金属离子对多环芳烃酶促降解的影响作用

采用超声波细胞破碎仪破碎获得胞内酶、紫外分光光度法测定多环芳烃含量的方法研究了黄杆菌FCN2产生的胞内酶对多环芳烃蒽、菲、芘的酶促降解作用并对影响酶促降解的主要条件(pH、温度、金属离子的激活作用)进行了优化。研究结果表明:(1)对影响多环芳烃酶促降解的条件进行了优化。当pH为6、温度为32℃时,胞内酶粗酶液对多环芳烃蒽、菲、芘的降解效果最好。(2)在pH为6、最佳温度为32℃时,研究了Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe3+、Fe2+、Cu2+6种金属离子对胞内酶粗酶液降解活性的影响作用。研究结果表明,Ca2+、Cu2+两种金属离子对蒽、菲、芘的酶促降解都可起到激活作用。Ca2+对胞内酶酶促降解不同底物的激活作用最为明显;当向体系中加入的Ca2+为0.5mmol·L-1时,蒽、菲、芘的去除率可分别提高为不加金属离子时的1.34倍、1.59倍、1.84倍。(3)通过测定米氏常数发现,当不加金属离子时,以蒽、菲、芘为底物时粗酶液的米氏常数值分别为2.69×10--4、4.28×10--4、3.56×10--4mol·L-1;加入0.5mmol·L-1 Ca2+时的米氏常数值分别为1.54×10--4、3.58×10--4、2.46×10--4mol·L-1,说明金属离子的加入增大了粗酶液与底物的亲和力,因此使得加入金属离子时蒽、菲、芘的去除率显著提高。

糖基化磁性纳米粒子的制备及其对凝集素的富集分离

为了构建简单高效的病原微生物分离纯化方法,首先制备了双金属磁性纳米粒子Au-Fe3O4,然后在Au组份的表面修饰了可特异性结合凝集素及病原微生物的的乳糖基(Lac),获得了糖基化磁性纳米粒子Lac-Au-Fe3O4,并进一步研究了Lac-Au-Fe3O4与蓖麻凝集素(RCA120)之间的反应及其对RCA120分离效率的影响,结果表明:1)Au-Fe3O4纳米粒子尺寸均一(8+14nm),呈哑铃状,Au和Fe3O4组份分别位于哑铃的两端;2)Lac-Au-Fe3O4具有良好的水溶性和磁学性质,在30min之内可特异性地与RCA120充分结合;3)在外加磁场作用下,Lac-Au-Fe3O4对水溶液中RCA120的分离效率约为70%,可有效分离微量样品(1nmol/L)。通过本实验,笔者对糖基化磁性纳米粒子的制备及其与凝集素的反应有了较为深入的了解,为进一步发展简单、快速的病原微生物分离方法奠定了基础。