变性梯度凝胶电泳技术在食品微生物多样性研究中的应用前景

变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)可以克服传统微生物检测方法的弊端,不依赖于微生物的分离培养,是微生物分子多样性研究的热点技术之一。DGGE技术具有可靠性强、重复性好、易操作、可同时分析多个样品等优点,结合聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),被广泛地应用在微生物群落组成及其遗传信息、多样性及不同种群动态比较分析等方面。本文介绍了DGGE技术的基本原理、操作过程、优缺点,并概述了其在食品微生物多样性分析中的应用,分析了该技术在水产品、酒类、发酵食品、肉制品等领域应用现状。通过分析目前在食品微生物多样性分析中的优点和不足,提出发展方向,最后对DGGE技术在食源性致病菌溯源应用前景进行评述,以期为我国食品安全食源性致病菌快速溯源技术的发展提供文献支持。

分子马达生物传感器在食源性病原微生物检测中的应用

传统的食源性致病微生物检测方法主要是利用培养基对存活的病原微生物进行培养和分离,这种方法因其周期长、程序繁琐已经不能满足快速检测的要求。随着免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展,人们已经建立了较多快速、简便、特异、敏感的检测技术。本文对分子马达生物传感器在食源性病原微生物检测中的应用及其前景进行综述性介绍。

变性梯度凝胶电泳技术在食源性沙门氏菌分子分型中的应用研究

目的建立基于变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术的沙门氏菌分型方法。方法以5株代表性沙门氏菌为供试菌,用引物对GC-rpoB1/ropB3R扩增获得目的片段后,经变性凝胶电泳分离获得谱图,量化分析谱带多样性及均一性,依据菌株谱图量化相似性构建聚类分析图,分析该技术用于沙门氏菌分型的可行性。结果 5个供试菌的PCR-DGGE谱图差异大,其中以标准菌株肠炎沙门氏菌(ATCC9184)的多样性及丰富度最高,标准菌株鼠伤寒沙门氏菌的最低;就谱带相似性而言,分离自鸭腿样品的2株沙门氏菌的相似性最高,戴斯系数高达85.7%,而分属于不同血清型的两个标准菌株则相似度指数为0%;基于谱带相似性建立的聚类树可将供试菌株很好地分为不同簇。结论本研究所建立的基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法准确度和分辨力均较理想,具有一定的理论及实际意义。

快速检测沙门氏菌的荧光免疫试纸的研制

研制一种基于低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条,用于沙门氏菌快速、高敏、兼顾定性及精准定量的检测。采用低噪声激发式荧光染料作为标记,采用免疫层析技术,制备靶向于沙门氏菌的免疫层析试纸条。检测时,采用专用便携式低噪声激发式荧光扫描仪分别扫描质控线和检测线,以检测线荧光强度检测值实现样本的定性及定量检测,并对免疫层析试纸条各项性能进行评价。低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条制备成功,免疫层析试纸条性能检测结果显示,该试纸条特异性强、灵敏度高、检测限可达到0.5×10~3 CFU/mL,是一种新型快速高效稳定的检测方法。该免疫层析试纸条可适用于食品及病理样本中沙门氏菌初筛和即时检测。

冷却猪肉中特定腐败菌生长动力学参数的分析研究

把特定腐败菌接种到无污染的冷却猪肉表面,托盘包装分别置于0、4、7、10、14、20℃的温度下贮藏,研究不同温度时微生物生长的动力学参数及其关系。结果表明,冷却猪肉贮藏时比生长速率和延滞时间是特定腐败菌的主要特性,货架期与延滞时间（λ）呈正相关,相关性最高为0.991,与最大比生长速率呈负相关。随着温度由0℃升高到20℃,延滞时间逐渐变短,生长速度逐渐变快,产品的货架期由158 h降低到24 h。因此,在实际的生产、流通和销售过程中,不能完全保证产品始终处于0-4℃的低温,但是要严格控制温度不能超过20℃。

基于近红外免疫层析技术食源性诺如病毒快速检测方法研究

目的建立一种快速、灵敏检测食源性GⅡ型诺如病毒的近红外免疫层析法。方法采用低噪声激发式荧光染料标记鼠抗诺如病毒单克隆抗体,将诺如病毒多克隆抗体和羊抗鸡Ig Y多克隆抗体喷涂于硝酸纤维膜上分别作为检测线和质控线,制备靶向于诺如病毒衣壳蛋白的免疫层析试纸条,研制检测诺如病毒的近红外免疫层析试纸条。结果采用便携式低噪声激发式荧光扫描仪分别扫描质控线和检测线,以检测线荧光强度检测值实现样本的定性检测,在45 min内即可完成检测。该试纸条与肠道病毒EV71、腺病毒、轮状病毒、甲肝病毒均无交叉反应。结论 GⅡ型诺如病毒的近红外免疫层析法具有良好的特异性和较高的灵敏度。通过效果评价试验发现,与荧光RT-PCR、胶体金法相比较,所建立的近红外荧光法检测时间最短,检测限低于胶体金法。因此,近红外免疫层析法可用于食品中GⅡ型诺如病毒的高效检测,为食品安全监管提供可靠的技术支持。

近红外荧光探针及其在免疫分析中的应用

综合归纳了有机荧光分子、量子点、稀土配合物及单壁碳纳米管共4类重要近红外荧光标记探针的性质、特征,及其在光学性能改进、信号增强等方面的最新发展,分析评述了其在环境污染物及临床诊断标志分子免疫分析中的应用,展望了基于该类探针的免疫层析法在食源性致病菌快速检测中的应用潜能。相对于发射光光谱位于紫外及可见光区的信号分子,近红外荧光探针因其具有信噪比高、组织穿透力强、对基体损伤小等突出的优势,而在生物分析领域备受瞩目。随着化学合成技术的不断发展及新型荧光材料的持续发掘,近年来近红外荧光探针日益丰富,并在无损分析、免疫检测和生物造影等领域被广泛应用。

免疫层析技术在食源性病原菌检测中的应用展望

免疫层析技术是一种建立在层析技术和抗原抗体特异性免疫反应基础上的免疫检测技术。近年来国内外食源性疾病频繁爆发,越来越引起社会的关注。因此建立一种快速、简便且适用于食源性病原菌的检测方法在预防和诊断食源性疾病中具有重大的社会意义。免疫层析技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便及检测速度快等特点,已经被广泛应用于食品领域的检测中。本文综述了6种免疫标记材料在检测不同种类病原菌方面的应用,并对其检测特点进行了介绍。

浅谈海关食品安全快速检测智慧实验室质量控制建设

随着食品快速检测技术的广泛应用,同时面对发展智慧海关的新要求,海关系统逐步探索打造以实现良好实验室质量控制为目标的食品安全快检技术智慧实验室。本文结合食品安全快速检测技术特点,分析了传统实验室质量管理中的常见问题,明确了智慧实验室的构建目标。通过分析建设智慧实验室需求,构建了海关食品安全快速检测智慧实验室质量控制模型,为实验室质量控制中人、机、料、法、环等因素的信息采集、数据管理到最终形成实验室移动便携终端提供了构建思路,为海关系统打造智慧化检测实验室质量管理提供理论和技术参考。

猕猴小肠5-羟色胺内分泌细胞的分布及形态学研究

以免疫组织化学链霉卵白素（ Ｓ Ｐ）法显示猕猴小肠５ 羟色胺（５ Ｈ Ｔ）内分泌细胞，并用 Ｗｅｉｂｅｌ体视学方法对其进行了定量分析。结果表明，此种细胞的密度在十二指肠最高，空肠密度中等，回肠密度最低；５ Ｈ Ｔ 免疫反应阳性细胞多分布在肠腺处，绒毛中较少。该细胞形态多样，大多为锥形、梭形、椭圆形或圆形。有的细胞基底部有突起，后者可伸向腺腔或肠腔，其末端含有５ Ｈ Ｔ 阳性物质。

快速方法在食品微生物检测中的应用

随着国内市场和进出口贸易对食品安全的重视,食品的微生物检测技术也面临着更大的压力.传统检测方法非常繁琐,需要耗费大量的人力物力,而且检测周期长、灵敏度相对较低,难以满足目前国内外对食品安全检测的要求.这就需要将一些先进的快速方法引进到食品微生物的检测中来,由原来的培养水平向分子水平迈进,并向仪器化、自动化、标准化方向发展.

北京地区肉类中沙门氏菌全基因组分型及耐药分析

目的对我国北京地区肉类产品中沙门氏菌进行分离鉴定,基于全基因组测序结果,分析其耐药基因分布情况及亲缘关系。方法以38株沙门氏菌为研究对象,对不同来源的沙门氏菌进行全基因组分析,然后通过测定菌株对15种抗生素的最小抑菌浓度,结合全基因组测序结果分析不同来源的沙门氏菌的耐药特性及多重耐药状况。结果对38株沙门氏菌进行15种抗生素耐药性检测,其中34.2%为多重耐药株,68.4%的沙门氏菌对喹诺酮萘啶酸耐药,42.1%分离株对氨苄西林耐药。基于全基因组测序结果,对38株沙门氏菌进行分型为12种型别,其中88.2%的肠炎沙门氏菌与标准菌株ATCC9184亲缘关系较近。结论全基因组耐药基因和毒力基因与耐药表型有一定的关联,为监控北京地区的沙门氏菌耐药基因和毒力基因的传播方式提供理论基础。

SPC技术在肉及肉制品微生物监控中的应用

本文简要介绍了统计过程控制技术,即SPC技术,并以低温火腿生产中大肠菌群卫生控制为例,详细说明了利用SPC技术对内及内制品生产中微生物监测结果进行分析、利用和反馈的方法。

基于近红外免疫层析技术快速检测食源性甲型肝炎病毒

建立了一种应用近红外荧光免疫层析技术快速检测食源性甲型肝炎(甲肝)病毒的方法。采用近红外荧光染料标记甲肝病毒单克隆抗体,将甲肝病毒多克隆抗体和羊抗鼠Ig G多克隆抗体喷涂于硝酸纤维膜上分别作为检测线(T线)和质量控制线(C线),研制检测甲肝病毒的近红外免疫层析试纸条及配套标准物质。研究表明,所建立的近红外免疫法对检测甲肝病毒具有良好的特异性和较高的灵敏度,最低检测限为1μg/m L,与肠道病毒71型(EV71)、腺病毒、轮状病毒、诺如病毒无交叉反应。效果评价试验发现,与传统检测方法和胶体金法相比较,所建立的近红外荧光法检测时间最短,检测限低于胶体金法。近红外荧光免疫层析技术大大缩短了检测时间,可用于食品中甲肝病毒的高效检测,为食品安全监管提供了技术支持。

单核增生李斯特氏菌近红外快检方法建立与应用

目的建立一种近红外荧光免疫法快速检测单增李斯特氏菌的方法。方法采用近红外荧光染料Dylight800标记单增李斯特菌单克隆抗体,结合免疫侧向流技术制备单增李斯特菌快速检测试纸条。结果整个实验过程仅需45 min,对食品中单增李斯特氏菌最低检测限为500 CFU/mL,与其他5种食源性致病菌均无交叉反应。特异性为89.47%,敏感性为100%。采用近红外荧光免疫层析法和传统方法对30份食品进行检测,结果发现2种方法符合性达93.3%。结论所研制的单增李斯特菌的近红外快检试纸条具有特异性、敏感性较高的特点,适用于食品样本中单增李斯特菌的即时检测。

低温肉制品嗜冷微生物污染状况调查

[目的]了解超市低温肉制品嗜冷微生物污染情况,为食品安全卫生控制提供依据,保护消费者食用安全。[方法]分别于2004年和2006年度对超市中的低温肉制品随机采样,对样品进行嗜冷微生物检测。[结果]在76个样品中有31个被检测出有嗜冷微生物,其中有11个样品的嗜冷微生物数量超过10×104cfu/g。[结论]部分产品的卫生质量和食用安全性令人担心,应慎食临近保质期的即食性低温肉制品,不食用其过期产品。

基于近红外免疫层析技术的食源性副溶血弧菌快速检测方法研究

建立一种应用近红外荧光免疫层析技术快速检测副溶血弧菌的方法。采用近红外荧光标记副溶血弧菌单克隆抗体,将副溶血弧菌多克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体喷涂于硝酸纤维膜上分别作为检测线和质控线,研制检测副溶血弧菌的近红外免疫层析试纸条及配套标准物质。研究表明,所建立的近红外免疫法对检测副溶血弧菌具有良好的特异性和较高的灵敏度,最低检测限为1.2×10~2 CFU/mL,与沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌无交叉反应。通过效果评价试验发现,与传统检测方法相比较,所建立的近红外荧光法检测时间时间最短,检测限与RT-PCR法接近。近红外荧光法在45 min内即可完成检测,可用于食品中副溶血弧菌的高效检测,为食品安全监管提供可靠的技术支持。

近红外免疫层析法快速检测O1群小川型霍乱弧菌方法的建立与应用

目的：建立一种快速检测O1群小川型霍乱弧菌的近红外免疫层析方法。方法：利用近红外免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测O1群小川型霍乱弧菌,制备靶向于O1群小川型霍乱弧菌的免疫层析试纸条。结果：整个检测方法在45 min内即可完成,检测O1群小川型霍乱弧菌的最低检出浓度为1×10~2 cfu/mL。特异性实验表明,该试纸条与O1群小川型霍乱弧菌样品发生特异性反应,与沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单增李斯特菌、副溶血弧菌无交叉反应。与常用的胶体金方法相比,近红外免疫层析法对靶标菌的灵敏度提高了100倍。结论：新研制的O1群小川型霍乱弧菌试纸条具有特异性强、灵敏度高的特点,实验简单、方便,满足口岸现场快速检测的需要,提高检验检疫效率。

北京地区食源性单增李斯特菌基因分型分析

目的对北京地区肉类产品中单增李斯特菌进行全基因组测序,了解不同序列型分布特点及不同菌株间的亲缘关系。方法采用高通量测序技术对110株单增李斯特菌进行全基因组测序、多位点序列分型(MLST)分析,采用相关软件对测序数据进行基因组装、基因预测与功能注释。采用抗性基因数据库(CARD)、毒力因子数据库(VFDB)筛选耐药基因、致病基因。结果110株分离菌株全基因组测序MLST分型共分为17个ST型,其中1株菌为ST新型(STnew1),ST9为优势型。新型STnew1具有大环内酯类、氨基糖苷类、恶唑烷酮类、氯霉素类、四环素类、甲氧苄氨嘧啶类等多种耐药基因,缺失基因prfA、hpt、plcA、plcB、inlC、hlyA。其中20.9%的菌株均携带耐药基因。除6株无害李斯特菌外,其余菌株均携带单增李斯特菌毒力岛(LIPI-1)。结论肉类食品中单增李斯特菌存在多种耐药基因,毒力基因分布以毒力岛(LIPI-1)为主,具有潜在的致病性;相关部门应加强肉类及肉类制品的监管,进一步降低单增李斯特菌所致食源性疾病流行风险。