应用iTRAQ技术对滩羊裘皮差异表达蛋白的研究

为了研究与滩羊羊毛纤维粗细及弯曲度和特定花穗构成相关的差异蛋白,试验应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白质组学方法,联合多维液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术对滩羊、内蒙古苏尼特羊、中卫山羊和新吉细毛羊的羊皮肤蛋白进行鉴定和筛选,并应用Proteome Discoverer 1.4软件进行定量分析,结合数据库搜索,鉴定出差异蛋白;最后应用生物信息学技术对差异蛋白进行GO分析和Pathway分析。4种羊皮肤中共鉴定到1 161个蛋白,其中内蒙古苏尼特羊与滩羊比对发现30个差异蛋白,中卫山羊与滩羊比对发现112个差异蛋白,新吉细毛羊与滩羊比对发现107个差异蛋白,对各比对组的皮肤差异蛋白进行分析,发现14-3-3蛋白σ亚型、KRT25、KRT34、KRT85、TCHH、KAP6和KAP11.1可能与滩羊羊毛纤维粗细及弯曲度和特定花穗形状的形成有关。本研究可为滩羊优质二毛裘皮选育研究提供科学依据。

一周岁内滩羊皮肤差异表达蛋白研究

为研究一周岁内滩羊皮肤中的差异表达蛋白,本试验利用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离了滩羊不同生长阶段皮肤蛋白,经考马斯亮蓝染色,用PDQuest 8.0软件检测并分析差异蛋白点,并经MALDITOF/TOF-MS/MS鉴定。对4个生长时期的蛋白图谱进行两两比对,共发现了19个差异蛋白点,质谱成功鉴定出15个蛋白点共13种蛋白,可能与滩羊皮肤生长调控有关的蛋白有14-3-3蛋白σ亚型(14-3-3protein sigma)、膜联蛋白A2(annexin A2)、角蛋白25(keratin 25)、微管蛋白α链(tubulin alpha chain)。对差异表达蛋白进行分析,发现这些差异表达蛋白可能与滩羊皮肤不同生长阶段的毛囊周期性变化有关。一周岁内滩羊皮肤差异蛋白的发现为滩羊皮肤的年变化规律研究奠定理论基础。

月桂酰氯修饰羊血超氧化物歧化酶工艺优化及酶学性质

以羊血为材料获得超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)酶液,采用月桂酰氯修饰SOD,在修饰温度、修饰时间、月桂酰氯添加量和丙酮添加量的单因素试验基础上,通过正交试验优化工艺参数,并比较修饰酶与天然酶的酶学性质。结果表明:10 mL酶比活力为4 348.6 U/mg的SOD样液在修饰温度60℃、修饰时间30 min、月桂酰氯用量0.1 mL、丙酮添加量为酶液体积的1.5倍条件下充分反应,所得修饰酶活力最强;修饰酶热稳定性、pH值耐受性、半衰期等均优于天然酶。月桂酰氯可用于修饰性能较优的羊血超氧化物歧化酶。

滩羊羊毛蛋白质双向电泳图谱体系的建立及优化

为建立宁夏滩羊羊毛蛋白质双向电泳体系,比较分析了滩羊羊毛蛋白质不同上样量、不同pH值范围的IPG胶条以及聚焦参数对羊毛蛋白质双向电泳的影响。结果表明:使用TCA/丙酮沉淀法对羊毛蛋白进行处理,上样量600μg,选择pH值为4~7的IPG胶条,聚焦时间90 000 Vhr,12%SDS-PAGE凝胶进行双向电泳,经考马斯亮蓝染色,用Images-Scanner扫描,所得到的滩羊羊毛较清晰的2-DE图谱较好,为后续滩羊羊毛的差异蛋白质组学研究建立了条件。

奶牛妊娠黄体蛋白组学研究

为了研究奶牛黄体的形成及退化过程的相关机理,并进一步探究更加准确的妊娠及相关生理过程的蛋白标记物,试验采用蛋白质组学经典的二维凝胶电泳(2-DE)技术检测和分析妊娠前后黄体组织间的差异蛋白,使用PDQuest8.0软件检测,取差异蛋白点进行分析,并经MALDI TOF/TOFMS/MS检测。结果表明:6种差异蛋白分别为26s蛋白酶体蛋白、纤维蛋白、DNA拓扑异构酶蛋白、核纤层蛋白、硫氧还原蛋白、微管蛋白。对这6种蛋白在组织间的表达差异进行分析,发现这些蛋白可能与黄体形成和黄体退化及黄体激素分泌有关。

应用iTRAQ技术分析滩羊二毛期不同花穗型裘皮差异蛋白

为了解二毛期时滩羊串子花型裘皮与其它类型裘皮中蛋白质的差异,本试验采用iTRAQ技术及LC-MS/MS蛋白质组学研究方法,对串子花型、软大花型、绿豆丝型及其它不规则型花穗裘皮蛋白质进行鉴定和筛选,并运用Proteome Discoverer l.4软件进行定量分析,结合数据库搜索,鉴定出具有显著表达差异的蛋白,同时应用生物学技术对其进行GO和Pathway分析。结果显示4类花穗型裘皮共检测出2 886个蛋白,其中有135个、142个、113个差异蛋白分别存在于软大花型与串子花型、绿豆丝型与串子花型、其它不规则型与串子花型3个对比组中。对有表达差异的蛋白进行分析,发现膜联蛋白与血管内皮生长因子可能与软大花型毛股形成相关,KAP3和KAP6可能与滩羊串子花型毛股结构相关。研究发现滩羊不同二毛裘皮蛋白水平上的差异,可为选育优良的滩羊串子花型二毛裘皮提供理论基础。