL/L和C组(0.99±0.10)μmol/L比较差异有统计学意义(均P<0.05);同时,B组的Caspase-3蛋白和mRNA表达明显高于A组和C组,B组的NSE蛋白表达明显低于A组和C组。结论氧-糖剥夺可导致皮层神经元NO产生过量,并造成神经元的损伤;L-NAME能减少NO的产生,从而减弱氧-糖剥夺导致皮层神经元损伤。

阶梯式颅内减压技术在急性重型颅脑损伤治疗中的应用效果及可行性分析

目的:研究阶梯式颅内减压技术在急性重型颅脑损伤治疗中的应用效果及可行性。方法:本次研究对象为急性重型颅脑损伤患者74例,根据患者对治疗方法的选择进行分组,对照组37例接受传统减压术治疗,观察组37例实施阶梯式颅内减压技术治疗。将两组的围术期相关指标、颅内压、并发症发生情况、预后情况进行比对。结果:观察组患者的术中出血量、甘露醇使用量少于对照组,手术时间、住院时间短于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的颅内压水平、并发症发生率均低于对照组,恢复良好率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在急性重型颅脑损伤患者治疗中应用阶梯式颅内减压技术的效果确切,可有效控制颅内压,减少并发症的发生,预后效果更加理想,具有较高的可行性和临床应用价值。

小骨窗微创手术治疗脑出血的效果分析

目的分析脑出血病人行小骨窗微创手术治疗的效果。方法回顾我院2017年1月—2020年5月的80例脑出血病人的收治情况,按照治疗差异分组,对比两组的手术指标、恢复效果以及并发症。结果观察组手术时长(93.54±14.37)min,出血量(65.76±5.24)mL,住院时间(12.13±1.42)d,数据优于对照组,P<0.05,t=11.1452/29.7471/9.4460;观察组治疗后GCS(13.55±0.37)分,NIHSS(8.37±2.38)分,BI指数(81.05±3.16)分,数据优于对照组,P<0.05,t=14.6969/4.9751/9.3890;观察组(5%)并发症数据低于对照组(20%),P<0.05,χ2=4.114。结论脑出血病人行小骨窗微创手术治疗效果好,预后佳。

18β-甘草次酸治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的实验研究

目的 探讨缝隙连接阻断剂18β-甘草次酸对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的治疗作用.方法 120只SD大鼠随机数字表法分对照组、假手术组、手术组及治疗组各30只,且各组分第1,3,5,7,14天5亚组,各亚组6只.视交叉前池二次注血法建立Sprague Dawley大鼠蛛网膜下腔出血动物模型,HE染色鉴定模型,大鼠神经行为学评分、Western blot检测脑血管Cx43表达及全细胞膜片钳技术观察缝隙连接通道电导率变化.结果 神经行为学评分显示,手术组第3,5,7,14天明显下降,分别为（8.33±0.38）分,（6.67±0.20）分,（4.83±0.31）分,（9.33±0.51）分,与对照组、假手术组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,不同时间点间比较差异有统计学意义（P＜0.01）,治疗组第3,5,7,14天分别为（10.00±0.65）分,（10.17±0.66）分,（9.83±0.61）分,（10.67±0.70）分,与手术组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；Cx43蛋白表达结果显示,手术组第1,3,5,7,14天明显升高,分别为（0.289±0.01）％,（0.389±0.008）％,（0.510±0.006）％,（0.651±0.019）％,（0.329±0.151）％,与对照组、假手术组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,不同时间点间比较差异有统计学意义（P＜0.01）,治疗组第1,3,5,7,14天分别为（0.225±0.007）％,（0.228±0.01）％,（0.251±0.02）％,（0.303±0.008）％,（0.267±0.008）％,与手术组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；电导率记录结果,手术组第1,3,5,7,14天明显升高,分别为（3.07±0.19） nS/m,（4.88±0.34） nS/m,（8.20±0.31） nS/m,（11.94±0.22） nS/m,（4.07±0.22） nS/m与对照组、假手术组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,不同时间点间比较差异有统计学意义（P＜0.01）,治疗组第1,3,5,7,14天分别为（1.38±0.16） nS/m,（1.64±0.15）nS/m,（2.26±0.21） nS/m,（2.89±0.85） nS/m,（2.11±0.20） nS/m,与手术组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 缝隙连接阻断剂18β-甘草次酸可明显缓解蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的发生,缝隙连接在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的病理机制中起着重要作用.