视网膜静脉阻塞机制及危险因素研究进展

视网膜静脉阻塞(RVO)是第二大视网膜血管疾病,其病理生理机制复杂,除血管机械压迫外,炎症和内皮素也都被证实参与RVO的发病,但具体机制尚不明确。既往文献证明高血压、糖尿病和血脂异常是老年人群中最常见的危险因素,而近期研究发现凝血异常和血液流变学异常在50岁以下人群中更为常见。眼部危险因素也越来越受到重视,包括青光眼、高校正眼压及眼底血管异常。不同危险因素间存在协同关系,早期识别并且干预能有效降低RVO的发病率。本文旨在对近期相关研究进行综述,对现有机制理论进行总结,为发掘潜在药物靶点提供研究思路,同时为疾病危险因素识别和管理提供参考。

采用量子点标记的寡核苷酸探针检测ApoEε4等位基因

目的探讨新型纳米荧光材料量子点标记的寡核苷酸探针在确定基因型中的应用价值。方法采用以CdSe为核心的量子点与ApoEε4基因的等位基因特异性寡核苷酸反应合成探针,对ApoEε4-PT7-PL质粒和正常人标本进行Southern blot检测,并与地高辛标记方法作相应比较。结果量子点与地高辛标记显影结果完全一致。结论量子点在Southern blot检测成像中表现出优良特性,可望替代传统标记物。

小鼠受精卵显微注射影响因素的体外研究

目的:利用体外培养探讨受精卵显微注射的影响因素的作用。方法:获取小鼠受精卵,在其他条件固定的情况下,分别比较不同的注射基因浓度,在CZB(加HEPES)操作液中显微操作时间以及注射前受精卵的质量对显微注射后的胚胎体外培养结果的影响。结果:基因浓度越高,受精卵发育越差,操作时间不同的卵发育无明显差异,质量好的受精卵发育较好,质量差的几乎不发育。结论:选用较低的基因浓度,良好的操作介质CZB(加HEPES),使用质量好的受精卵,会提高显微注射的效率。

(ZrB_2+Al_2O_3+Al_3Zr)_p/A356复合材料的原位直接反应法制备及微观组织(英文)

采用A356-(K2ZrF6+KBF4+Na2B4O7)作为熔体直接反应体系制备(ZrB2+Al2O3+Al3Zr)/A356复合材料。利用XRD、SEM和TEM等测试技术研究复合材料的相组成和微观组织。结果表明,复合材料增强相由ZrB2和Al2O3陶瓷相颗粒和Al3Zr金属间化合物相颗粒组成。ZrB2颗粒易团聚形成颗粒团簇并沿α(Al)合金晶界分布;ZrB2颗粒的微观形貌为六边形,尺寸在50nm左右。TEM研究发现,Al3Zr颗粒以小面形式生长,其长径比约为20;Al2O3颗粒形貌为长方体状和椭圆状,尺寸约为0.1μm。此外,基体与颗粒的相界面干净,无界面反应物生成。

Si、Mg含量及合金元素对A356合金力学性能的影响

研究了Si、Mg含量及合金元素对A356合金力学性能的影响。结果表明,在A356合金中,Si元素和Mg元素在允许范围内适当增加添加量,能促使更多的Mg2Si生成,增加了共晶Si数量,合金在铸态和T6态的力学性能都有一定程度提高;在此基础上添加合金元素,初生α-Al能得到更有效细化,共晶硅变质更充分,合金的力学性能有了极大提高。高Si、Mg含量的A356合金对细化变质处理更加敏感,T6处理后力学性能达到最佳,抗拉强度和伸长率达到320MPa和8.0%,分别比低Si、Mg含量合金提高了18.6%和35.6%。

MiRNA-199a-3p通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖和促凋亡作用

目的:探讨阿霉素对转染miRNA-199a-3p的子宫内膜癌(EC)的作用及机制。方法:构建pSIREN-miRNA-199a-3p过表达质粒并稳定转染内膜癌细胞系Ishikawa、SPEC-2细胞。应用逆转录PCR(RT-PCR)检测miRNA-199a-3p的表达;MTT、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:上调miRNA-199a-3p可显著抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa、SPEC-2的克隆形成能力(P<0.01,P<0.05);miRNA-199a-3p可增强阿霉素对Ishikawa、SPEC-2细胞的生长抑制(P均<0.05)和凋亡诱导作用(P均<0.05);Western blot证实,miRNA-199a-3p可显著下调mTOR及其效应蛋白p70S6K的磷酸化水平。结论:miRNA-199a-3p可能通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖并促进其凋亡,为联合应用miRNA和阿霉素治疗EC提供了实验依据。

严重PDR玻璃体切割术后雷珠单抗注射的效果观察（英文）

目的:对严重增殖性糖尿病视网膜病变的患者行玻璃体切割术后行雷珠单抗注射的效果观察。方法:回归性分析。12例严重增殖性糖尿病视网膜病变患者(12眼)接受睫状体平坦部玻璃体切割术,同时给予硅油、惰性气体或者平衡液的玻璃体腔填充。在手术结束的同时给予雷珠单抗的玻璃体腔注射。结果:随访时间平均为2.75mo。这12眼中分别包括玻璃体积血(1眼);玻璃体积血伴纤维血管化增生(1眼);玻璃体积血伴牵拉性视网膜脱离(3眼);纤维血管化增生伴牵拉性视网膜脱离(2眼);玻璃体积血伴新生血管性青光眼伴牵拉性视网膜脱离(1眼);玻璃体积血伴纤维血管化增生伴牵拉性视网膜脱离(2眼);玻璃体积血伴纤维血管化增生伴新生血管性青光眼伴牵拉性视网膜脱离(1眼);玻璃体积血伴牵拉性孔源性视网膜脱离(1眼)。12眼中,8眼行玻璃体腔硅油填充,2眼行惰性气体填充,2眼行平衡液填充。所有的患者之前均未接受任何治疗。视网膜脱离复位率为10/10(100%)。1眼术后出现前房积血。9眼术后最佳矫正视力较术前提高,2眼无明显变化,1眼较术前下降。OCT检查显示8眼术后未见黄斑水肿。结论:玻璃体切割术后雷珠单抗注射对严重增殖性糖尿病视网膜病变患者有明显的治疗效果:手术成功率明显提高;患者视力显著提高;糖尿病黄斑水肿的发生概率减少;术中及术后并发症的发生率降低。

小鼠MSCs分离体外扩增及向神经样细胞诱导分化的研究

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)的分离、体外扩增及向神经样细胞分化的潜能。方法:取 8-9周小鼠骨髓悬浮至全培养基中,接种于纤连蛋白覆盖的培养器皿中,纯化并扩增mMSCs;检测第9-10代细 胞的生长状态、细胞周期、表型,并进行光镜形态学观察;用二甲基亚砜和丁羟茴醚诱导细胞分化,免疫荧光法检测 其诱导分化前后神经细胞和神经干细胞的特异性标记蛋白的表达。结果:mMSCs为贴壁细胞,表现为成纤维细胞 样,具有梭形、多角形等形态,传至15代仍可维持其形态特征;83%的细胞处于G0/G1期;mMSCs不表达CD45而 表达CD44、CD13,与人MSCs表型一致;诱导分化后,大部分细胞变成双极、多极和锥形,并相互交织成网状结构, 呈现神经细胞和神经干细胞表型。结论:mMSCs可被成功分离及体外扩增培养,并具有同人类MSCs相同的形 态、表型、生长特征和向神经样细胞分化的潜力,是研究细胞及基因治疗小鼠病理模型的良好工具细胞。

试论“PPP”教学法

“ＰＰＰ”教学法是指展示语言材料（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）、对语言进行实践（Ｐｒａｃｔｉｃｅ）、建构成语言能力（Ｐｒｏｏｌｕｃｔｉｏｎ）。这种教学法可用于外语教学中。

小鼠卵母细胞电激活的实验研究

目的寻找用电激活方法作小鼠体细胞克隆的适宜卵龄的卵母细胞及电激活参数。方法在0.6kV/cm、80μs、2个电脉冲(2p)下,比较了注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)后13、16、19、22h卵母细胞的激活率、碎裂+死亡率。在上述相同电脉冲下,统计了经体外培养(IVC)和新鲜的卵龄为16、19、22h的卵母细胞的激活率,碎裂+死亡率;比较了场强分别为0.6、0.9、1.2、1.5、1.8kV/cm,电压时程分别为10、20、40、80、100、150、200μs,2p对注射HCG后16h卵母细胞的电激活效果。结果注射HCG后16、19h卵母细胞电激活率较高,分别为63.6%和76.7%,经体外培养后激活率下降,碎裂+死亡率明显增加。在0.9kV/cm、80/100μs,2p时激活率达70%～80%。在1.2kV/cm、40/80/100μs、2p时,激活率达到了80%左右,碎裂+死亡率低于16%。结论注射HCG后16h的卵母细胞为适宜的小鼠核移植的受体细胞。0.9kV/cm、80/100μs,2p及1.2kV/cm、40/80/100μs、2p为适宜的电激活参数。

聚乙二醇去细胞化组织工程带瓣管道的物理特性

目的探讨聚乙二醇(PEG)法在生物带瓣管道准备中的应用价值,比较PEG去细胞前后带瓣管道的物理特性。方法猪主动脉瓣带瓣管道分为去细胞组和正常对照组,去细胞组用PEG和DNaseⅠ处理,苏木精-伊红染色观察去细胞情况,DNA含量测定,计算去细胞百分率;猪主动脉带瓣管道条置于力学测试仪,测定最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量。结果PEG组去细胞百分率为95.32%,去细胞猪带瓣管道组织中看不到细胞成分;且细胞外基质(ECM)结构保存完整,胶原纤维排列整齐,无明显断裂,仍呈波浪状平行排列,结构紧凑,弹性纤维结构清晰,组织无明显水肿。生物力学检测,与对照组比较最大负荷、最大应力、弹性模量、最大应变等的差异均无显著性意义。结论PEG法去除细胞完全,细胞外基质保存完整,对组织机械性能无明显影响,适于构建组织工程带瓣管道。

聚乙二醇在猪组织工程瓣膜制备中的应用

目的:观察聚乙二醇法在组织工程瓣膜准备中的应用价值,比较聚乙二醇去细胞前后组织工程瓣膜的物理特性。方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学系实验室完成。①实验分组:取猪10只,由于猪主动脉瓣为三叶瓣结构,共取得瓣叶组织30个,麻醉后宰杀取其心脏动脉瓣膜,分为去细胞组和对照组,每组各15个。②实验方法:去细胞组用聚乙二醇和DNase I处理;瓣叶组织放入1kg/L聚乙二醇,室温下浸泡30～45min,振荡器加以振荡;含抗生素磷酸盐缓冲液浸泡24h,反复3次洗脱;以5×104U/L DNase I液浸泡处理1h;对照组仅以含抗生素磷酸盐缓冲液浸泡24h,反复3次洗脱。③实验评估:苏木精-伊红染色、扫描电镜观察去细胞情况,吸光度(A)值,计算去细胞率(%)=(对照组A值-去细胞组A值)/对照组A值×100%。猪去细胞瓣膜条置于力学测试仪测定最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量。结果:纳入猪10只,均进入结果分析。①去细胞组织形态学观察:去细胞组猪瓣膜组织中看不到细胞成分,且细胞外基质结构保存完整,胶原纤维排列整齐,无明显断裂,仍呈波浪状平行排列,结构紧凑,弹性纤维结构清晰,组织无明显水肿。②DNA含量分析:聚乙二醇处理后去细胞百分率为95.32%。③生物力学检测:与对照组比较,去细胞组瓣膜组织最大负荷[(12.586±1.693),(10.242±1.435)N,P>0.05]、最大应力[(2.346±0.342),(1.877±0.572)N/mm,P>0.05]、弹性模量(15.152±1.579,14.549±0.678,P>0.05)、最大应变[(31.685±7.533),(28.118±6.045)mm/N,>0.05]等均无显著差异。P结论:聚乙二醇法去除细胞完全,细胞外基质保存完整,对组织机械性能无明显影响,适于构建组织工程瓣膜。

多光子激光扫描成像技术对活细胞内淀粉样前体蛋白裂解和β-淀粉样蛋白生成的观察(英文)

目的在活细胞内探究淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的裂解和p一淀粉样蛋白(amyloid beta,Aβ)的生成机制。方法利用PCR扩增CFP(编码蓝色荧光蛋白),YFP(编码黄色荧光蛋白)和C99(编码APP最后99个氨基酸)三片段。含有54个碱基(编码APP中间18个氨基酸)的片段54bp由生物公司合成。CFP,YFP,54bp和C99四个片段连入载体质粒pcDNA3.0得到重组质粒pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP和pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP- C99。将这两个重组质粒分别瞬时转染SH-SY5Y细胞。利用多光子激光扫描显微镜观察融合基因的表达,荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测APP的β裂解。免疫细胞化学和多光了激光扫描显微镜观察Aβ的生成。MTT检测转染细胞活性。结果(1)限制性内切酶双酶切消化和测序分析鉴定重组质粒序列完全正确。(2)转染细胞内可以观察剑蓝色平和黄色荧光。(3)在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP转染细胞中存在FRET现象;在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染细胞中观察不到FRET现象。(4)免疫细胞化学和多光子激光扫描显微镜观察到在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染的细胞中有Aβ的牛成。(5)Aβ的沉积广泛分布于细胞内。(6)随着Aβ在细胞内的产生和聚集,细胞的活性逐步下降。结论C99对于APP的β裂解非常重要。早期Aβ首先在细胞内生成并在细胞内形成广泛沉秋。细咆内聚集的Aβ会影响细胞活性,带来不利结果。

RNA干扰对阿尔茨海默病家族性瑞典型APP突变的沉默作用邱

目的诱导小干涉RNA (small interference RNA, siRNA )对阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白家族性瑞典型突变(APPswe)的沉默作用。方法设计一对针对APPswe的寡核苷酸,构建成内源性表达相应siRNA的质粒,与构建的APP-EGFP重组质粒瞬时共转染COS-7细胞,利用GFP报告基因来间接观察siRNA对APPswe的沉默作用。结果siRNA可有效地下调突变型APP,相比APPwt而言,针对突变型APP的siRNA对APPswe的沉默作用更强。结论针对APPswe的siRNA可有效地沉默APPswe基因,并有一定的等位基因特异性。因此,针对APPswe的siRNA将在阿尔茨海默病治疗研究领域扮演重要角色。

人胚胎干细胞分化为神经干细胞诱导方法的对比研究

目的探讨人胚胎干细胞分化为神经干细胞过程中,经拟胚体(embryonic body,EB)法和直接分化法的不同效率。方法人胚胎干细胞常规培养消化后,分为两组:A组,经EB法分化;B组,添加noggin和ITSFn直接分化法。倒置相差显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR检测细胞各阶段标志物,免疫荧光及流式细胞仪观察两组细胞Nestin阳性细胞率。神经干细胞继续分化,免疫荧光、RT-PCR法检测MAP2、GFAP表达。结果RT-PCR检测到OCT4、nestin表达。B组nestin阳性细胞率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01),且诱导周期短于A组。神经干细胞继续分化,得到不同数量的神经元和胶质细胞,MAP2、GFAP分别阳性。结论在体外采用定向分化诱导,人胚胎干细胞不经EB,可直接定向分化为神经干细胞,且诱导效率比EB法高。因此直接分化法是一种经济实用的诱导方法。

聚乙二醇和胰蛋白酶用于猪动脉管道去细胞效果比较

目的比较0.05%胰蛋白酶-EDTA脱细胞方法与聚乙二醇(poly ethylene glycol,PEG)脱细胞方法对组织物理特性的影响和脱细胞程度。方法用聚乙二醇和胰酶-EDTA处理猪大动脉动脉管道。结果PEG组去细胞百分率为95.32%,胰酶-EDTA组去细胞百分率为90.35%,两组比较P<0.05,PEG组细胞外基质(ECM)结构保存完整;与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PEG法处理动脉管道较传统的组织工程去细胞更为有效,优越性明显,细胞外基质保存完整,生物力学特性稳定。

某深基坑工程的可视化仿真施工

介绍以地理信息系统为基础的基坑施工仿真模拟实现过程,包括基本参数的确定、数据库生成、计算结果显示,最后简单介绍天津开发区某特大深基坑工程实例,通过模拟有效的改进设计、避免工程事故,为以后类似的基坑工程提供参考。

管理会计在施工企业中的应用研究

管理会计和财务会计分别承担企业对内、对外的财务数据信息记录、反映、监督等责任。财务会计以向外部利益相关者提供财务信息为目的,进行财务报告的编制,注重真实性的要求;而管理会计则以向内部管理经营者提供决策及预测信息为目的,进行管理报告的编制,更加注重相关性的要求。施工企业是我国企业重要的组织形式,与一般的企业相比,具有生产周期长、资金占用大及生产资料流动性强等异质性特点,这就决定了管理会计在施工企业中的发展和应用具有相对独特性。本文首先对施工企业的发展背景及特点进行了有效界定,接着系统分析了管理会计在施工企业中的主要作用,最后,对管理会计在施工企业中的应用问题及对策进行了有效探讨。

建筑施工行业营改增后的风险控制

我国"营改增"结构性税制经过几年的实施和深化,对我国税制改革和经济发展具有积极的促进作用,尤其是对建筑施工、交通等公共基础性产业。随着营改增"的不断推进,对一些行业的负向影响也日益暴露。本文将以建筑施工行业这一国民经济发展的支柱产业为研究对象,对于研究较少的"营改增"的负向影响的主要方面即带来的影响作为研究点,将简要条理的从建筑施工行业的成本、税务和分包等最主要的三方面梳理"营改增"后给其带来的风险,并在此情境下,规划建筑施工行业的风险控制路径,提出有效的降低风险损失的对策,为合理的规避风险,有效的促进我国建筑施工行业尤其是中小建筑施工企业的长久发展,最终为我国其他涉及"营改增"的行业提供有价值的借鉴。

小企业实施精益生产方式的策略探讨

从当前小企业状况上看,对于生产能力的综合竞争力提高,应该从精益生产管理技术的引入开始。精益生产方式对企业的各方面环节,都能够起到促进作用。本文不仅介绍了精益生产的各个基本情况,同时对精益生产在小企业实行的可行性进行了详尽的分析,结合了当前的具体情况,经过对实际问题的考察,从而得出小企业实施精益生产具体措施,首先从宣传上给予促进,同时对推行各项细则的过程中,应该从细处着手,这样才能保证小企业实施精益生产方式有效性和利益最大化的多面性考虑。