NOD/SCID小鼠抗原对脐血T细胞上TCRVβ亚家族基因克隆性的影响

目的:了解脐血单个核细胞(MNC)体外与NOD/SCID小鼠抗原共培养后,TCRVβ亚家族T细胞分布和克隆性增殖的特点。方法:将NOD/SCID小鼠外周血MNC、骨髓、胸腺及脾细胞反复冻融3次制成可溶性抗原,分别与Ficoll-Hypaque法分离的脐血MNC共培养。第15天和第20天,分别收集细胞提取RNA,用RT-PCR扩增人TCRVβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析。结果:扩增前脐血T细胞表达大部分Vβ亚家族,经NOD/SCID小鼠抗原诱导后,TCRVβ亚家族T细胞呈限制性表达,某些Vβ亚家族基因(Vβ10、11)呈寡克隆性增殖,而某些Vβ亚家族基因(Vβ2、15、16、19)呈寡克隆表达的趋势。结论:NOD/SCID小鼠抗原可刺激脐血T细胞选择性增殖,提示在建立人源化NOD/SCID小鼠免疫模型时应考虑所存在的GVHR问题。

NOD/SCID小鼠人源化TCR Vβ亚家族T细胞分布与克隆性分析

目的应用脐血CD34+细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化TCR Vβ亚家族T淋巴细胞分布与克隆性。方法磁珠分选法分离脐血中CD34+细胞,分别经尾静脉输入亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠。第6周处死小鼠提取外周血、骨髓、胸腺的RNA,RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析。结果采用RT-PCR技术在模型小鼠骨髓中检测到部分人TCR Vβ亚家族基因Vβ1、2、91、3、19。经进一步基因扫描分析,发现部分TCR Vβ亚家族基因Vβ9、13、19呈寡克隆表达。结论在NOD/SCID模型可重建分化成熟的TCR Vβ亚家族T细胞。未能检测到全部人TCR VβT细胞的原因可能与免疫重建不完全或存在移植物抗宿主的反应有关。人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟。

GATA-1和GATA-2基因在贫血性疾病中的表达

转录因子GATA家系是近几年才被发现并广泛认识的一个转录因子家系,因能特异地识别并结合调节序列[T/A(GATA)A/G]而被命名,属锌指结构类家族,与造血细胞分化发育关系密切。GATA基因在白血病中表达已有少量资料报道,而在贫血性疾病中的表达目前尚未见报道。本文利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了19例贫血性疾病患者GATA-1和GATA-2基因的表达情况。

慢性粒细胞白血病患者FcεRⅠγ链基因表达上调

目的:在慢性粒细胞白血病病人(CML),CD3ζ链表达明显下降,分析与CD3ζ存在互补关系的FcεRⅠγ基因在CML患者中表达水平,以了解T细胞免疫中TCR信号转导的变化情况。方法:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法测定CML患者和健康人各20例的外周血单个核细胞(PBMCs)的FcεRⅠγ基因表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-ΔCt×100%,计算FcεRⅠγ链的相对mRNA表达量。结果:CML患者PBMCs中FcεRⅠγ基因表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。FcεRⅠγ表达水平变化与病人外周血CD3+T细胞比例无相关性。结论:CML病人中FcεRⅠγ表达上升,提示FcεRⅠγ可能在一定程度调节CD3ζ链缺陷所带来的T细胞免疫异常。

脑血管病与淋巴细胞亚群的检测

对34例经CT及临床诊断为脑血管病患者,进行了外周血淋巴细胞单克隆抗体(McAb)检查,并就脑血管病的不同类型、病变部位、患者性别、年龄、病程等与T族及B族淋巴细胞亚群之间的关系,分别进行探讨,结果提示,脑血管病患者T抑制细胞升高(P<0.05),以脑血栓组尤为显著。脑出血组总T细胞降低(P<0.05)。底节区病变时,T辅助细胞下降,T抑制细胞上升,T_H:T_S值下降显著(P<0.01)。病程短于2周者,总T细胞与T辅助细胞值较病程长于1年者为低(P<0.05)。T_H细胞值随年龄增高而降低,70岁以上组与50岁以下组比较P<0.05。脑血管病患者前B细胞普遍性的增高(P<0.001),而成熟B细胞未见有显著增高(P>0.05)。

利多卡因联合加热对白血病细胞株的杀灭作用

报告盐酸利多卡因(LID)、加热(42℃)、LID 联合加热对 HL-60、K_(562)、u_(937)白血病细胞株和正常骨髓细胞集落形成(GM-CFU)的作用.结果表明:LID 86.7μmol/L 联合42℃45 min.在体外对 HL-60、K_(562)、U_(937)细胞株细胞的杀灭作用分别为0.9927、0.824、0.802;而 GM-CFU 为0.42,即仍可保留0.58的正常造血祖细胞(P<0.01).

用Haemonetics V50血细胞分离机采集外周血造血干细胞

近年来,自体骨髓移植因治疗急性白血病获得了一定的疗效而受到人们的重视。在自体骨髓移植中,大剂量化疗和全身照射后骨髓造血重建所需要的造血干细胞不仅可以从骨髓,而且还可以从外周血获得。由于从外周血分离造血干细胞比较方便,可重复进行。

RT-PCR检测血液病中GATA-3基因表达

目的：广解T细胞特异性转录因子GATA－3基因在血液病中的表达特点；方法：利用RT－PCR方法协测了34例血液病患者PBMC中GATA－3基因的表达；结果：急性白血病中GATA-3有较高的表达（40％阳性率），而12例再障中仅1例GATA－3阳性。结论：推测GATA－3基因表达可能与骨髓增生程度有关。

职业性三氯乙烯药疹样皮炎患者周围血T细胞抗原受体Vβ谱系多样性初探

目的了解职业性三氯乙烯（TCE）药疹样皮炎（OMLDT）患者周围血T细胞抗原受体（TCR）Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测10名健康人和5例OMLDT患者周围血中24个TCR Vβ基因的互补决定区3（CDR3）。PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果 10名健康人可检出所有24个TCR Vβ亚家族,5例OMLDT患者周围血仅检出1~6个Vβ亚家族阳性产物,平均表达（2.8±1.9）个Vβ亚家族,β亚家族检出数显著少于健康人（P〈0.01）。OMLDT患者周围血中存在克隆性增殖T细胞,其中以Vβ16亚家族出现克隆性增殖的频率较高。结论 OMLDT患者周围血中TCR Vβ谱系发生改变,这可能是接触TCE后机体细胞免疫功能的异常变化。