稳定表达重组小鼠FAPα蛋白细胞株的构建

采用RT-PCR方法从BALB/c胚鼠成纤维细胞克隆FAPα基因,将其连接至表达载体pTd-FL-N,转化Stbl3感受态。筛选重组质粒,经酶切、PCR检测及测序鉴定,证实表达质粒构建正确。将表达载体转染HEK293细胞,经G418筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot技术证实稳定表达FAPα细胞株构建成功。通过流式细胞术确定FAPα蛋白可定位表达于细胞膜上。

论性别意识对实现男女平等的影响及解决途径

实现男女平等基本国策,不仅要从法律和公共政策层面构建保障男女平等的运行机制,而且更应把推进社会性别意识主流化,消除非制度性性别歧视观念和性别歧视行为作为实现男女平等基本国策的重要环节,着力提高全社会性别意识主流化程度。文章通过分析社会性别意识产生的历史原因和发展趋势、现实社会中人们对性别意识存在的偏差及其表现形式和影响,提出提高社会性别意识主流化程度的基本对策。

川芎改善非酒精性脂肪性肝炎的作用机制

目的:通过网络药理学与分子对接技术探讨川芎改善非酒精性脂肪肝炎(NASH)的作用机制,并通过动物模型进一步检测其改善作用。方法:通过中药系统药理数据库及分析平台(TCMSP)收集川芎的候选化合物,利用Swiss Target Prediction数据库预测成分靶点,DisGenet数据库预测疾病靶点,挑选共有靶点并利用STRING数据库对川芎改善NASH的核心靶点进行PPI蛋白互作分析。此外,利用Metascape分析系统对川芎改善NASH的核心靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,用Cytoscape软件构建可视化网络,使用AutoDock软件进行分子对接验证。通过小鼠NASH模型进行药效学确证。结果:共获得5个有效化合物和39个潜在的核心治疗靶点。网络分析结果5个有效化合物谷甾醇、杨梅酮、亚油酸乙酯、川芎萘呋内酯、阿魏酸是川芎改善NASH的有效成分,核心基因包括EGFR、ESR1、PPARG、MAPK14、PPARA等。GO富集分析结果发现炎症反应与脂质代谢、核受体和蛋白酶激活、脂肪酸绑定、脂质转运活性等相关。KEGG通路富集结果显示,川芎治疗NASH与众多通路有关,可能通过调节PPAR信号通路、AMPK信号通路、cAMP信号通路、Wnt信号通路等发挥作用。分子对接研究显示,谷甾醇、杨梅酮、川芎萘呋内酯是起主要作用的成分,PPARA和PPARG可能是川芎作用最紧密的靶点。动物实验结果表明,川芎提取物治疗组较NASH模型组血清ALT、AST及肝脏组织TG均有明显改善作用(P<0.05),并明显减轻小鼠肝小叶脂肪变程度。结论:川芎可能通过作用于PPARA和PPARG等核心基因、PPAR等信号通路发挥改善NASH的作用,并通过动物实验验证,川芎可以改善高脂饮食所致的非酒精性脂肪性肝病小鼠的肝功能异常,并减轻小鼠肝小叶脂肪变程度。

成纤维激活蛋白α在不同实体瘤组织的表达及其与病理分级和淋巴结转移的相关性

目的观察人实体瘤组织成纤维激活蛋白α(FAPα)蛋白表达与肿瘤发生发展的关系。方法收集55例经手术切除的不同来源实体瘤组织和10例良性肿瘤组织病理标本,用免疫组织化学方法检测其中FAPα的表达,分析其与临床病例参数的关系并比较2种肿瘤组织的差异。结果实体瘤组织与良性肿瘤的FAPα表达率差异有统计学意义(P<0.001);组织中有无淋巴结转移对FAPα强阳性表达差异有统计学意义(P<0.05);病理分级的级别越高,肿瘤组织中FAPα的表达越强(I级vs IV级,P<0.05);不同临床分期的肿瘤组织中FAPα表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 FAPα在乳腺癌等多种实体瘤组织中存在阳性表达,且其表达水平与病例的病理分级及淋巴结转移密切相关。

成纤维细胞激活蛋白α与肿瘤微环境的免疫抑制

成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)是肿瘤微环境中特异性表达于肿瘤相关成纤维细胞(TAF)表面的抗原分子,属丝氨酸蛋白酶家族Ⅱ型膜整合糖蛋白,具有二肽酶和胶原酶活性,对肿瘤微环境的免疫抑制和肿瘤浸润转移有重要作用。因此,FAPα已被视为理想的肿瘤治疗靶标。本文综述了FAPα阳性细胞对肿瘤微环境免疫抑制状态的形成及靶向FAPα治疗的研究。