牦牛附睾DPP4基因CDS区的克隆和表达研究

为了进一步研究牦牛附睾精子成熟机制,本实验成功克隆获得牦牛附睾DPP4基因CDS全长序列,并对其蛋白基本信息进行分析预测;荧光定量PCR方法检测DPP4在牦牛附睾不同部位的表达量。结果表明:牦牛DPP4基因CDS区长度2 298 bp,编码765个氨基酸,DPP4蛋白为带负电不稳定亲水性蛋白,分子量88.37 ku,分子式为CHNOS;跨膜预测结果显示其存在跨膜螺旋区但没有信号肽;qPCR检测结果显示,DPP4基因在附睾头部的表达显著低于附睾的体部和尾部表达,说明DPP4基因在牦牛附睾不同部位的表达存在显著差异。

牦牛附睾ADAM28基因CDS区的克隆和表达研究

为研究牦牛附睾组织中精子成熟的相关机理,本研究通过分子技术对牦牛ADAM28基因进行克隆,分析ADAM28基因的生物信息学特征及其在附睾组织中的表达特点。结果显示:牦牛ADAM28基因CDS区有2 235 bp,编码744个氨基酸,所编码的蛋白为中性蛋白,具有亲水性且稳定,存在跨膜螺旋区但没有信号肽;牦牛ADAM28基因在附睾头部的表达显著高于附睾体和附睾尾。

牦牛CST3基因的克隆、表达及生物信息学分析

CST3基因又名半胱氨酸蛋白酶抑制剂3,其翻译的蛋白质作用是抑制半胱氨酸蛋白酶。为研究牦牛附睾精子成熟相关机理,本研究克隆了牦牛CST3基因并进行生物信息学分析,测定其在附睾不同区域(头、体和尾)的表达。结果显示:CST3基因的编码区全长为447 bp;CST3蛋白的分子量为16.26 ku,等电点为9.23,弱碱性蛋白,存在信号肽序列;CST3蛋白序列长度为148个氨基酸,存在一个跨膜区,表达于细胞质和分泌;CST3基因在附睾头体尾均有表达,且头部的表达量远高于体部和尾部(P<0.05)。本研究结论为牦牛CST3基因的理论研究提供了相关依据。

牦牛LCN6基因CDS的克隆及其在附睾不同区段中的表达

为研究牦牛附睾组织中精子成熟有关机制,本研究从牦牛的附睾中克隆出LCN6基因,并采用生物信息学方法分析其生物学特点,同时分析该基因在牦牛附睾中的表达情况。以RT-PCR技术手段克隆所获牦牛的LCN6基因,而其在牦牛附睾的不同部位的表达丰度用实时荧光定量PCR进行检测。结果表明,所得牦牛LCN6基因的CDS含有一个564 bp长度的片段(登录号:XM_005887080.2),编码187个氨基酸;其对应的氨基酸具有跨膜结构,存在信号肽序列,归于不稳定的亲水性蛋白;分子量为20.934 ku,理论等电点是9.59,不稳定系数为53.95,平均亲水性系数为-0.127。牦牛LCN6基因编码氨基酸序列与绵羊和山羊等物种间同源性较高,亲缘关系远近与其系统进化情况一致。荧光定量PCR结果显示,LCN6基因在牦牛附睾组织的三个不同区段中均存在不同程度的表达,其中表达水平最高处位于附睾尾和附睾颈,显著高于附睾头(p<0.05)。本研究将为继续研究LCN6基因的功能提供基础数据。

犏牛精原细胞分化相关基因PP2A的克隆与表达探究

蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)有着逆转蛋白激酶的作用,对调控磷酸化信号的通路有重要作用。因细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent protein kinases,CDKs)在精子发生的过程有着重要的功能,而PP2A能通过去磷酸化功能影响CDK的活性,即PP2A可能对精子发生的过程产生影响,进而推测PP2A与雄性犏牛不育有关。为了验证PP2A是否对精子的发生产生影响,在本研究中对犏牛睾丸PP2A基因进行克隆得到其CDs区序列,并通过生物信息学法对其分析,同时利用Q-PCR技术检测PP2A基因在牦牛和犏牛的睾丸及附睾中的表达情况。结果表明:犏牛PP2A基因的CDs区编码长度为930 bp,由309个氨基酸组成,是带负电的酸性亲水稳定蛋白;同偶蹄类的同源性较高,在系统进化树中距离较近;不是分泌蛋白而是结合转运蛋白,无跨膜的结构域。牦牛PP2A在睾丸和附睾中的表达都极显著高于犏牛(P<0.01),犏牛的PP2A在睾丸和附睾中的表达下调,推测其可能会对某些重要的信号通路造成一定影响并进一步作用于犏牛精子的发生过程,即PP2A与雄性犏牛不育有关。