血清4型禽腺病毒水平感染SPF鸡的致病性研究

为研究血清4型禽腺病毒(FAdV-4)通过水平传播途径感染SPF鸡的致病性,将3周龄SPF鸡饲养于FAdV-4不同污染程度的隔离器中以建立自然感染动物模型,每天记录疾病过程并统计发病率和死亡率,剖检并检测器官病毒载量,检测环境和鸡躯体表面的FAdV-4病毒载量。结果显示:FAdV-4水平感染SPF鸡的第1~4天无明显临床症状,第5天起饮食量下降、排黄绿色粪便,第6~9天陆续有鸡死亡,第10天后鸡群逐渐康复至与对照组相同;FAdV-4具有广泛的组织嗜性,在肝脏中含量最高;环境中FAdV-4的污染程度对鸡群的发病率和死亡率均有影响,每25 cm^(2)地网的病毒载量为1.4×10^(5)copies、侧壁为2.3×10^(3)copies、料槽为1.2×10^(4)copies时将达到环境致病阈值,此时每25 cm^(2)鸡体表病毒载量为脚底1.2×10^(5)copies、头部1.1×10^(4)copies、背部3.7×10^(3)copies。本研究加深了对FAdV-4致病性的了解,为兽医工作者和养殖业人员采取有效的预防控制措施提供了参考数据。

禽呼肠孤病毒σA蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立

旨在制备禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白单克隆抗体及建立一种夹心ELISA方法检测ARV病原。以原核表达ARVσA蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,筛选稳定的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体,建立基于单克隆抗体的σA-夹心ELISA检测方法,并进行敏感性、特异性、重复性和准确性检验。结果显示,成功构建了重组质粒pET-32a-σA,并在大肠杆菌中良好表达。通过杂交瘤细胞筛选,获得了2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为6B3和8E11,2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能与天然ARV反应。选择其中1株6B3分泌的单克隆抗体作为捕获抗体,ARV阳性鸡多克隆抗体作为检测抗体,通过优化反应条件,建立了检测ARV的σA-夹心ELISA方法。特异性检测显示该法只检出ARV病原,没有检出其他常见鸡病病原;敏感性试验显示其能检出7.72×10^(2)EID50/mL的ARV;重复性试验显示批内和批间试验的变异系数(Cv)均小于5.0%,重复性好。用σA-夹心ELISA方法与PCR方法同时对30份样品进行检测,两者检测结果相符。结果表明成功建立基于ARVσA蛋白单克隆抗体的夹心ELISA方法用于ARV的鉴别检测,为准确快速检测ARV提供技术手段。