EB病毒LMP1通过NF-kB介导的HSV-tk/GCV治疗EBV相关肿瘤的研究

目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)通过活化NF-kB反式激活HIV-LTR进而启动自杀基困HSV-tk在EBV相关肿瘤治疗中的作用,为进一步开展肿瘤治疗提供科学的实验依据。方法:以鼻咽癌细胞为实验模型,将HSV-tk基因置于HIV-LTR调控序列之下,构建LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk/GCV系统,采用同位素方法检测tk活性来研究LMP1通过NF-kB调控HSV-tk转录的靶向性和表达特征,MTT方法检测在GCV处理下肿瘤细胞的生长状况。结果:成功构建受LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk表达质粒,发现其在GCV处理下,表达LMP1的肿瘤细胞的生长有显著的抑制。结论;携带有LMP1-HSV-tk的细胞对GCV治疗高度敏感,显示这一肿瘤治疗系统在EBV相关肿瘤中具有一定的应用前景。

人端粒酶逆转录酶基因启动子介导重组Caspase-3治疗人肺腺癌的研究

目的探讨使重组Caspase-3分子选择性诱导人肺腺癌细胞凋亡从而杀伤肿瘤细胞的可行性。方法构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子调控下的重组Caspase-3分子,通过报告基因分析、Caspase-3酶活性分析、流式细胞分析、MTT方法和动物实验来研究其在肿瘤细胞中选择性诱导凋亡的作用。结果通过Caspase-3酶活性分析,发现phTERT-Rev-Caspase-3在人肺腺癌细胞A549中能够诱导Caspase-3的活性表达;流式细胞分析和MTT方法提示其具有明显的诱导A549细胞凋亡、抑制增殖的作用;动物实验显示其能够有效地抑制肺癌裸鼠移植瘤的生长。结论phTERT-Rev-Caspase-3是一种有效的选择性诱导人肺腺癌细胞凋亡的分子。

Caspase与肿瘤治疗

对肿瘤发生发展的分子机制研究的最新进展表明 ,细胞凋亡障碍在肿瘤发病学上有重要的意义。在细胞凋亡的过程中Caspase家族起着关键性的作用。已经发现一系列新的与Caspase有关的诱导凋亡的方法来治疗肿瘤 ,对大部分肿瘤的治疗有实际的意义 。

JNK相互作用蛋白通过JNK途径影响鼻咽癌的增殖和凋亡(英文)

EB病毒编码的瘤蛋白潜伏膜蛋白 (LMP1)所介导的活化蛋白 (AP 1)信号转导途径在细胞增殖、分化、转化与凋亡方面发挥着重要作用 .越来越多的证据表明 ,AP 1信号转导通路中上游激酶JNK在鼻咽癌的发生发展过程中起着重要作用 .最近克隆出来的JNK相互作用蛋白 (JIP 1)是一种能抑制JNK核移位的胞浆锚蛋白 .为探讨JIP在LMP1调控AP 1信号通路中的作用机制 ,采用间接免疫荧光法和报告基因法 ,发现JIP通过有效地抑制磷酸化的JNK从胞浆移位入核 ,从而抑制LMP1上调的AP 1活性 .同时 ,JIP导入鼻咽癌细胞中 ,MTT法发现JIP能够明显抑制鼻咽癌细胞的生长 .进一步发现转染JIP后细胞的集落形成率与对照组相比大约降低了 5 3 6 % ,也抑制了细胞 .提示JIP可明显抑制细胞的增殖作用 .进一步采用流式细胞术分析 ,结果发现JIP引起细胞G1/S期细胞阻滞 ,说明JIP是抑制细胞增殖的重要调节子 .进一步采用流式细胞术定量发现 ,转染JIP后细胞的 2 4h凋亡百分率由 1 2 5 %上升到 8 2 5 % ,上升约 6 6倍 ,4 8h由 1 0 4 %上升到 31 4 5 % ,上升约 30倍 .采用激光共聚焦显微镜发现 ,转染JIP后细胞核发生显著变化 ,核质由均匀状态固缩成高凝集状态 ,形成了典型的胞膜体 .提示JIP可有效地促进细胞凋亡 .结果表明 ,JIP可通过抑制活化的JNK?

DCE-MRI定量参数评价放疗前后鼻咽癌肿瘤血管变化及其对预后评估的价值

目的：纵向研究鼻咽癌放疗前后的DCE-MRI各种定量参数的变化及其对预后评估的价值。方法24例经病理证实为低分化鳞状上皮细胞癌的鼻咽癌患者分别于放疗前1-2 d、放疗中（放射剂量为50 Gy）、放疗结束时（放射剂量为70 Gy）进行常规MRI和DCE-MRI扫描。以两腔室模型为基础，计算出定量血流动力学参数（Ktrans、kep、Ve）。比较放疗前、中及放疗结束时各参数的变化；分别探讨放疗中肿瘤消退率（RS0-50）与放疗前和放疗中各参数的相关性；并比较不同预后患者放疗结束时各参数的差别。结果放射治疗后肿瘤组织的Ktrans值呈下降趋势，放疗结束时肿瘤组织的Ktrans值与放疗前的差别有统计学意义，放疗中肿瘤组织的Ktrans值虽然下降，但与放疗前的差别无统计学意义。放射治疗后kep值下降，Ve值出现不同程度增高。放疗中肿瘤消退率与放疗前肿瘤组织的Ktrans值呈正相关（P值为0.005），与放疗中肿瘤组织的Ktrans值呈负相关（P值为0.001）。随访3年，5例患者死亡，3例出现远处转移；死亡、转移病例与其他患者放疗结束后的Ktrans值、kep值、Ve值的差异均无统计学意义。结论鼻咽癌放疗过程中DCE-MRI各定量血流动力学参数变化明显。放疗前和放疗中肿瘤组织Ktrans值可作为鼻咽癌放疗早期疗效评估指标，为鼻咽癌个体化治疗和治疗方案修正提供依据。鼻咽癌放疗远期疗效与Ktrans值的关系需进一步深入研究。

聚醚砜/磺化聚醚砜共混膜的亲水性和血液相容性

通过亲电取代反应成功合成了磺化聚醚砜并制备了聚醚砜/磺化聚醚砜共混膜。膜的水吸附量和水接触角实验表明,和单纯的聚醚砜膜相比,由于磺酸基的存在使得共混膜的亲水性得到提高。牛血清蛋白吸附实验结果显示:与聚醚砜膜相比,共混膜能有效地抑制牛血清蛋白的吸附。凝血时间实验则表明,聚醚砜/磺化聚醚砜共混膜的凝血时间比纯聚醚砜膜的凝血时间延长了2～3倍,因而共混膜的血液相容性较纯聚醚砜膜得到提高。

低氧诱导因子信号通路的研究新进展

低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)活性对维持肿瘤细胞的能量代谢、肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞增殖和转移起着重要作用,是肿瘤中低氧诱导的关键信号分子。阐明HIF-1信号通路以及发展靶向HIF-1的小分子抑制剂是目前的热点研究领域。

聚对苯二甲酸丁二酯合成用钛系催化剂的研究

以聚对苯二甲酸丁二酯(PBT)合成用催化剂钛酸四丁酯(TBT)、钛酸四异丙酯(TPT)为对比,考察了自制钛系催化剂TY–3在PBT合成中对酯化时间、馏出液中四氢呋喃(THF)含量、缩聚时间、切片性能等的影响。实验结果表明,在相同用量情况下,使用自制钛系催化剂TY–3合成PBT,酯化及缩聚时间最短,馏出液中THF含量最少,PBT切片产品的色度最好,其最佳用量为70～80 mg/kg。中试试验效果较好,有望应用于工业生产中。

外泌体形成分泌调控及其在肿瘤发生发展中的作用

外泌体(exosome)是起源于细胞内体的双层膜小泡。作为细胞间重要的介质,外泌体转运脂质、蛋白质、RNA等物质,从而发挥重要的生物学功能。外泌体的形成与分泌需要经过一个多因素、多阶段参与的精细调控过程。供体细胞分泌负载内含物的外泌体进入肿瘤微环境,随后受体细胞以不同的作用方式摄取其中的内含物,引起肿瘤的侵袭转移、免疫逃逸、治疗抵抗等。近年来,外泌体已成为医学研究的热点之一。现就外泌体形成分泌调控及其在肿瘤发生发展中的作用进展予以综述。

JIP影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡的生物学效应研究

背景与目的:研究表明LMP1激活c-JunN末端激酶(c-JunN-ternimalkinase,JNK)介导的信号途径在促进鼻咽癌的发生发展有重要作用,并且发现JNK相互作用蛋白(JNKinteractingprotein,JIP)在鼻咽癌细胞中能够有效抑制JNK信号途径。本实验在此基础上进一步研究JIP对鼻咽癌细胞增殖和凋亡生物学效应的影响。方法:采用MTT法观察不同剂量的JIP及相同剂量JIP作用不同时间后鼻咽癌细胞生长情况;并用集落形成率确定单个鼻咽癌细胞的增殖能力;同时用流式细胞术分析JIP作用前后细胞周期时相的变化;最后通过流式细胞术检测JIP作用后鼻咽癌细胞凋亡百分率的改变。结果:①随着转染JIP量的增加,细胞的存活率逐渐下降,存在剂量依赖效应;1μg/mlJIP作用24、48、72h后,细胞存活率分别为77.8%、59.2%、61.8%。②转染JIP后鼻咽癌细胞形成的集落明显减少,且集落体积变小。③转染JIP使鼻咽癌细胞周期G0/G1期细胞百分率由66.24%上升到71.89%,S期细胞百分率由25.87%下降到19.96%。④与对照组相比,转染JIP后细胞的24h凋亡百分率由1.25%上升到8.25%,上升约6.6倍,48h由1.04%上升到31.45%,上升约30倍。结论:JIP能够有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖,引起鼻咽癌细胞周期G1/S期延长,并明显促进鼻咽癌细胞凋亡,提示JIP是治疗鼻咽癌潜在的分子药物。

机械通气患者呼气末正压对中心静脉压的影响

【目的】评价机械通气时不同水平呼气末正压(PEEP)对中心静脉压(CVP)的影响。【方法】选择46例行机械通气并监测CVP患者,在不同水平PEEP(0、2、4、6、8、10、12、15、18cmH2O)时,分别测定CVP及心率(HR)、平均动脉压(MAP)、呼吸频率(RR)、经皮脉搏血氧饱和度(SpO2),脱机后再次测量各值并比较其差异性。【结果】PEEP对CVP有非常显著的影响(P<0.01)。PEEP≥12cmH2O患者的SpO2与PEEP≤4cmH2O时有显著性差异(P<0.01)。HR、MAP、RR与在不同PEEP相比较则差异无统计学意义。脱机与机械通气各项观察指标相比较有非常显著性差异(P<0.01)。【结论】随着PEEP水平增加,CVP逐渐增加。脱机测量CVP对患者不利,维持患者原PEEP水平测量CVP,可增加患者的安全性。

荧光定量聚合酶链反应诊断弓形虫感染的实验研究

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对孕妇与新生儿弓形虫（TOX）感染的诊断价值。方法以完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量PCR方法,检测了产妇的血清标本和新生儿脐血标本,同时与常规 PCR法和酶联免疫吸附法（ELISA）比较。结果 225例产妇中,FQ-PCR阳性28例,平均拷贝数值（ml-1）为 1.68×105,阳性率为12.44％,常规PCR阳性率为12.89％,TOX-IgG阳性29例,阳性率为 12.89％,IgM阳性33例,阳性率为14.67％。179例新生儿中,FQ-PCR阳性7例,平均拷贝数值（ml-1）为2.29×105,阳性率为3.91％,常规PCR阳性率为5.03％,TOX-IgG阳性11例,阳性率为6.15％,IgM阳性3例,阳性率为1.68％。结论FQ-PCR特异性比ELISA法高,可以检测TOX的真实感染和复制情况,对TOX的临床诊断、治疗方案的选择和疗效观察有较大的应用价值。

鼻咽癌诊断和治疗的新标志物(英文)

目的采用代谢组学技术寻找鼻咽癌诊断和治疗的标志物。方法采用气-质联用(GS-MS)技术,检测了49例鼻咽癌患者(Ⅰ期19例,Ⅱ期17例,Ⅲ期13例),37例喉癌患者和40个健康人血清中52种内源性代谢物。结果代谢谱比较分析结果显示,犬氨酸、N-乙酰葡萄酰胺、硬脂酸、甘氨酸、N-乙酰半乳糖胺、N-乙酰葡萄胺和对羟基丙酮酸在鼻咽癌患者血清中显著升高(～3倍)(P<0.05),其中犬氨酸、N-乙酰葡萄酰胺、N-乙酰半乳糖胺、N-乙酰葡萄胺和对羟基丙酮酸在鼻咽癌Ⅰ到Ⅲ逐步升高(P<0.05),治疗后该5种内源性代谢物逐步降低,且恢复到正常水平(P<0.05)。其中4种代谢物犬氨酸、N-乙酰葡萄酰胺、N-乙酰葡萄胺和对羟基丙酮酸水平降低与鼻咽癌治疗后肿瘤减小率成正相关,因此其可作为鼻咽癌潜在标志物。此外,这4个代谢物还与鼻咽癌复发转移有关。结论犬氨酸、N-乙酰葡萄酰胺、N-乙酰葡萄胺和对羟基丙酮酸是鼻咽癌变和侵袭重要的代谢产物。

荧光定量PCR检测沙眼衣原体及临床应用

目的 :用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)检测沙眼衣原体的含量 ,探讨FQ -PCR在衣原体性尿道炎诊断中的价值。方法 :应用荧光探针标记引物的荧光定量聚合酶链反应对 172例疑为沙眼衣原体感染患者标本进行检测 ,并与常规PCR(电泳 -EB染色 )进行比较。结果 :FQ -PCR阳性率为 19.8% ,常规PCR法为 2 0 .9% ,两法符合率为 6 3 .9%。女性宫颈分泌物标本FQ -PCR阳性为 2 9.2 % ,常规PCR法为 16 .7% ;男性分泌物FQ -PCR阳性率为 16 .9% ,常规PCR法为 13 .8%。FQ -PCR特异性较常规PCR法高。结论 :FQ -PCR在扩增中实时在线检测 ,并选择理想的标准曲线做出较精确的临值分析 ,具有较高的特异性和敏感度 ,对病原体的诊断有一定的临床意义。

中国东北地区HTLV-1的前病毒DNA测定及其意义

目的了解我国东北的HTLV-1的流行情况及病毒特征。方法从2002年起在东北地区共采取了941份标本,用免疫荧光法进行了血清抗体的检测,经PCR扩增及Southern杂交鉴定。结果发现3例HTLV-1阳性感染病人,阳性率0.3%,没有发现HTLV-2阳性感染病人;在37例淋巴细胞白血病患者中检出2例,检出率5.4%。并对其中1例阳性感染病人的外周血单个核细胞(PBMCs)中的前病毒DNA的env基因的gp21、gp46两个碱基对核甘酸序列进行了PCR扩增,并将其克隆到T-Vector上进行DNA的核甘酸序列测定,与日本原型(ATX)病毒DNA链的相应区域的线性比较显示了很高的同源性(98.9%-100.%),没有发现碱基的插入、删除和其他显著性的变化。结论东北地区为HTLV-1的非流行区,于淋巴细胞白血病病人检出率(5.4%)较高,说明东北地区的淋巴细胞白血病与HTLV-1感染有一定的关系。

钛系催化剂在PET合成中的催化性能研究

采用2 L不锈钢反应釜,考察了自制钛系催化剂对聚酯(PET)生产过程中酯化反应和缩聚反应以及产品色度的影响。结果表明:自制钛系催化剂对PET生产过程中的酯化反应具有催化作用,同三氧化二锑催化剂相比,自制钛系催化剂可缩短酯化反应时间33%;自制钛系催化剂在缩聚过程中的催化反应活性高于三氧化二锑催化剂,可缩短缩聚反应时间45%;随着反应体系中钛含量的增加,缩聚产物达到一定黏度所需的缩聚反应时间降低,但缩聚产物的色相b值升高;合理的自制钛系催化剂的起始添加量应控制在7μg/g以下。

血管形成拟态在肿瘤中的研究进展

血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)是指肿瘤中的脉管系统不依赖血管形成,肿瘤细胞具有形成供血管状网络的能力,从而为肿瘤的生长提供丰富的血供模式。VM的形成包括多种分子机制和信号通路,在其形成过程中还发现肿瘤干细胞和上皮-间充质转变。作为一种独特的血供方式,VM与肿瘤细胞的浸润、转移和晚期癌症患者预后密切相关,靶向VM的抗癌疗法将会成为一种新的肿瘤治疗策略。

GADD45A与肿瘤治疗

生长阻滞和DNA损伤基因45A(growth arrest and DNA damage-inducible 45A,GADD45A)是第1个被发现的由P53激活的应激诱导基因,同时也是P63、P73、BRCA1及MYC的靶标基因。GADD45A作为DNA损伤修复基因,受P53依赖(电离辐射诱导)和独立于P53(紫外线诱导)的途径调节,参与DNA损伤修复、细胞周期阻滞、凋亡、自噬、血管形成等生物学功能,与肿瘤发生发展密切相关。在大多数肿瘤的治疗中,化疗药物直接或者间接(如脱甲基化、乙酰化)上调其表达水平,提高癌细胞药物敏感性;同时,在放射治疗过程,过表达GADD45A可干预放射抵抗。然而,在少数肿瘤的治疗中,GADD45A的表达反而能够提高癌细胞的存活率。本文主要对GADD45A在肿瘤治疗中所发挥的作用及机制进行综述。