坚定“四个自信”在实验诊断学课程思政中的实践与探讨

《实验诊断学》是为临床疾病的诊断、治疗、预防、预后和健康评估提供及时、准确的检验报告结果的学科,是每名医学生的必修课程。文章结合笔者的教学实践,以具体生动的案例探讨如何在实验诊断学教学过程中引入和实践“四个自信”,如何进行实验诊断学课程思政的教学评价,使医学生形成对中国特色社会主义的正确认知,增强医学生的高度认同感,树立坚定的理想信念,激发医学生的创新潜能,从而达到价值塑造、知识传授、能力提升为一体的教学目标,并为实验诊断学专业教师提供参考,以提高实验诊断学教学质量,完善实验诊断学“课程思政”教学体系。

TGF-β1基因多态性对乙肝肝纤维化的影响

目的:探讨TGFβ1基因-509C>T多态性与乙肝肝纤维化的关系及其对血浆TGF-β1浓度的影响。方法:应用ARMS-PCR结合测序的方法,测定92例健康对照组和93例乙肝患者(肝纤维化组)TGF-β1基因-509位点的单核苷酸多态性,并确定其基因型和等位基因频率的分布;ELISA法检测血浆中TGF-β1和Ⅳ型胶原的浓度,放射免疫法检测血浆中透明质酸和Ⅲ型前胶原N端肽的浓度。结果:TGF-β1-509位点基因型及等位基因分布频率在肝纤维化组和正常对照组中并无显著差异,-509CC基因型在肝纤维化程度比较高的Child-Pugh C级组中的分布频率明显高于TT基因型(P<0.05)。肝纤维化组中的血浆TGF-β1、Ⅳ型胶原、透明质酸及Ⅲ型前胶原N端肽的浓度显著高于对照组(P<0.05)。在对照组中,血浆TGFβ1浓度在-509位点两种基因型之间并无明显差别;而在肝纤维化组中,-509CC基因型者血浆TGF-β1浓度显著高于TT基因型者(P<0.01)。结论:TGF-β1基因-509C>T多态性与肝纤维化的发生没有密切关系,但与肝纤维化的进展程度相关;该多态性影响肝纤维化患者血浆中TGF-β1的浓度。

强直性脊柱炎患者血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的表达及其临床意义

目的:探讨血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)在强直性脊柱炎(AS)患者、类风湿性关节炎(RA)患者及健康对照间的表达差异及其临床意义。方法:60例AS患者按HLA-B27抗原测定结果分为阳性38例,阴性22例;按Bath活动指标分为活动组41例,非活动组19例;另设20例RA患者和30例健康体检者作为对照。应用ELISA法检测上述研究对象血清sTRAIL的浓度,应用ESR自动化分析仪和特定蛋白分析仪测定红细胞沉降率(ESR)和血清C反应蛋白(CRP)含量。结果:HLA-B27阳性和阴性AS患者血清sTRAIL无统计学差异,均明显高于RA组和健康对照组(P<0.01);活动组AS患者血清sTRAIL水平明显高于非活动组(P<0.01);HLA-B27阳性AS患者血清sTRAIL水平与CRP呈明显相关(r=0.609,P=0.000),而阴性患者无显著相关;HLA-B27阳性和阴性AS患者血清sTRAIL与ESR均无明显相关。结论:血清sTRAIL水平在AS中明显上调,且与HLA-B27状态无关,但AS患者血清sTRAIL与CRP的相关性受HLA-B27状态的影响。

Toll样受体4在强直性脊柱炎患者外周血白细胞中的表达及临床意义初探

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)在不同人群外周血白细胞的差异表达及其在强直性脊柱炎(ankylo-sing spondylitis,AS)中的意义。方法应用流式细胞术检测60例AS患者及40例健康对照外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞TLR4的表达。结果TLR4在外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞均有表达,以单核细胞表达为主;HLA-B27阳性和阴性AS患者外周血3种细胞TLR4的阳性表达率均明显高于对照组(P<0.001),但两者之间并无显著差异。结论TLR4主要表达于外周血单核细胞,但AS患者外周血3种细胞表达均上调,这种上调与HLA-B27阳性与否无关,提示TLR4信号通路的异常与AS的发病相关。

转化生长因子-β1基因多态性与乙型肝炎后肝硬化的关系研究

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)基因转录调控区单核苷酸多态性与乙肝后肝硬化的关系。方法应用ARMS PCR结合测序的方法,检测92例健康人和93例肝硬化患者TGFβ1基因调控区单核苷酸多态性,确定其基因型和等位基因频率分布。结果TGFβ1基因800和988位点在本研究中不存在碱基A的形式,而对于509位点,肝硬化组与对照组TGFβ1的基因型及等位基因频率分布的差异并无显著性。把肝硬化组按Child Pugh分级分为A、B、C3级后,C级组中的509位点出现碱基C的频率(57.9%)明显高于出现碱基T的频率(32.7%)(P<0.05)。结论本组185例中国人中,TGFβ1基因-800和-988位点不存在多态性,-509位点基因多态性与肝硬化的发生没有密切关系,但与肝硬化程度有关。

淋巴细胞微粒诱导的小鼠气道炎症模型的建立及评价

目的利用T淋巴细胞微粒诱导建立小鼠气道炎症模型,探讨淋巴细胞微粒在气道炎症发生中的作用。方法放线菌素D溶液处理6T-CEM细胞24 h,收集淋巴细胞微粒;50μg/mL的淋巴细胞微粒灌注BALB/c小鼠气道,24 h后处死小鼠并取肺组织;HE染色检测肺组织的形态变化,ELISA、Western blot和荧光定量PCR法分别检测免疫相关分子NLRP3、TLR4、IL-18和IL-1β的蛋白和mRNA表达水平。结果 HE染色显示淋巴细胞微粒处理组小鼠肺泡细胞聚集且伴随淋巴细胞浸润,ELISA结果显示淋巴细胞微粒处理组小鼠肺组织中IL-18和IL-1β的蛋白分泌水平显著高于正常组(P<0.01),荧光定量PCR和Western blot结果显示处理组小鼠肺组织中NLRP3、TLR4、IL-18和IL-1β的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组(P<0.01)。结论淋巴细胞微粒能够诱导小鼠气道炎症反应,其炎症反应与NLRP3、TLR4、IL-18和IL-1β等因子有关。

强直性脊柱炎患者血清IL-12水平及临床意义研究

目的探讨血清IL-12p70含量在强直性脊柱炎(AS)和健康个体间的差异及其临床意义。方法应用ELISA方法检测60例AS患者和30例健康对照血清IL-12p70水平;应用ESR自动化分析仪和特定蛋白分析仪分别测定红细胞沉降率(ESR)和血浆C反应蛋白(CRP);分析HLA-B27阳性和阴性的AS患者血清IL-12p70水平及与ESR、CRP的相关性。结果AS患者血清IL-12p70水平明显高于对照组(P<0.01),且HLA-B27阳性和阴性AS患者均高于对照组(P<0.01),两者比较,差异无显著性(P>0.05)。在HLA-B27阳性AS患者中,血清IL-12p70水平与ESR及CRP均呈明显的相关性,但在HLA-B27阴性AS患者中则无显著相关性。结论AS患者血清IL-12p70水平明显上调,且这种上调与HLA-B27阳性与否无明显相关性。但AS患者血清IL-12p70水平与ESR及CRP是否呈显著相关性却明显受到HLA-B27阳性与否的影响,进一步提示血清IL-12p70水平的改变可能与AS的发生和发展密切相关。

细节,检验医学实习带教中不可忽视的内容

检验医学实习有助于检验医学生将理论知识与临床操作进行有机结合,从而提升临床工作技能,为以后工作做好准备,因此在检验医学教学中至关重要,不可或缺。检验医学生进入临床实习以后,随时随处都会遇到细节问题,但又常常会被带教老师和实习同学所忽视。常言道：细节决定命运。

肝脏疾病相关自身抗体

近年来血清自身抗体检测越来越多的在临床上用于各种肝脏疾病，尤其是自身免疫性肝病的诊断和预后判断。但许多抗体的临床意义尚待进一步研究。本文就近年来各种自身抗体在肝脏疾病的诊断以及疗效、预后判断中意义的研究进展作一概述。

丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基通过活化Toll样受体4影响单核细胞分泌细胞因子

目的:探讨丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(PDC-E2)是否可以活化Toll样受体4(TLR4)-NF-κB通路,并通过该通路诱导单核细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素12(IL-12)和可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(s TRAIL)。方法:培养单核细胞株U937,分为空白对照组、PDC-E2组、PDC-E2+HTA125组和PDCE2+PDTC组。空白对照组不予任何刺激;PDC-E2组予2、10和50μg/mL的PDC-E2刺激;PDC-E2+HTA125组予10μg/mL的TLR4功能抑制抗体HTA125孵育4h后,再加入50μg/mL的PDC-E2;PDC-E2+PDTC组加入100nmol/mL的NF-κB抑制剂PDTC0.5h后,再加入50μg/mL的PDC-E2。通过流式细胞术检测TLR4表达,EMSA实验检测NF-κB活化情况,ELISA法检测培养上清TNF-α、IL-12和s TRAIL浓度。结果:2、10和50μg/mL浓度PDC-E2刺激U937细胞24h,TLR4表达均明显增加,但无浓度依赖性。浓度为50μg/mL的PDC-E2刺激U937细胞1h,NF-κB即显著活化;至2h,活化逐渐减少;至4h,已明显减少。加入HTA125后,NF-κB活性较阻断前显著降低。浓度为50μg/mL的PDC-E2刺激U937细胞24h,培养上清TNF-α和s TRAIL的浓度显著高于空白对照组(P<0.05),IL-12与空白对照组比差异无统计学意义;至48h和72h,TNF-α、IL-12和s TRAIL的浓度均显著高于空白对照组(P<0.05)。加入HTA125或PDTC后,各时间点3种细胞因子的浓度均较阻断前显著降低(P<0.05)。结论:PDC-E2可以活化TLR4-NF-κB通路,并通过该通路刺激单核细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-12和s TRAIL。

Toll样受体3与自身免疫性疾病

TLR3属于TLR家族中的一个重要成员,是dsRNA病毒的模式识别受体,与配体结合后,通过其信号转导通路引起炎症反应,在宿主抗病毒免疫中具有重要作用。研究表明TLR3分子的表达异常与多种自身免疫性疾病的发生关系密切。

低氧/低氧诱导因子-1α通过TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞上皮间质转化

目的:探讨低氧/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肝内胆管上皮细胞(HIBEC)上皮-间质转化(EMT)的诱导作用及其分子机制。方法:HIBEC在1%氧浓度的低氧环境中培养,分析细胞迁移、侵袭能力的变化,以及EMT相关标志E-钙黏蛋白和S100A4的表达水平。以HIF-1α的siRNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)抑制剂LY364947分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1,再重复上述实验。结果:与常氧培养相比较,低氧条件下,HIBEC的细胞迁移和侵袭能力明显增强,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达明显下降,间质细胞标志物S100A4表达明显升高(P<0.05)。以HIF-1α的siRNA和TGF-β1分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1后,上述低氧引起的HIBEC生物学变化均受到明显抑制(P<0.05)。结论:低氧可以通过活化HIF-1α诱导HIBEC发生EMT,这种诱导作用主要是通过TGF-β1完成的。

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在强直性脊柱炎患者血清中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(sTRAIL)在强直性脊柱炎(AS)患者和健康个体血清中的表达及其临床意义。方法应用ELISA法检测60例AS患者和30例健康对照血清sTRAIL的浓度;应用ESR自动化分析仪和特定蛋白分析仪分别测定红细胞沉降率(ESR)和血浆C反应蛋白(CRP);分析HLA-B27阳性和阴性的AS患者血清sTRAIL水平与ESR、CRP的相关性。结果AS患者血清sTRAIL浓度明显高于对照组(P<0.01),且HLA-B27阳性和阴性AS患者均明显高于对照组(P<0.01),但两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在HLA-B27阳性AS患者中,血清sTRAIL水平与CRP呈明显的相关性而与ESR的相关性并不明显;而HLA-B27阴性AS患者血清sTRAIL与ESR及CRP均无显著相关性。结论血清sTRAIL水平在AS中明显上调,与HLA-B27阳性与否无显著相关性。AS患者血清sTRAIL与ESR无相关性,而与CRP是否具有显著相关性受到HLA-B27阳性与否的影响。总之,血清sTRAIL水平的改变可能与AS的发生和发展密切相关。

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体4基因的表达及临床意义研究

目的探讨Toll样受体4(TLR4)基因在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者、乙型肝炎肝硬化患者及健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中的表达差异及其临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR方法检测30例PBC患者、20例乙型肝炎肝硬化患者及30例健康对照PBMC中TLR4 mRNA的表达水平;γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和碱性磷酸酶(ALP)的检测,按临床生化常规上机进行。结果PBC患者及乙型肝炎肝硬化患者PBMC中TLR4 mRNA的表达水平均显著高于健康对照,且以乙型肝炎肝硬化患者升高更为明显。在PBC患者中,TLR4 mRNA的表达水平与血浆ALP及GGT均无显著相关性。结论TLR4 mRNA的表达水平在PBC患者明显上调,但并无疾病特异性。TLR4及其通路的异常可能参与PBC的发病但与疾病的进展程度无关。

整装勘查区矿业权设置方案评估浅析

依据整装勘查区矿业权设置方案相关内容,通过对首批47片整装勘查区矿业权设置方案中的主攻矿种、调整整合矿业权、矿业权设置方案调整情况进行分析,提出完善整装勘查区矿业权设置方案制度的建议:进一步加强全面实施矿业权设置方案制度的指导和宣传;全面、正确地理解矿业权设置方案编制、审查的要求,统一标准,提高编审质量;进一步加强整装勘查区矿业权设置方案信息化管理;整装勘查区矿业权设置方案应密切结合勘查工作部署,以主攻矿种为主兼顾重要的共伴生矿产,合理设置矿业权。

浅谈自身抗体的检测及临床应用中遇到的问题

自身抗体是目前临床上应用最为广泛的自身免疫性疾病辅助诊断指标,对自身免疫性疾病的辅助诊断、病情判断和疗效观察具有重要价值。但自身抗体在临床应用过程中也存在较多问题,需要认真面对和逐步解决。当前自身抗体临床检验中可能存在的主要问题,包括:手工操作主观性强,检验质量有待提高;检验人员与临床医生之间缺少沟通,临床医生对自身抗体检测技术和结果的认识不够;新技术、新方法引入临床的必要性和复杂性等。本文初步探讨了这些问题的成因和解决方法,并预测了自身抗体临床检验未来的可能趋势。

从合规性审查看矿业权设置方案优化布局

从合规性审查的矿业权设置方案数据分析来看,矿业权平均面积总体有了较大的增加。合规性审查要点有:方案相关电子财料是否已通过备案系统上传;材料是否齐全;是否经过论证;是否经过专家审查;是否存在与其他国家重要管理区域矿业权设置方案编制范围重叠的情况;是否存在矿业权重叠设置。重点研究内容:区域范围及布局的合理性,是否影响紧缺矿产找矿和矿业权设置,涉及保护性开采特定矿种成矿条件的处理,过期矿业权处理情况,出资、出让方式是否符合要求。建议:进一步加强宣传和指导;有效提高方案编制审查质量;采取措施保障方案有效实施。

系统性红斑狼疮的分子标志物研究进展

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的实验室诊断和病情判断主要依赖于抗核抗体、抗双链DNA(ds DNA)、抗Sm、抗磷脂抗体等自身抗体。但这些自身抗体存在敏感性或特异性差的缺陷,大大限制其临床价值。因此,迫切需要研发一些新技术及新标志物来解决这些问题。随着分子生物学技术的迅速发展,大量新的分子标志物被发现并鉴定,有望为提升SLE临床诊疗水平提供新契机。该文概括性综述了近年来在SLE中新发现的各种分子标志物,包括基因转录、变异谱、表观遗传谱、游离基因分子谱、胞外颗粒表达谱等,并对这些分子标志物的应用前景和存在的问题进行讨论。

I型胶原基因多态性与疾病关系的研究进展

I型胶原基因存在较多的多态性 ,但只有少数多态性与疾病有密切关系。本文着重介绍了近五年来研究发现的

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞ANT3基因表达及临床意义

目的探讨腺嘌呤易位体3(ANT 3)基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法利用T aqm an-M GB探针技术,通过ΔCT值建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30例健康人(对照组)和30例PBC患者(观察组)外周血单个核细胞(PBM C)ANT 3基因的表达,同时检测血清γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)与碱性磷酸酶(ALP)浓度。结果观察组PBM C中ANT 3 mRNA表达的ΔCT值明显高于对照组,P<0.01;其原始模板浓度为对照组的2.3倍,P<0.01。观察组血清γ-GT、ALP浓度均升高,且与ANT 3基因表达的ΔCT值呈负相关(P均<0.05)。结论PBC患者PBM C中ANT 3 mRNA表达水平明显升高,且与血清γ-GT、ALP浓度呈负相关。提示ANT 3 mRNA的表达量与PBC的严重程度相关;ANT 3基因检测在PBC发病机制、诊断及病情监控中有重要作用。