引起成人腹泻的新轮状病毒在原代人胚肾细胞上的培养和传代

目的 探讨用细胞培养系统在体外培养新轮状病毒 (RV)。方法 含新RV的病人粪便标本经高浓度胰蛋白酶 (10 0 μg/ml) 37℃作用 1h ,接种于原代人胚肾 (PHEK)细胞 ,37℃吸附 1h后 ,补加无血清含胰蛋白酶 (10 0 μg/ml)的DMEM ,37℃转鼓培养 3d ,收获细胞培养液 ,冻融 1次 ,作为下一代培养的接种物 ,培养传代。用聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫荧光 (IF)、电镜 (EM)、免疫电镜 (IEM)等方法对细胞培养液进行病毒核酸、抗原及形态检查。结果 从 10份粪便标本中培养分离到 1株病毒 ,定名为J19。该病毒在PHEK细胞上稳定培养传代 (2 8代 ) ,其病毒核酸 (dsRNA)电泳图型与初始用于接种细胞的粪便标本中的dsRNA电泳图型完全一致 ,而与A、B、C组RVdsRNA电泳图型明显不同。J19株感染的细胞与病人恢复期血清呈IF阳性反应 ,与成人腹泻轮状病毒 (ADRV)腹泻病人恢复期血清、兔抗A组RV和兔抗ADRV血清均为IF阴性 ;EM和IEM在该病毒的细胞培养液中观察到 ,在形态上与初始接种物中病毒一样的轮状病毒颗粒 ,而且可被新RV腹泻病人恢复期血清凝集。结论 成功地从含新RV的成人腹泻粪便标本中分离培养出 1株轮状病毒———J19,并能在细胞稳定传代。J19株不属于A、B、C组RV ,而是一种新RV。关于新RV在细胞上培养传代 ,本文是第一次报?