人类β珠蛋白基因簇表达的转录调控

人类 β珠蛋白基因簇的表达具有明显时空调控特征 ,即具有严格的红系组织特异性和不同发育阶段特异性 ,同时尚需精确调控 ,以使α/β珠蛋白链合成比趋向平衡并定量聚合成功能蛋白 k血红蛋白 .因此 ,它是研究真核基因表达调控及基因表达与细胞分化关系的理想模型 .本文拟综述在转录水平人类β珠蛋白基因表达调控研究的进展 ,并对该领域的发展方向进行预测 ,以期逐步深入研究并最终阐明其表达调控机制 .并籍此文报道近年来我们在此领域研究的新成果。

β珠蛋白基因5′远端新沉默子克隆及定点诱变

通过凝胶滞留分析和荧光素酶报告基因检测系统 ,鉴定出人类 β珠蛋白基因 5′旁侧远端帽位上游 - 2 1 32～ - 1 82 2 bp间存在一个活性沉默子片段 (31 0 bp) ,将其亚克隆至p UC- T载体中 ,然后采用人工设计的突变引物 ,将经 DNA足纹分析确定的两个结合位点的核心基序 (β珠蛋白基因帽位上游 - 2 0 1 7～ - 2 0 1 1 bp间的“CTTCCGC”序列和 - 2 0 0 6～ -1 997bp间的“CACTTTATTT”序列 )分别定点诱变为“CTTAAGC”和“CACTTAAGTT”两个突变序列 ,从而构建成两种突变型 31 0 bp片段 ,可用于对活性沉默子位点的结构与功能及β珠蛋白基因表达调控机制的深入研究 .

人同源异型盒基因Hu-1位点的RFLPs研究

用12种限制性核酸内切酶分别对4至104条人类染色体进行酶谱分析,以寻找Hu-1基因附近的限制性酶切多态位点,仅发现了Bg 1Ⅱ酶的一个多态性位点。表现为Bg 1Ⅱ酶谱中除3.6kb片段外,杂合子型尚具6.3及6.6kb两种片段,而纯合子型则只有6.3或6.6kb一种片段。在所检查的104条染色体中6.6kb片段出现的频率为3.88％,而6.3kb片段出现的频率为96.12％。经统计分析,计算出Hu-1基因及其附近的核苷酸变异率为0.0017,大体上与人β珠蛋白基因簇及人α-1-抗胰蛋白酶基因的核苷酸变异率相似。文中对本工作的意义进行了初步讨论。

人类β-珠蛋白基因5’-1559bp上游转录调控区的重组及表达

目的 探寻人类 β -珠蛋白基因 5′ -帽位上游新转录调控元件 ;方法 利用重组DNA技术 ,构建及克隆 3个含有人类 β -基因不同 5’帽位上游片段的荧光素酶报告基因重组载体 (pGL2 -promoter/SB -βRHB734、pGL2 -promoter/SB - βRAB573、pGL2 -promoter/SB - βRHfB2 63) ,分别将其导入Hela细胞中 ,采用 β -半乳糖苷酶报告基因为转移效率内对照 ,空白的荧光素酶基因载体为基础对照 ,进行荧光素酶活性比较。结果 3个基因片段载体构建符合设计 ,其相对抑制活性分别为 59.74 %、80 .97%、79.4 2 % ;结论 初步提示人类 β -基因 5’帽位上游 - 2 132～ - 182 2bp片段及 - 182 2～ - 15559bp片段内可能存在有起负调控作用的顺式作用元件 (抑制子 ) ,而 - 2 2 77bp～ - 2 132bp片段间未检出抑制子或增强子活性存在。此初步结果尚需进一步研究证实和阐明其结构与功能的关系。

人类β—珠蛋白基因5’—1559bp上游转录调控区的重组及表达

目的 探寻人类β－珠蛋白基因5′－帽位上游新转录调控元件。方法：利用重组DNA技术，构建及克隆3人含有人类β－基因不同5'－帽位上游片段的荧光素酶报告基因重组载体（pGL2-promoter/SB-β^RHB734、pGL2-promoter/SB-β^R AB573、pGL2-promoter/SB-β^RHfB263），分别将其导入Hela细胞中，采用β-半乳糖苷酶报告β-半乳糖苷酶报告基因为转移效率内对照，空白的荧光素酶基因载体为基础对照，进行荧光素酶活性比较。结果 3个基因片段载体构建符合设计，其相对抑制活性分别为59．74％、80．97％、79．42％。结论 初步提示人类β－基因5'帽位上游－2132～－1822bp片段及－1822～15559bp片段内可能存在起负调控作用的顺式作用元件（抑制子），而－2277bp～-2132bp片段间未检出报制子或增强子活性存在。 此初步结果尚需进一步研究证实和阐明其结构与功能的关系。

高效单链DNA探针在β－珠蛋白基因表达调控研究中的应用

直接以克隆的逆病毒载体为模板，在反应管中加入适当比例的α－３２Ｐ－ｄＡＴＰ及其他三种ｄＮＴＰ，以单引物进行线性聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，标记与扩增同时进行，经过一轮ＰＣＲ（５０次循环），可得到高度特异及高效的单链ＤＮＡ探针。作者已将其成功地应用于人类β－珠蛋白基因表达调控的研究。

设施农业温室的模式与发展

20世纪90年代，随着我国温室需求市场的需求量不断增大，以及新型温室式样、新型温室材料进入中国市场，国内温室生产企业相继完善了抗老化密封橡胶体、铝合金专用压条、全铝合金通风……

一种简易的预杂交体系

一种简易的预杂交体系分子生物学研究室陈汉春，卿科云，杨友云关键词印迹法，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ；预杂交；核酸杂交；方法核酸分子杂交是一项基本的分子生物学研究技术。在进行核酸分子杂交反应之前，必须用含有某些大分子物质的预杂交液，对经核酸印迹转移（Ｓｏｕｔｈｅ...