急慢性MCMV感染对小鼠脾细胞Foxp3/T-bet/GATA-3蛋白表达水平的影响

目的:在整体水平研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠辅助性T细胞亚群Th1、Th2和调节性T细胞(Treg)分化特异性转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平的影响。方法:建立MCMV播散型感染模型,依据主要脏器内病毒滴度,确定感染后28天为本模型急、慢性期界定点。42只模型鼠分别于接种MCMV Smith株后第1、3、7、14、28、45天和60天各处死6只,分离脾细胞;另设42只正常小鼠作为模拟感染对照。Western blot法检测脾细胞中特异转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平。结果:MCMV感染后第3天T-bet蛋白表达显著增高达峰值,与模拟感染对照组比较有显著差异(P<0.01),随后下降,第28天后降至模拟感染对照组相当水平;而GATA-3蛋白表达在感染后第3天开始升高,第7天达峰值(P<0.01),第14天开始缓慢下降,但至第60天仍显著高于模拟感染对照组(P<0.05);Foxp3蛋白表达在感染后7天明显低于模拟感染对照组,第28天降至最低(P<0.01),第45天和60天表达明显上调,并显著高于模拟感染对照组水平(P<0.05)。结论:感染急性期,MCMV上调Th1/Th2特异性转录因子T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期,MCMV诱导Treg特异性转录因子Foxp3蛋白表达上调,同时显著抑制T-bet和GATA-3蛋白表达,提示CMV诱导Foxp3表达增加可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因。

MCMV感染对小鼠脾细胞调节性T细胞比率和Th1／Th2转录因子T—bet／GATA-3表达的影响

目的在整体水平研究小鼠巨细胞病毒（MCMV）急慢性感染对小鼠脾细胞中调节性T细胞（Treg）比率和Th1／Th2特异性转录因子T—bet/GATA-3蛋白表达的影响。方法建立MCMV播散型感染模型，60只模型鼠分别于接种病毒后第1、3、7、14、28、45、60、75、90和120天各处死6只，分离脾细胞；另设60只正常小鼠作为模拟感染对照。流式细胞术检测Treg比率，Western印迹法检测T-bet/GATA-3蛋白表达水平。结果Treg比率在急性感染末期（28d）明显低于模拟感染对照组[（1．46±0．27）％vs（2．78±0．29）％，P〈0．05]；在感染慢性期持续表达上调，60d时显著高于模拟感染对照组[（4．51±0．24）％vs（2．69±0．12）％，P〈0．05]。T—bet和GATA-3蛋白表达在感染后3d分别增至（O．618±0．053）和（0．836±0．061），均显著高于模拟感染对照组水平[（0．205±0．026）和（0．398±0．022）]；但是进入感染慢性期后均持续表达下调，在75、90和120d时均明显低于模拟感染对照组水平。结论感染急性期MCMV上调T-bet和GATA-3的蛋白表达；感染慢性期MCMV诱导Treg增殖活化，抑制Th1和Th2分化扩增，CMV诱导Treg扩增可能是其抑制宿主抗病毒免疫，导致慢性持续性感染的重要原因。

鼠巨细胞病毒对小鼠调节性T细胞分化和效应性T细胞活化的影响

目的在整体水平探讨小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠调节性T细胞（Treg）亚群CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞分化和CD4^＋CD25^＋Foxp3^-效应性T细胞（TE）活化的影响。方法建立全身播散型MCMV感染小鼠模型，依据主要脏器内病毒滴度，确定感染后第28天为本模型急、慢性期界定点。42只小鼠分别于感染MCMV后第1、3、7、14、28、45和60天处死6只；另设42只小鼠作为对照。流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg和活化的CD4^＋CD25^＋Foxp3^-TE在脾单个核细胞中所占比率变化。结果MCMV感染急性期CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg比率持续降低，第28天左右降至最低值，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；随后直线上升，第45天高于基线，第60天升至峰值，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；CD4^＋CD25^＋Foxp3^-TE在感染后第3～7天高于对照组（P〈0．05），其后持续下降，在感染后第45天和第60天显著低于对照组水平（P〈0．05）。Treg／CD4^＋CD25^＋TE比率在感染后第3～14天显著降低（P〈0．05）；随后逐渐上升，在感染后第45天和第60天均显著高于对照组（P〈0．05）。结论MCMV可在慢性感染期诱导CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg种群扩增，抑制CD4^＋CD25^＋Foxp3^-TE活化增殖，这可能是MCMV逃避特异性免疫而实现长期潜伏的机制之一。

大蒜新素对巨细胞病毒感染小鼠脾细胞TGF-β1和IL-10的抑制作用

目的:研究大蒜新素对巨细胞病毒(CMV)感染鼠的免疫抑制性细胞因子TGF-β1和IL-10的影响,探讨大蒜新素的抗CMV机制。方法:建立非免疫抑制性鼠巨细胞病毒(MCMV)全身播散性感染小鼠模型;双抗体夹心ELISA法检测感染后1,3,7,14,28,45,60,75,90,120d正常对照组、病毒感染组和药物治疗组小鼠脾细胞培养上清中TGF-β1和IL-10水平的时序性变化。结果:MCMV感染后,TGF-β1和IL-10分泌均显著升高,并呈现出急慢性期两次高峰的特点。大蒜新素治疗对MCMV感染鼠各时间点TGF-β1水平均有下调作用,且对其急性期分泌高峰的抑制更明显。大蒜新素治疗对IL-10的急性期分泌高峰影响不明显,却显著下调慢性期IL-10的分泌高峰。结论:大蒜新素能显著抑制MCMV感染后TGF-β1和IL-10分泌,进而增强机体细胞免疫功能而有利于机体清除MCMV病毒,这可能是大蒜新素抗CMV的另一作用机制。